人肝刺激因子对大鼠实验性慢性肝损伤的保护作用

从健康孕妇水囊引产４─６个月龄的胎儿取肝,采用ＬａＢｒｅｃｑｕｅ方法提取人肝刺激因子（ｈＨＳＳ）。经３Ｈ－胸腺嘧啶核苷参入肝ＤＮＡ法测定其生物活性。表明此ｈＨＳＳ可刺激肝细胞ＤＮＡ合成。采用皮下注射ＣＣｌ４和饮用１０％乙醇来制备慢性肝损伤动物模型,观察了ｈＨＳＳ的保护肝脏作用。结果表明：ｈＨＳＳ可使ＣＣｌ４－乙醇所致慢性肝损伤大鼠的死亡率、血清谷丙转氨酶水平、肝组织中羟脯氨酸含量的升高以及肝组织中丙二醛的含量降低。肝组织切片表明：ｈＨＳＳ能减轻肝组织的损伤程度,促进肝细胞再生,并能明显防止肝纤维化的形成和发展。可见,ｈＨＳＳ对ＣＣｌ４－乙醇所致的慢性肝损伤大鼠有明显的保护作用,其机制可能与促进肝细胞再生及抑制肝细胞膜的脂质过氧化有关。     

大鼠再生肝抗四氯化碳损伤作用—粗面内质网的形态计量学研究

电镜形态计量学证明,大鼠再生肝对ＣＣｌ４损伤有明显抵抗作用。根据肝小叶外带肝细胞体密度、粗面内质网面密度、比表面及单位膜面附着核糖体数等参量的测算,再生肝接受ＣＣｌ４后肝细胞损伤减轻,粗面内质网不肿胀,膜面积及附着的核糖体数比正常肝ＣＣｌ４损伤后的相应数值增加,假手术动物对ＣＣｌ４肝损伤也有抵抗作用。这种细胞保护机制可能与应激与肝细胞内金属硫蛋白合成增加有关。     

亚硒酸钠对四氯化碳损伤草鱼肝原代细胞与肝组织的保护作用

不同浓度四氯化碳（ＣＣｌ４）对草鱼肝原代细胞的损伤实验中,ＣＣｌ４浓度为１０μｌ／ｍｌ可引起细胞血清中丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）、天门冬氨酸氨基转移酶（ＡＳＴ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）逸出量与细胞破损率显著增高,培养液中添加亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）０．２μｇ／ｍｌ,则可降低ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ的逸出量,减轻细胞破损程度。Ｎａ２ＳｅＯ３保护实验中,Ｎａ２ＳｅＯ２＋ＣＣｌ４组预先腹腔注射（ｉｐ）０．１ｍｇ／ｋｇ．ｂｗ连续三日,末次ｉｐＣＣｌ４混合液１ｍｌ／ｋｇ．ｂｗ,２４ｈ内肝组织超氧物歧化酶（ＳＯＤ）相对活性比ＣＣｌ４组提高达９１．５％,第七日仍提高达５４．５％,与对照组的水平基本接近;血清中丙氨酸氨基转氨酶（ＡＬＴ）水平逐渐降低。本实验还观察到Ｎａ２ＳｅＯ３可引起肝脂质过氧化物显著降低,肝微粒体蛋白含量与细胞色素Ｐ—４５０活性升高;组织切片观察显示肝组织损伤程度减轻,７２ｈ后细胞核增多。表明Ｎａ２ＳｅＯ３可提高草鱼肝清除自由基能力,增强肝脏解毒功能。     

大鼠再生肝抗CCl4损伤与其线粒体呼吸活性变化的关系

本工作观察了肝部分切除(68%)后96h 大鼠再生肝的抗 CCl_4损伤作用,并用氧电极法测定了再生肝线粒体的呼吸活性。结果如下: (1)CCl_4(50%,10ml/kg)引起的动物死亡率,肝切除组大鼠较假手术组明显降低;(2)CCl_4(50%,5 ml/kg)损伤后,肝切除组大鼠血清胆红素、血清谷丙转氨酶(sGPT)均明显低于假手术组,组织学检查损伤程度也明显减轻;(3)无论是否伴有 CCI_1损伤,肝切除组大鼠肝线粒体的呼吸活性均强于假手术组,且肝线粒体呼吸活性的变化与血清胆红素、sGPT 及肝组织损伤程度的改善是一致的。上述结果提示:再生肝线粒体呼吸活性增高,同时不易受 CCl_4损伤,可能在再生肝抗 CCl_4损伤机制中起一定作用。     

热休克蛋白、蛋白水解酶和磷酸酶在大鼠肝再生中的含量和活性变化

本文以２／３肝切除（ｐａｒｔｉａｌ ｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ,ＰＨ）大鼠为模型,探讨了ＰＨ后酸性和碱性磷酸酶（ａｃｉｄ ａｎｄ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｓ,ＡＣＰ和ＡＫＰ）,构成性热休克蛋白７０／诱导性热休克蛋白６８（ＨＳＣ７／ＨＳＰ６８）,酸性和中性蛋白水解酶在肝再生期间（０－１４４ｈ）的动态变化。结果显示,在肝切除后的肝再生期间;（１）ＡＣＰ和ＡＫＰ均出现两个活性高峰（４和４８ｈ     

小鼠肝部分切除模型

小鼠肝部分切除模型是在经典的大鼠模型基础上发展起来的。随着显微外科技术的发展和小鼠腹部手术围手术期管理的完善,快速、可靠、重复性高的小鼠模型得以建立。因为成本较低,且存在大量为研究肝切除后肝再生的转基因小鼠,小鼠已经成为研究肝再生的重要动物模型。肝再生的调控相当复杂,且不是由单一因素控制的,因此需要多种类的转基因小鼠进行肝切除后肝再生研究来明确各因子在肝再生过程中的确切作用与机制。通过小鼠肝切除后肝再生的研究,目前已证实的参与调控肝再生的细胞因子和生长因子有:肝再生增强因子(ALR)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白介素6(IL-6)、白介素1(IL-1)、肝细胞生长因子(HGF)、去甲肾上腺素(NE)、卵泡抑素(FS)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β-1(TGF-β-1)等。     

川芎嗪与秋水仙碱抗肝纤维化的实验研究

实验ＳＤ大鼠随机分为正常组、ＣＣｌ４组、川芎嗪组和秋水仙碱组。实验结果显示：与ＣＣｌ４组比较,川芎嗪组血清ＡＬＴ、丙二醛（ＭＤＡ）、Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）、透明质酸（ＨＡ）及肝组织ＭＤＡ明显减低,肝组织超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性显著提高,胶原纤维增生程度显著减轻,结蛋白（Ｄｅｓｍｉｎ）阳性细胞显著减少。两治疗组之间,血清ＰＣⅢ、ＨＡ及肝组织Ｄｅｓｍｉｎ阳性细胞数和胶原纤维增生程度无显著差异。表明川芎嗪有明显保护肝细胞、抗脂质过氧化和肝纤维化作用。秋火仙碱抗肝纤维化效应与之相似,但无抗脂质过氧化和保护肝细胞作用。     

重组人肝细胞生长因子抗四氯化碳染毒小鼠肝的保护效应

为检测重组人肝细胞生长因子（ｒ－ｈＨＧＦ）的保肝作用,本工作观察到ｒ－ｈＨＧＦ降低ＣＣｌ４染毒小鼠血清ＡＬＴ和ＡＳＴ升高的幅度,减轻肝组织受损的程度和防止肝细胞器的破坏,而且,ｒ－ｈＨＧＦ的这种保肝效应所需剂量极小,为ｎｇ级。根据上述资料推测,ｒ－ｈＨＧＦ为一极有效的保护小鼠肝抗ＣＣｌ４损伤的生长因子     

四氯化碳损伤成年大鼠肝细胞后原癌基因（c－fos／c－jun）表达的观察

用四氯化碳（ＣＣｌ４）损伤正常大鼠后,采用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法和免疫组化法观察肝细胞原癌基因（ｃ－ｆｏｓ／ｃ－ｊｕｎ）的表达。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法表明,当成年大鼠的静息期肝细胞受到ＣＣｌ４损伤性刺激后,ｃ－ｆｏｓ／ｃ－ｊｕｎ产物（Ｆｏｓ和Ｊｕｎ）水平升高,在ＣＣｌ４处理后３０ｍｉｎ开始升高,在４ｈ时消失。８ｈ后Ｆｏｓ／Ｊｕｎ再度出现,并持续２４ｈ以上。ＩＣＣ法表明,Ｊｕｎ阳性细胞为靠近肝中央静脉区的肝实质细胞。根据上述资料推测,肝受ＣＣｌ４损伤后肝细胞的原癌基因ｃ－ｆｏｓ／ｃ－ｊｕｎ出现即时的与滞后的两次表达,这与肝细胞进入细胞周期有关,这种基因表达也许可作为肝再生过程中识别特殊体液因子的标志。     

简易高效的小鼠肝再生模型的建立

目的建立一种简易、高效的小鼠2/3肝切除方法。方法取3月龄健康昆明小鼠,进行肝顺次结扎切除手术,观察术后小鼠生存和肝组织再生状况。结果通过顺次结扎切除左小叶和中央小叶,可在15min内完成小鼠2/3肝脏切除手术,术后成活率为90%,术后42h时可见肝组织再生,术后7d肝脏可恢复75%以上的肝组织原质量。结论通过分叶顺次肝切除术,可准确量化肝脏切除的程度,简便易行、成功率高,为肝再生的机理研究提供了理想的动物模型。     

肝细胞生长因子对四氯化碳损伤肝细胞的保护作用及相关基因表达

利用无血清原代培养大鼠肝细胞,观察重组人肝细胞生长因子（ｒｈＨＧＦ）对ＣＣｌ４染毒肝细胞的保护作用。结果表明：（１）ｒｈＨＧＦ（５ｎｇ／ｍｌ）预自理后可显著提高ＣＣｌ４（１５ｍｍｏｌ／Ｌ）染毒肝细胞存活率,降低细胞内丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）、Ｋ＾＋的漏出;（２）表皮生长因子（ＥＧＦ,５０ｎｇ／ｍｌ）和ｒｈＨＧＦ（５ｎｇ／ｍｌ）合用预处理肝细胞,ＣＣｌ４染毒后细胞内ＡＬＴ、Ｋ＾＋漏出较ｒｈＨＧＦ和     

四氯化碳中毒对大鼠离体再生肝细胞钾离子外漏的影响

本工作用三种剂量四氯化碳(CCl_4,10,15和20mmol/L)损伤正常大鼠离体肝细胞,分别在5,10,15和20min测定细胞内K~+和GPT漏出量。实验观察到细胞内K~+和GPT漏出量与CCl_4染毒的剂量和时间有明显关系,而且K~+漏出量较GPT更能灵敏地反映细胞的损伤程度;用中等剂量CCl_4(15mmol/L)损伤离体再生肝细胞20min后,细胞内K~+漏出的变化百分数明显低于正常肝细胞。这些结果表明,大鼠离体再生肝细胞具有较强的抗CCl_4损伤作用,其机制可能与再生肝细胞膜稳定性较强有关。     

人肝刺激因子对CCl4损伤大鼠离体肝细胞内钙和钾离子稳态的影响

本工作从自愿流产孕妇的胎儿取肝,按照LaBrecque法提取人肝刺激因子(human hepaticstimulator substance,hHSS)。用荧光探针Fura-2/AM测定离体肝细胞内游离钙,用离子分析仪测细胞染毒(四氯化碳CCl_4)前后基质中钾离子含量,观察hHSS对染毒肝细胞内Ca~(2+)和K~+稳态的影响,并测定肝细胞存活率和细胞内转氨酶(ALT)的漏出作为佐证。结果表明,人胎肝中含有hHSS,hHSS能提高离体肝细胞的存活率,维持肝细胞内游离钙的相对恒定,减少细胞内钾离子和ALT的漏出。这些结果提示,hHSS可保护肝细胞内钙,钾离子稳态和肝细胞膜的稳定,从而加强大鼠离体肝细胞抗CCl_4的损伤。     

在原代培养的大鼠肝细胞观察消炎痛的细胞保护作用

我们曾观察到消炎痛预处理能明显减轻四氯化碳和半乳糖胺对大鼠的肝损伤作用,本工作采用原代培养的大鼠肝细胞进一步观察了这一现象。结果表明,经消炎痛整体处理后分离的大鼠肝细胞,在原代培养的条件下,对四氯化碳的损伤仍然具有明显的抵抗作用,表现为细胞内酶的漏出少于对照组。正常大鼠离体肝细胞在原代培养条件下用消炎痛处理,在相当大的剂量和相当长的时间范围内未出现明显的抗损伤作用。结果提示:消炎痛整体处理可使肝细胞本身获得抗损伤的能力,而这种抗损伤能力的产生可能有赖于肝细胞外其它因素的参与。     

乳酸菌源有机硒对肝损伤小鼠脾脏脂质过氧化和NK细胞活性的保护效应研究

本文通过研究乳酸菌源有机硒干预CCl_4致肝损伤小鼠脾脏NK细胞活性和脂质过氧化反应的变化,探讨该有机硒在抗损伤保护过程中的效应及其机制。分别选用60只健康成年小鼠,雌雄对半,随机分成对照组(C组),有机硒组(Se组),CCl_4组、CCl_4-有机硒保护组(CCl_4-Se组),每组15只。通过腹腔注射CCl_4诱发肝损伤后,分别在第2、4周检测脾脏NK细胞活性及其组织匀浆GSH-Px、CAT、SOD活性和MDA含量变化、结果显示,在整个实验期内,C组、Se组和CCl_4-Se组脾组织匀浆GSH—Px、CAT和SOD活性均高于或明显高于CCl_4组,Se和CCl_4-Se组与C组比较除SOD活性在第4周有明显升高外均差异不显著;CCl_4组小鼠脾脏MDA含量均显著高于C组、Se组和CCl_4-Se组,而CCl_4-Se组与C组接近,Se组较CCl_4-Se组和C组低;Se组NK细胞活性最高,第4周明显高于C组,CCl_4组最低且低于或明显低于CCl_4-Se、Se和C组,CCl_4-Se组与C组无明显差异。结果提示,乳酸菌源有机硒能够提高正常机体抗氧化能力,在干预肝损伤过程中,可以通过改善和提高脾组织抗氧化酶活性及NK细胞活性发挥积极有效的作用。     

Protective effect of gossypitrin on carbon tetrachloride-induced in vivo hepatotoxicity

Carbon tetrachloride (CCl4) is a known environmental biohazard, which induces lipid peroxidation (LPO) and oxidative damage in rat liver. In this study, the hepatoprotective effect of Gossypitrin, a flavonoid extracted from Hibiscus elatus S.W, was investigated against the CCl4-induced in vivo hepatotoxicity. The levels of malondialdehyde (MDA) were assayed as an index of LPO and the levels of catalase (CAT) activity as a biomarker of oxidative damage. Leakage of aspartate aminotransferase (ALT) and lactate dehydrogenase (LDH), liver weight/body weight ratio as well as morphological parameters were used as signs of hepatotoxicity. CCl4 (1 ml/kg), intraperitoneally injected into rats, caused increased MDA production and CAT activity, and also a significant ALT and LDH leakage as compared to levels of these constituents in the control group. Changes in morphology, including steatosis, cells forming balloon cells and necrosis were evaluated in the hepatotoxin-induced damage. Treatment of rats with Gossypitrin (3.98, 5.97 and 8.95 mg/kg) 2 h before and 2 h after CCl4 injection, protected hepatocytes against cell injury induced by CCl4 and its efficacy as an antioxidant was similar to vitamin E (used as a reference antioxidant). These results are consistent with the conclusion that the toxicity of CCl4 is due to LPO and the generation of reactive oxygen species (ROS), and that Gossypitrin's protective effects relate to its direct radical scavenging ability and other antioxidative processes induced by its structure.     

中药提取物水苏糖对实验性肝硬化大鼠血浆内毒素及肠道菌群的影响

目的探讨中药提取物水苏糖对肝硬化大鼠血浆内毒素及肠道菌群的影响.方法36只SD大鼠随机分为正常对照组（n=6）,模型组,预防组,晚期治疗组.采用CCL4复合因素法建立肝硬化模型;实验第9周末处死所有大鼠,观察药物对肝硬化大鼠内毒素,肠道菌群,AST、ALT肝功能及肝组织病理学等的影响.结果中药提取物水苏糖对内毒素及其它指标都有明显的改善,预防组,晚期治疗组病理都有改善,预防组优于治疗组.结论中药提取物水苏糖能有效调整肝硬化肠道菌群失调,并降低血浆内毒素.对肝脏有保护作用.     

Caspase-12抑制剂对百草枯中毒大鼠肝损伤的保护作用

目的:观察caspase-12抑制剂Z-ATAD-FMK对百草枯染毒大鼠肝脏caspase-12蛋白表达和肝细胞凋亡的影响,以及通过血清SOD和MDA的检测,探讨其对百草枯中毒大鼠肝脏保护作用和对机体氧化应激反应的作用。方法:50只健康Wistar大鼠随机分三组:A组为正常对照组;B组为模型组(PQ染毒);C组抑制剂组(PQ/Z-ATAD-FMK),于3d、7d处死B组和C组各10只大鼠。取血检测ALT、TBIL、SOD和MDA;HE染色观察肝组织病理学变化;免疫组化法检测caspase-12蛋白;二苯胺法检测细胞凋亡率。SPSS18.0统计分析。结果:Z-ATAD-FMK抑制剂组ALT、TBIL、MDA值低于模型组(P0.05),SOD高于模型组(P0.05);caspase-12蛋白表达和细胞凋亡率亦低于模型组(P0.05);HE染色显示凋亡和坏死程度也较模型组轻。结论:Caspase-12抑制剂Z-ATAD-FMK能减少百草枯中毒大鼠肝脏caspase-12蛋白表达和肝细胞凋亡率,减轻肝细胞坏死,对肝脏具有保护作用,同时可以抑制百草枯中毒大鼠的氧化应激反应。     

Variations in the phosphate content of histone F1 in normal and irradiated tissues

1. The capacity of the histone-DNA complex to act as a template for RNA synthesis is increased by phosphorylation of histone F1. 2. In regenerating liver, DNA synthesis is preceded by phosphorylation of histone F1. 3. Exposure to ionizing radiation in vivo decreases and delays the phosphorylation of histone F1 in regenerating liver, and decreases it in the hyperplastic kidney. 4. Histone F1 is phosphorylated to a greater extent in dividing than in resting tissues.