抗出血病草鱼子代抗病力的分析

草鱼出血病（Grasscar’phemorrhagicvirus,GCHV）是草鱼鱼种养殖阶段危害最为严重的病毒性疾病I’一’］,抗出血病草鱼新品种的培育是解决该病危害的根本途径［‘］。作者等从“七五”开始,开展了基因转移进行草鱼抗出血病育种的研究,建立了鱼类总DNA介导基因转移的实验模型I’］。将抗草鱼出血病的团头勤的总DNA转移到草鱼的受精卵,用GCHV人工攻毒方法,筛选出一批抗出血病草鱼个体。这批抗病个体已经成熟并繁殖子代。l材料与方法1．回实验草鱼实验用亲代草鱼为1990年经转移团头饬总DNA后,经GCHV攻毒筛选存活的草鱼【Cten…     

稀有鮈鲫对草鱼出血病病毒敏感性的初步研究

本文报道稀有鲫对草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）的敏感性。ＧＣＨＶ是草鱼出血病的病原,用ＧＣＨＶ人工感好１－６月龄的稀有鲫,在水温２２－３２℃时能导致稀有鲫出现出血病症状。在水温２８℃时,病鱼在ｌｄ内死亡,潜伏期为５ｄ,发病高峰期在感染后第６－８ｄ。ＧＣＨＶ能在稀有鲫体内传代,并诱导８０％以上的稀行鲫患病死亡。将人工感染ＧＣＨＶ的稀有鲫病鱼组织超薄切片,电镜观察,发现在肠道、脾脏、肾脏等组织中存在大小与形态和ＧＣＨＶ相似的病毒颗粒。从稀有鲫出血病病鱼组织中纯化病毒,免疫电镜观察,发现病毒颗粒能被ＧＣＨＶ的特异性抗体聚集成团。由上可知,稀有鲫出血病是由ＧＣＨＶ感染所致,稀有鲫对ＧＣＨＶ是敏感的,可以作为草鱼抗出血病育种的模型。     

下咽齿标本制作

在一些常见的硬骨鱼,如鳙鱼、鲢鱼、草鱼、青鱼、鲫鱼、鲤鱼、扁鱼等的最后一对鳃弓上不具鳃片,而着生下咽齿。如青鱼以吃螺蛳为主,它的下咽齿象磨盘,强大而有力;草鱼主要吃草,它的下咽齿象带锯齿的镰刀,利于切断水     

草鱼出血病病毒基因组体内转录的研究

本文采用α-[~(32)p]ATP标记物在鱼肾细胞系(CIK)系统中,对草鱼出血病病毒(Grass carp hemorrhage virus,GCHV)基因组进行了体内转录的研究。通过放线菌素D抑制宿主细胞基因组的转录活动,从感染病毒细胞中分离出病毒的mRNA,分别采用液相杂交和Nortbern blot方法检查病毒mRNA的转录情况。试验结果表明,GCHV含有内源性转录酶,其基因组的转录活动是在病毒感染细胞后4小时开始,由早期基因所转录,8—10小时获得晚期基因的转录产物。这些mRNA的大小、数目大体上与病毒基因组一致。     

三株草鱼出血病病毒免疫原性的比较

从湖南邵阳、湖北仙桃、武汉南湖地区分离到的三株草鱼出血病病毒(GCHV873、GCHV875、GCHV876),分别对家兔进行免疫,并测定了它们在家兔体内形成抗体的水平以及这些抗体对相应抗原的中和能力。实验结果显示:GCHV873产生抗体滴度比GCHV875高一倍,较GCHV876高8倍;其抗体的中和效价分别是1:1778(10~(-3.25))、1:386(10~-(2.59))和1:181(10~-(2.25))。上述结果表明:GCHV873的免疫原性是三个分离株中最强的一个毒株。     

稀有Ju鲫对草鱼出血病病毒敏感性的初步研究

本文报道稀有Ｊｕ鲫对草鱼出血病病毒的敏感性。ＧＣＨＶ是草鱼出血病的病原,用ＧＣＨＶ人工感染１－６月龄的稀有Ｊｕ鲫,在水温２２－３２℃时能导致稀有Ｊｕ鲫出现出血病症状。在水温２８℃时,病鱼在１ｄ内死亡,潜伏期为５ｄ,发病高峰期在感染后第６－８ｄ。ＧＣＨＶ能在稀有Ｊｕ鲫体内传代,并诱导８０％以上的稀有Ｊｕ鲫患病死亡。将人工感染ＧＣＨＶ的稀有Ｊｕ鲫病鱼组织超薄切片,电镜观察,发现在肠道,脾脏,肾脏等组织     

草鱼出血病病毒人工感染稀有(鱼句)鲫出血病鱼主要器官组织的超薄切片观察

用电子显微镜观察了稀有(鱼句)鲫出血病(Hemorrhage of Gobiocypris rarus)鱼的病理切片及对照鱼的超薄切片。在对照鱼的鳃、肠道、肾脏、脾脏、肌肉和肝脏中没有见到任何病毒颗粒。在病鱼鳃血管内皮细胞质中观察到聚集的直径70nm左右的GCHV颗粒,说明鳃是GCHV侵袭的主要器官之一,并讨论了鳃对GCHV敏感在GCHV传播中的意义。还在病鱼肠道,肾脏中观察到成片的病毒颗粒,它们也是GCHV侵袭的主要组织。在病鱼脾脏的电子密度低的细胞质中观察到散在的病毒颗粒。很少见到病毒聚集体,脾脏中的病毒可能是脾脏的吞噬细胞吞噬而来。作者认为在病鱼组织中观察到的大小不同的病毒颗粒是处于不同成熟阶段的GCHV。     

人IFN-α诱导草鱼肾细胞对草鱼出血病毒抗性作用的研究

人α-干扰素是一种广谱抗病毒的生物活性物质,对各种病毒性疾病均有较显著疗效1。草鱼出血病是由草鱼出血病毒(Hemorrhagic virus of Grass carp, GCHV)引起,该病流行范围广,发病季节长,发病率及死亡率高,给水产养殖业带来很大的损失。 近年来应用干扰素防治草鱼出血病已有研究报道。2本试验在细胞水平上进一步研究了Human-IFN-α对GCHV的抗性作用,为进一步从分子水平上探讨草鱼出血病防治机理累积资料。       

几种鱼类细胞对草鱼呼肠孤病毒敏感性的研究

比较研究了鲫鱼异倍体细胞系(CAB-80)、团头鲂尾鳍细胞系(BCC)、大鳞副泥鳅雌核发育单倍体胚胎细胞系(PHC)、草鱼胚胎细胞系(GCE)、草鱼尾鳍细胞系(CCRF-2)、草鱼肾细胞系(CCK—S4)及其四个克隆对草鱼呼肠孤病毒(CCRV)的敏感性。证实了这些细胞(PHG除外)在不同程度上对GCRV敏感,其中以GCK-84的敏感性最强。这表明,在体外培养条件下,GCRV并无严格的种族特异性。用经GCK-84传代的病毒感染草鱼种,能复制出典型的出血病症状。用GCK-84检测了病毒在GCK-84、GCRF-2、CAB-80、BCC和PHG中的滴度(TCID50/mt),其值分别为8．24,7．36,2．90,2．15和1．33。4个克隆与肾细胞系对病毒的敏感程度亦不尽相同,其滴度在6．3到9．32之间变化。上述结果对细胞工程抗病育种预示有较大的潜在意义。在电镜下可见GCRV对被感染的细胞造成了严重的破坏。病毒为平均直径58nm的球形颗粒,具有一个高度电子密度的核心,平均直径约为38nm。病毒在细胞中的分布方式有三种-即散布于细胞质中的、呈晶格状包于一膜状结构中的和整齐或不整齐地聚集在一起但无膜包裹的。     

草鱼出血病病原的研究

草鱼出血病是草鱼种的一种严重疾病,通常在水温25—30℃时发病,其症状表现为全身性组织器官充血。其病原悬液能通过赛氏滤器(Seitz,EKS石棉滤板),能在草鱼种体内及草鱼鳍单层细胞中传代繁殖,在草鱼肌肉单层细胞和性腺单层细胞中感染并出现细胞病变。病原悬液对脂溶剂乙醚敏感,耐热性强,对四环素类药物不敏感。试验结果,我们认为草鱼出血病的病原是病毒。     

二龄草鱼脾脏、肝脏组织高表达甘露糖结合凝集素mRNA

Innate immunity is expected to be very important in fish. Mannose-bingding lectin (MBL) participates in the innate immune system as an activator of the complement system and as an opsonin after binding to certain carbohydrate structures on microorganisms. In this experiment, total mRNA was isolated from spleen, liver, gills, thymus, head kidney and kidney of adult and immature grass carp Ctenopharygodon idllus. The cDNA of MBL was obtained by RT-PCR using total mRNA from the spleen of carp as template. Such cDNA was labled with ^32p and used as probe for Northern analysis, and autoradiographic signals were quantified by densitometry analysis. The results showed that MBL was high expressed in the spleen and liver and low in gills, thymus, head kidney and kidney of adult grass carp, and MBL was much lower expressed in spleen and liver of immature grass carp than those of adult grass carp. The results might partially explain why immature grass carp are vulnerable to grass carp hemorrhage virus (GCHV) whereas adult grass carp are not.This suggested that MBL mav be an imoortant anti-GCHV factor [Acta Zoologica Sinica 50 (1): 137 - 140. 2004].     

草鱼出血病病毒873株基因组外发现缺损性干扰颗粒的亚基因组成份

草鱼出血病病毒基因组由 11条dsRNA片段组成。最近在研究其基因组时发现 ,在病毒基因组外存在许多核酸成份 ,但在核苷酸数量上少于基因组成份 ,表现为较小分子量的RNA片段。在完整地克隆了这些片段的全长cDNA后 ,测定了其中两个克隆的序列组成 ,发现它们为病毒基因组经剪切后的部分片段 ,已经重新装配 ,而且都含有原基因组某一片段 3′端和 5′端的保守区和倒转重复区 ,缺失中间部分。根据其特点来看 ,它们应为目前病毒学研究的重要材料———缺损性干扰颗粒的亚基因组成份。     

草鱼出血病病毒的血清学鉴定

草鱼出血病病毒(GcHV)具有弱的凝集人“O”型红血球的能力。其抗体与呼肠孤病毒、轮状病毒不发生免疫反应,说明此病毒与上述病毒无共同的抗原关系。     

草鱼同工酶发育遗传学研究——Ⅰ.不同组织器官的同工酶分析

采用垂直淀粉凝胶电泳及特异性组织化学染色技术,研究了草鱼成体脑、眼、心、肾、肌、肝等6种组织中的6种同工酶系统(LDH、MDH、GDH、ADH、LDH、EST)的分化表达谱式。结果表明,草鱼的同工酶系统具有明显的组织特异性。与绝大多数硬骨鱼类相比,草鱼的LDH、m-MDH和ADH同工酶具有特殊的表达谱式:m-MDH和ADH均由两个基因座位编码;肾脏在LDH-A_3B与LDH-A_2B_3之间多出1条LDH酶带(LDH-X)。本文还讨论了草鱼同工酶的遗传基础和亚基组成,以及本实验的某些结果与其他作者的结果不相符的原因。     

草鱼出血病病毒人工感染稀有鼩鲫出血病鱼的组织病理观察

草鱼出血病病毒人工感染稀有鲫出血病病鱼组织病理切片观察,发现肌肉系统血外渗,出现微血栓,红血球浸润于肌纤维之间;鳃小片上皮细胞增生和肥大导致相互融合,血外渗和红血球裂解,形成微血栓和血泡;肠上皮细胞脱落,红血球散布于整个肠壁;肝细胞肥大和细胞实质空泡化,细胞间隙增大;脾组织黄褐色的“小结”增多。而对照鱼未出现上述变化,说明这些病理变化确由ＧＣＨＶ感染所致。     

转基因抗病草鱼研究进展

草鱼是我国淡水养殖的著名品种。草鱼的疾病严重阻碍着我国水产业的发展。通过分析当前国内外转基因技术培育抗病草鱼的现状,对今后转基因抗病草鱼的研究作了展望。     

鱼类培养细胞干扰素的诱导

对紫外线灭活的草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）－Ｆ９株,在几种鲤科鱼类培养细胞中诱导产生干扰素的能力及影响干扰素产量的各因素进行了研究。纯化的ＧＣＨＶ在紫外线照射５分丧失感染性,但获得了在ＣＡＢ等５种鲤科鱼类培养细胞中高铲诱导产生干扰素的能力。干扰素的诱导需要病毒高复数感染细胞。干扰素主要在诱导后１４小时时内产生。培养上清中的新生牛血清对干扰素的产量有抑制作用。而在ＰＨ６．２－７．８范围内对干扰素产量无     

寄生在鲤鱼及草(鲩)鱼的鱊头槽绦虫的多样性

研究了寄生于鲤鱼及草(鲩)鱼的鱊头槽绦虫(Bothriocephalus acheiloghathi)的多样性.作者在1986-2000年收集材料,遍及中国19个省及自治区.在江苏等5省只收集到其它寄生虫的材料,故结果未列入附录1和2.研究结果表明,鲤鱼及草鱼的寄生鱊头槽绦虫的地理分布截然不同.寄生于鲤鱼的鱊头槽绦虫分布于黄河水系的西北地区及黑龙江水系的东北各省及长江上游的四川、云南和贵州,南方各省的鲤鱼不感染这种绦虫.寄生于草鱼的鱊头槽绦虫分布于沿珠江水系的广东、广西及闽江水系的福建,感染池塘的幼龄草鱼,天然水体中未发现感染阳性的草鱼.交义感染试验表明,寄生在这两种鲤科鱼类的头槽绦虫有极强的宿主特异性,草鱼感染的头槽绦虫一年内大部分时间排出发育完全的胚胎卵,而鲤鱼感染的头槽绦虫排出的虫卵多为早期分裂卵,甚至在盛夏,水温在28℃-30℃的情况下也无例外.虫卵发育程度不同,卵的孵化期也有差异.在同等温度28℃-29℃时,草鱼头槽绦虫虫卵的孵化期为1.69±0.17 d;鲤鱼的头槽绦虫虫卵的孵化期为3.98±0.3 d.此外,种群结构也有明显区别,草鱼的头槽绦虫在繁殖季节,体长＜1 cm的幼虫占种群的主体,年终时绦虫全部从宿主体内消失,生活周期从初染至消敛约1年;鲤鱼的头槽绦虫主体全年皆为孕节成虫,在Ⅱ龄商品鱼中继续繁殖.本研究表明,鲤鱼及草鱼的寄生鱊头槽绦虫显示的多样性是因长期适应不同生活环境从而演化为两个不同的亚种[动物学报 53(3):470-480,2007].