复合淀粉凝胶电泳同工酶分析

为了克服水解马铃薯淀粉不易获得的困难,并使“水平切片淀粉凝胶电泳同工酶分析”更容易开展,普通的化学试剂马铃薯淀粉(或精制食用马铃薯淀粉)和可溶性淀粉混合物加入适当的添加剂被用来代替水解马铃薯淀粉制作凝胶。试验结果表明：用8～10％的上述混合淀粉(5∶3),添加1％的琼脂粉和2～4％的蔗糖,所制成的“复合淀粉凝胶”可以很好地被切片,并成功地对许多不同类群的植物材料的PGM、PGI、MDH、AAT、SKDH、6PGD、IDH和ME等酶进行染色。     

等位酶淀粉凝胶电泳技术中的几个应引起重视的问题

本文总结了我们在用淀粉凝胶电泳技术进行等位酶分析的实验过程中的一些经验和教训,主要结论是：１）尽管材料不同,对于不同的酶系统,用特定的缓冲液系统常能获得比较理想的效果,如ＤＩＡ,ＧＰＩ,ＨＥＸ,ＳＯＤ和ＴＰＩ用Ｓ６（Ｓｏｌｔｉｓ等,１９８３）;ＡＭＰ用Ｓ８;ＭＤＨ用Ｓ９和ＳＫＤ用Ｗ２（Ｗｅｎｄｅｌ和Ｗｅｅｄｅｎ,１９８９）等。２）用磷酸缓冲液配制ＡＭＰ的染色配方较其它配方效果好。３）当胶染时,使用琼脂替代琼脂糖,染色效果不变而成本更低,谱带扩散更慢。４）不同的提取液可能适用于不同的酶系统,如磷酸ＰＶＰ提取液（Ｓｏｌｔｉｓ等,１９８３）不适用于石荠苎的ＧＰＩ的提取。５）正确选择凝胶和电极缓冲液,Ｓ１虽然适用面广,但效果不一定好,对于位点多和等位基因丰富的材料尤其应警惕,因Ｓ１可能掩盖样品之间的差异。     

植物胚胎学实验方法（七）同时显示胚中贮藏的淀粉,蛋白质和脂类的永久制片法

植物胚胎学实验方法（七）同时显示胚中贮藏的淀粉、蛋白质和脂类的永久制片法胡适宜（北京大学生物系,北京１００８７１）ＭＥＴＨＯＤＯＦＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮＯＦＳＬＩＤＥＳＦＯＲＳＩＭＵＬＡＮＥＯＵＳＤＥＭＯＮＳＴＲＡＴＩＯＮＳＯＦＳＴＡＲＣＨＧＲＡＩＮ...     

黑曲霉突变株分解生淀粉的葡萄糖淀粉酶的提纯及其…

黑曲霉突变株Ｔ－２１产生的葡萄糖淀粉酶具有多型性,在凝胶电泳上呈现很多蛋白质带,酶活力显色表明许多条（５条以上）均表现出淀粉酶活力,酶制剂浸出液通过硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素柱层析,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１５０柱凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱再层析分离纯化到了一型能被生淀粉吸附和水解生淀粉的葡萄糖淀粉酶ＧＡＩ和用凝胶制备电泳分离纯化到一型既不为生淀粉吸附又不水解生淀粉的ＧＡＩＩ。ＧＡＩ被生小麦     

r－干扰素对喉癌细胞系HEP－2HLA－DR抗原和增殖细胞核抗原表达的影响

本实验用人重组ｒ－干扰素（ｒｈｕ－ＩＦＮ）作用ＨＥＰ－２细胞后ＨＬＡ－ＤＲ抗原和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达的检测来探讨ｒ－干扰素对ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达诱导作用及体外抗增殖活性。用单克隆抗体ＣＲ３／４３（抗ＨＬＡ－ＤＲ）和Ｋｉ－６７（抗ＰＣＮＡ）。以链霉素一生物素技术（ＬＳＡＢ）检测ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原和ＰＣＮＡ表达,结果显示：ｒ－ＩＥＮ诱导ＨＬＡ－ＤＲ抗原和抑制ＰＣＮＡ表达其强弱与ｒ－ＩＦＮ剂量有关。资料提示：ｒ－ＩＦＮ不仅对ＨＥＰ－２细胞有细胞毒作用,同时能调节其细胞膜特性,因而在喉癌的治疗中是有效的。     

人主动脉壁硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人主动脉平滑机细胞合成蛋白聚糖的影响

从人正常胸主动脉分离硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）,观察其对体外培养的人主动脉平滑肌细胞（ＨＡＳＭＣ）合成ＰＧ的影响。ＨＡＳＭＣ在不加（对照）或加ＨＳＰＧ（１９μｇ醛酸／ｍｌ）的￣（３５）Ｓ－硫酸钠培养液中培养,以标记ＰＧ。继之,培养液及细胞层的４ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍提取液中的ＰＧｓ经离子交换及凝胶过滤柱层析分离,发现加ＨＳＰＧ后,培养液中的ＨＳＰＧ,硫酸软骨素ＰＧ（ＣＳＰＧ）及硫酸皮肤素－硫酸软骨素ＰＧ（ＤＳＣＳＰＧ）均明显增高,而细胞层中仅ＨＳＰＧ和ＣＳＰＧ增高,且加ＨＳＰＧ后细胞层的ＤＳＣＳＰＧ分子大小有所不同,进一步分析ＤＳＣＳＰＧ中ＤＳ及ＣＳ含量发现加ＨＳＰＧ组ＨＡＳＭＣ细胞层中的ＤＳ％含量略低于对照组。结果提示ＨＳＰＧ可刺激ＨＡＳＭＣ的ＰＧ合成,其可能与血管壁修复及动脉壁脂质沉积有关。     

促乳素抑制培养的大鼠颗粒细胞中卵泡素介导的组织纤溶酶原激活因子的表达

本文主要是观察促乳素（ＰＲＬ）是否曩体外培养的大鼠颗粒细胞中,组织纤溶酶原激活因子（ｔＰＡ）和Ｉ型纤溶酶原激活因子抑制因子（ＰＡＩ－Ｉ）基因表达间的协调作用。我们采用了多种方法,例如ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹等,来检测ＰＲＬ对ｔＰＡ和ＰＡＩ－Ｉ基因表达的作用。结果证实：（１）在离体条件下促乳素（ＰＲＬ）能刺激颗粒细胞（ＧＣ）中ＰＡＩ－Ｉ ｍＲＮＡ的合成,而ＦＳＨ无此作用。但ＦＳＨ可与ＰＲＬ协同增加     

半导体激光对人体穴位外照射及家兔血管内照射后对SOD,LPO及GSH,GS …

活性氧等自由基对机体可以影响许多生理和病理的过程,并认为在诱发某些疾病的机制上起着关键作用。本工作主要以半导体激光取代氦氖激光,体外穴位外照射取代血管内照射（ＩＬＩＢ）以观察激光对体内ＳＯＤ、ＬＰＯ（ＭＤＡ）、ＧＡＨ及ＧＳＨ－ＰＸ的影响。实验结果提示：半导体激光（６５０ｎｍ,１０￣１５ｍＷ,ＣＷ）照射人体“扶突”穴位后,可以即刻非常显著地提高血清ＳＯＤ的活性（Ｐ＜０．００５）。这将有效地即刻提高机     

红树植物秋茄落叶分解碎屑的有效能研究

测定了福建红树植物秋茄各季节落叶分解碎屑中水解有效能（ＨＡＣ）、无丹宁水解有效能（ＴＦＨＡＣ）和化学有效能（ＣＡＣ）的绝对含量和相对含量。测定结果表明：落叶中有效能的绝对含量和它占总能量的百分含量的季均值是：ＨＡＣ４．０６ｋＪ／ｇＤＷ,２０．８５％;ＴＦＨＡＣ３．３２ｋＪ／ｇＤＷ,１６．６８％。在半分解（失重率为５０％）的碎屑中它们降为ＨＡＣ１．７５ｋＪ／ｇＤＷ,９．２５％ ;ＴＦＨＡＣ１．６４ｋ     

糖基化3－磷酸甘油醛脱氢酶的分离纯化及糖基代位点的探讨

应用糖基化蛋白亲和层析技术对兔肌及人红细胞的３－磷酸甘油醛脱氢酶的分离分析表明,兔肌非糖基化ＧＡＰＤＨ的比活为１８０—２００单位,而糖基化ｇＧＡＰＤＨ的为４０—５０单位,并占该酶蛋白总量的４０％。人类红细胞糖基化ｇＧＡＰＤＨ的活力占其总活力的５５％左右。以上结果表明：哺乳动物体内存在糖基化３－磷酸甘油醛脱氢酶。由于（１）糖基化明显影响ＧＡＰＤＨ的活力;（２）糖基化酶活性部位的巯基（Ｃｙｓ－１４９）空间位置发生了改变;（３）糖基化影响活性部位的空间构象及（４）ＯＰＴ对糖基化及非糖基化酶的修饰无论在动力学上还是在ＫＩ淬灭时都有明显差异,因此,糖基化的位点可能与赖氨酸残基有关,并且接近或位于酶的活性部位。     

玉米酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶的分子量研究

本试验利用聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳分步染色法直接对玉米苗期酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶各酶带的分子量进行了比较测定。酯酶同工酶 E_1、E_2、E_3~F、E_3~S、a、b、c 各酶带的分子量分别为<20000,35200、33000、38500、29900、28500、34000道尔顿过氧化物酶同工酶 PX_4~F和 PX_4~S酶带的分子量分别为131000和149000道尔顿。根据酶带在均匀胶和梯度胶中的位置变化对各酶带的生化性质作了初步分析,发现 E_3~F和 E_3~S、PX_4~F 和 PX_4~S 在迁移率上的差异主要是分子量的差异。本文为同工酶的分子量测定提供了一个简便的方法。     

不同产地大熊猫红细胞同工酶的比较研究

本文对饲养在国内几家动物园内的不同性别及不同产地的十六只大熊猫的红细胞乳酸脱氢酶(LDH),苹果酸脱氢酶(MDH),G-6-PD(葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)以及葡萄糖磷酸异构酶(GPI或PGI)四种同工酶进行了淀粉凝胶电泳分析。确定了大熊猫红细胞上述四种同工酶的酶谱,从而在生化水平上对我国不同产地的大熊猫进行了初步研究和探讨。     

螅状独缩虫自然种群同工酶的研究

利用聚丙烯酰氨凝胶电泳技术,对采自武汉沙湖螅状独缩虫自然种群的酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)、乳酸脱氢酶(LDH)和酸性磷酸酶(ACP)四种同工酶酶系进行了研究。实验表明:EST同工酶酶系由六个基因座位(Est1-Est6)控制,其中Est1、Est2、Est3和Est5为杂合基因座位,而Est4和Est6为纯合基因座位。螅状独缩虫物种中EST同工酶四级结构既有单体也有二聚体;MDH同工酶酶系由五个基因座位(Mdh1-Mdh5)控制,其中Mdh2和Mdh3为杂合基因座位,而Mdh1、Mdh4和Mdh5为纯合基因座位。螅状独缩虫苹果酸脱氢酶存在明显的上清液型(sMDH)和线粒体型(mMDH)酶带;LDH同工酶酶系较其他原生动物发达,由5条明显酶带组成。与高等动物研究结果比较分析认为,螅状独缩虫乳酸脱氢酶同工酶酶系可能为一个杂合基因座位AB控制;ACP同工酶酶系简单,为一个纯合基因座位编码。取得的结果为揭示螅状独缩虫酶学特征及其自然种群的遗传特征等问题提供了基础资料。       

五唇兰胚胎发生与几种同工酶变化的相关性研究

用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法研究了五唇兰（Phaius tankervilliae Lindl.）授粉后合子形成过程中同工酶的变化情况。结果发现,有些位点在这一发育过程中始终表达,如Est-2、Est-4、AAT-3;球形胚形成时,Est-1、Est-3消失;Pgi-3只在合子形成时出现。同工酶位点的变化说明五唇兰受精后合子的形成是相关基因时序性表达的结果。     

趋磁细菌WD-1同工酶分析

趋磁细菌在微好氧和好氧条件下生长时,它们在酯酶、乙醇脱氢酶、过氧化物酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸酶、乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、谷氨酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶等同工酶中具有明显不同的酶带或酶活性,呈现酶的多分子形态。     

Genetic variability in arrhenotokous and thelytokous forms ofMesochorus nigripes [Hym.: Ichneumonidae]

Electrophoresis of isozymes was carried out to determine the degree of genetic variability in arrhenotokous and thelytokous forms ofMesochorus nigripes. Although the over-all heterozygosity (H_a) for 12 loci in 10 enzyme systems was 0.187 for the arrhenotokous form and 0.103 for the thelytokous form, a paired comparison t-test showed no significant difference. Nei's coefficient of genetic identity between these 2 forms I=0.982.

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Résumé Afin de déterminer le degré de variabilité génétique chez les formes arrhénotoques et thélytoques deMesochorus nigripes, les isozymes ont été étudiés par électrophorèse. Bien que le taux d'hétérozygotie (H_a), calculé à partir de 12 loci appartenant à 10 systèmes enzymatiques, soit de 0,187 chez la forme arrhénotoque et de 0,103 chez la forme thélytoque, aucune différence significative n'existe selon le test ≪t≫. Le coefficient d'identité génétique de Nei entre ces deux formes est: I=0,982.

     

甘蔗过氧化物酶同工酶分析

以３０个甘蔗品种为材料,用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳,分析甘蔗不同生长时期过氧化物酶同工酶。个别品种还进行同一品种在不同种植地区、同一植株不同叶位的同工酶酶谱比较,结果表明,不同品种的酶谱其酶带分布有明显的区别,但同一品种在不同种植地区、不同生长时期、不同植株、同一植株不同叶位其酶带分布无差异,体现了同工酶作为品种标记具有多态性及稳定性。用单一酶系即可准确、方便地鉴定甘蔗品种。     

同工酶研究在嗜热脂肪芽孢杆菌分类中的应用

嗜热脂肪芽孢杆菌是一个尚未被严格定义的种,它几乎包括芽孢杆菌属内所有能在65℃以上生长的细菌。用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法对151株嗜热脂肪芽孢杆菌的9种酶(G6PDH、LDH、MDH、IDH、AlaDH、LeuDH、过氧化氢酶、过氧化物酶、酯酶)的酶谱进行测定分析。根据其酶谱的差异,可将151株菌株分成两个类型。两型之间8个酶的13或14个基因产物的相异度约为91.8％,两型间的标准遗传距离是2.55。因此这两种类型的细菌也许可以被看作为两个不同的种。     

三平正并殖吸虫发育过程中的同工酶谱

采用同工酶电泳技术对三平正并殖吸虫童虫、早期成虫和后期成虫的葡萄糖磷酸变位酶、葡萄糖磷酸异构酶和葡萄糖－６－磷酸脱氢酶的同工酶进行了研究,结果显示三平正并殖吸虫由童虫向成熟期发育过程中,葡萄糖磷酸变位酶和葡萄糖磷酸异构酶的同工酶谱趋于复杂,酶带数目后期成虫〉早期成虫〉童虫;而葡萄糖－６－磷酸脱氢酶同工酶谱则趋于简单,童虫或未成熟虫体酶带数目较成熟虫体为多。三种酶系统的同工酶排列型式显示,吸虫由童虫     

激光辐照玉米诱发同工酶及染色体变异的研究

利用ＣＯ２激光辐照玉米种子,分析了酯酶同工酶（ＥＳＴ）和过氧化物酶同工酶（ＰＯＤ）及根尖细胞染色体变异,探讨了苗期损伤与染色体和同工酶变异的关系。结果表明：ＣＯ２激光辐照可诱发ＥＳＴ和ＰＯＤ活性和种类的变化,ＥＳＴ３和ＰＯＤ３随辐照剂量增加活性逐渐减弱以致消失,在根尖细胞中可观察到微核、染色体落后和染色体桥等变异,其畸变率的剂量效应可用Ｙ＝ａ＋ｂｘ来描述。Ｍ１种子发芽率、苗高与同工酶变化大小表现出