铜绿假单胞菌fur基因缺失突变株的构建及其表型分析

铁摄取调节蛋白(ferric uptake regulator, Fur)是控制铜绿假单胞菌铁代谢和毒力的关键调节因子。许多课题组尝试构建铜绿假单胞菌fur的缺失突变株均失败,因此铜绿假单胞菌的fur一直被认为是必需基因,这导致其生物学功能一直未得到全面的解析。【目的】构建铜绿假单胞菌fur的缺失突变株,并对该突变株的表型进行分析。【方法】以铜绿假单胞菌PAO1为亲本菌株,通过同源重组的方法构建fur缺失突变株,研究该基因对铜绿假单胞菌生长、铁载体生物合成、抗氧胁迫能力、鞭毛形成、生物被膜形成和毒力等的影响。同时,通过遗传分析对fur缺失突变株生长缺陷表型的原因进行探究。【结果】本研究成功构建了铜绿假单胞菌fur基因的缺失突变株,发现缺失突变fur极大地限制了铜绿假单胞菌的生长能力,并降低了该菌对限铁环境的生长适应性,但不影响该菌对高铁环境的生长适应性。铜绿假单胞菌Δfur的这种生长缺陷表型是细胞生长增殖变慢造成的,而不是诱导细胞死亡引起的。然而,其他异源的fur基因能完全互补Δfur的这种生长缺陷表型,暗示铜绿假单胞菌的Fur蛋白在功能上不存在独特性。尽管Fur与毒素-抗毒素系统PacTA存在功能关联性,但是铜绿假单胞菌Δfur的这种生长缺陷表型却与PacT毒素无关。除了影响铜绿假单胞菌的生长表型,缺失突变fur还使铜绿假单胞菌丧失了对铁载体生物合成的抑制作用,导致该菌对H₂O₂更敏感并丧失了鞭毛的形成能力,同时降低了该菌对大蜡螟幼虫的毒力。此外,缺失突变fur还显著提升了铜绿假单胞菌的胞内环二鸟苷酸(cyclic diguanylate, c-di-GMP)水平,从而诱导pelF和pslA基因的表达,进而促进铜绿假单胞菌生物被膜的形成。【结论】fur是可以缺失的非必需基因,在铜绿假单胞菌的正常生长、铁载体生物合成、抗氧胁迫能力、鞭毛形成、生物被膜形成和毒力等方面都发挥着十分重要的作用,这为针对铜绿假单胞菌的疫苗和抗菌药物开发奠定了基础。     

一株海洋来源铜绿假单胞菌Gxun-7角蛋白酶基因的克隆、表达及重组酶酶学性质

【背景】角蛋白酶是一类特异性降解角蛋白的水解酶,在动物饲料、生物肥料、医学、洗涤、制革及环境治理等方面具有重要的应用潜力。【目的】对前期从海洋环境筛选出的一株铜绿假单胞菌Gxun-7的角蛋白酶基因进行克隆、表达,并探究重组酶酶学性质,为角蛋白酶在工业生产中的应用奠定基础。【方法】以铜绿假单胞菌Gxun-7基因组推定的角蛋白酶基因为基础,设计引物克隆获得角蛋白酶基因kp2,构建重组表达质粒pET22b-kp2,并转化到E. coliRosettagamiB (DE3)中进行诱导表达,同时对重组表达菌株的表达条件进行优化。利用镍柱分离纯化重组角蛋白酶并研究其酶学性质。【结果】重组角蛋白酶的分子量约为33 kDa,最适温度和pH值分别为40 ℃和8.0,在温度30-60 ℃和pH 6.5-8.0具有较好的稳定性。金属离子Co²⁺、Cu²⁺和化学试剂十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfonate,SDS)、乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)、苯甲基磺酰氟(phenylmethylsulfonyl fluoride,PMSF)对酶活力有抑制作用,而Mg²⁺、K⁺、巯基乙醇和二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)对酶活力有促进作用。重组角蛋白酶具有良好的耐盐性,在12.5%的NaCl作用下相对酶活为87.55%。以酪蛋白为底物时,酶的K_m值为60.92 mg/mL、V_max值为9.70 U/mL。【结论】海洋来源铜绿假单胞菌Gxun-7的重组角蛋白酶具有良好的温度、碱、盐稳定性,可应用于工业生产中。     

PB1样铜绿假单胞菌噬菌体PHW2的生物学特性

【背景】铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种引起医院感染、急性感染和慢性感染的常见条件致病菌。多重耐药铜绿假单胞菌仍然是引起严重医院感染的常见病菌,其临床治疗面临严峻挑战。噬菌体具有特异性杀菌的能力,在防治铜绿假单胞菌耐药菌方面具有应用前景。【目的】分离能裂解碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌的噬菌体,分析其生物学特性和基因组特征,为噬菌体治疗储备资源。【方法】采集环境水样,用双层琼脂平板法分离噬菌体,对其形态、一步生长曲线、感染复数等生物学特性进行研究;使用IlluminaMiSeq平台测定噬菌体的全基因组序列,利用Newbler3.0、GeneMarkS、BLASTp、Mauve2.4.0等生物信息软件进行拼接、注释和比较基因组学分析。【结果】分离到一株噬菌体PHW2,该噬菌体属肌尾病毒科成员,可裂解7株碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌;其最佳感染复数为0.1。一步生长曲线结果显示,其感染宿主菌PA001的潜伏期为100 min,裂解期为360 min,裂解量为25 PFU/cell;噬菌体PHW2在温度25-50℃和pH 6.0-8.0范围内稳定;紫外照射7 min后PHW2活性明显下降;5%氯仿处理100 min内,PHW2仍保持较高的活性。噬菌体PHW2的基因组长65 984 bp,GC含量为55.69%,编码92个ORFs,不含tRNA。基因组比对结果显示PHW2与PB1样噬菌体高度相似。体外生物被膜抑制试验和清除试验结果显示,噬菌体PHW2能显著抑制宿主菌PA001形成的生物被膜并破坏24 h内形成的生物被膜。【结论】分离鉴定了一株新的PB1样噬菌体PHW2,对碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌裂解能力强。生物学特性、基因组特征、体外生物被膜抑制试验和清除试验结果表明该噬菌体具有治疗铜绿假单胞菌耐药菌的潜力。     

铜绿假单胞菌噬菌体的分离鉴定及耐噬菌体突变频率测定*

用铜绿假单胞菌为宿主菌自污水中分离到3株不同的铜绿假单胞菌噬菌体,命名为PaP1、PaP2及PaP3者均为DNA双链噬菌体,基因组大小分别约为47kb、34kb及24kb。3株噬菌体原液滴度（pfu）分别为10⁹/mL、10¹¹/mL和10¹¹/mL。PaP1为裂菌性噬菌体,PaP2及PaP3为溶原性噬菌体。电镜观察,3株噬菌体头部均为多面体立体对称颗粒,直径分别约为70nm、55nm和65nm。PaP1属肌尾噬菌体科,PaP2和PaP3属     

617株耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药性及其产超广谱β-内酰胺酶基因型研究

探讨耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性及其产超广谱β-内酰胺酶基因型。收集2011年7月至2013年12月上海市中医药大学附属曙光医院临床分离的铜绿假单胞菌共1 125株,筛选亚胺培南耐药株,常规纸片法检测其耐药性,并用E-test检测金属β-内酰胺酶（MBL）,采用PCR法检测耐药基因型。结果显示,1 125株铜绿假单胞菌中耐亚胺培南铜绿假单胞菌共计617株,占54.8%;亚胺培南敏感铜绿假单胞菌共计508株,占45.2%。617株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌100%为多重耐药,而亚胺培南敏感铜绿假单胞菌的多重耐药率仅为13.78%,明显较前者低（χ²=871.15,P<0.05）;亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中MBL表型阳性共126株,阳性率为15.4%,94株(74.60%)表现为VIM-2阳性,10株（7.94%）表现为IMP-1阳性,1株检出OXA-10,〖WTBZ〗且该例菌株同时表达VIM-2。临床分离的耐亚胺培南的铜绿假单胞菌多为多重耐药,其产MBL的主要基因型是VIM-2。     

基于CiteSpace分析铜绿假单胞菌耐药性研究热点与趋势

【背景】铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是临床引发感染的主要病原菌之一,对多种抗菌药物均有耐药性,临床治疗难度大,对该病原菌耐药性的研究一直备受关注。【目的】基于CiteSpace可视化功能,探究铜绿假单胞菌耐药性研究现状、热点与发展趋势。【方法】利用文献计量分析法,以2014–2021年中国知网(CNKI)、万方数据库(Wanfang)、Web of Science (WoS)共8 996篇铜绿假单胞菌耐药性的中英文文献为分析样本,运用Citespace软件对文献发文量、作者合作网络、国家和机构合作网络、文献共被引及期刊分析、关键词聚类、突现等方面进行分析,以探究该研究主题的研究热点及趋势。【结果】英文文献发文量增长速度高于中文文献;我国文献发文量仅次于美国、印度,在该领域科研成果贡献度较高,国际学术影响力较大;中英文文献中均对院内感染疾病和耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌持高关注度。然而,中文文献较关注铜绿假单胞菌耐药性的临床防治问题,英文文献则较关注铜绿假单胞菌耐药性的基础研究。【结论】国内外铜绿假单胞菌耐药性研究对院内感染疾病及新型耐药菌的产生与防治关注度最高,暗示以上研究主题是该领域的研究热点与趋势。     

噬菌体治疗对铜绿假单胞菌诱导的肺炎小鼠细菌负荷和炎症水平的影响

铜绿假单胞菌是医院获得性感染和肺部感染的主要致病菌之一,能够引发患者烧伤部位、呼吸道和泌尿道的慢性和急性感染,导致严重的发病率和死亡率。由于抗生素的滥用,铜绿假单胞菌已经对多种抗生素表现出耐药性,严重限制了可用于治疗感染患者的治疗方案。噬菌体依靠内寄生活的细菌进行生存和繁殖,其结构简单,分布广泛,被发现能够用于治疗人类细菌感染疾病,是治疗由铜绿假单胞菌引发的感染的可能方案之一。本研究构建了铜绿假单胞菌诱导的肺炎小鼠模型,对模型小鼠进行噬菌体和美罗培南的单独和联合给药处理,采用ELISA和Western blotting等方法检测了小鼠血清,支气管肺泡灌洗液和肺组织中的细菌负荷、常规生化指标和炎症因子水平。表明经铜绿假单胞菌感染后的小鼠,肺组织的细菌负荷显著增加,血清CRP和乳酸升高,TNF-α、IL-1β、IL-6和透明质酸水平也都显著上升。噬菌体和美罗培南的单独或联合处理能显著下调这些上升,其中噬菌体单独使用对乳酸的下调作用最为显著,而联合用药则对下调血清IL-1β水平具有协同优势。     

铜绿假单胞菌肺部感染小鼠模型中L-17A的表达研究

摘要：目的 了解铜绿假单胞菌肺部感染小鼠模型中L-17A（白介素-17）的表达,指导铜绿假单胞菌肺部感染治疗。方法 择取60只SPF级昆明白雌性小鼠为研究对象,应用随机平行对照法将其分成两组,对照组自小鼠气管内注入相同量的生理盐水,实验组自小鼠气管内注入铜绿假单胞菌悬液0.03 mL,造模后处死两组小鼠,将其肺部组织制制作病理切片,行HE染色,并应用免疫组化法检测肺组织IL-17A表达量变化情况。结果 于3 h、9 h和24 h后,实验组肺组织中IL-17A灰度（182.2±4.7,184.0±9.0,182.8±9.9）明显优于对照组（170.2±4.3,161.8±6.5,147.4±7.3）,且9 h、24 h后血清中IL-17A浓度（132.6±5.5,149.8±5.7）pg/mL显著高于对照组（124.2±2.8,123.2±7.9）pg/mL,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 IL-17A经由炎症细胞募集介入铜绿假单胞菌肺部感染炎症反应,并参与了病原菌清除过程,临床上应引起足够重视。     

鸡源大肠杆菌噬菌体vB_EcoM-E33的分离鉴定和基因组特征及其治疗效果评价

【背景】大肠杆菌是导致规模化养殖家禽死亡的重要病原体,噬菌体防治耐药性细菌感染具有广阔的应用前景。【目的】从鸡场环境样本中分离出噬菌体,研究其生物学活性特征及其对白羽肉鸡大肠杆菌病的治疗效果。【方法】采用双层平板法分离纯化噬菌体vB_EcoM-E33(E33);利用透射电镜观察其形态特征;克隆噬菌体E33基因组序列并分析其基因组特征;通过裂解谱、最佳感染复数、理化因子耐受性和一步生长曲线确定噬菌体E33的生物学活性;构建白羽肉鸡大肠杆菌感染模型,检测噬菌体E33的治疗效果。【结果】从鸡场粪便样本中分离到一株Straboviridae科噬菌体E33,其宿主谱为35.4%(34/96),基因组全长为170625bp,包含271个开放阅读框和2个tRNA,无毒力基因和耐药基因。以Escherichia coli E32为宿主菌增殖,噬菌体E33的潜伏期为10min,暴发量为60PFU/cell;当感染复数为0.001时,噬菌体E33效价最高,达到1.93×10⁹PFU/mL;在50℃以下和pH3.0–11.0范围内活性稳定;对紫外线敏感。口服10⁸CFU/mL的致病性E.coliO78构建白羽肉鸡感染模型,肌肉注射10⁸PFU/mL噬菌体E33具有良好的治疗效果。【结论】噬菌体E33具有宿主谱宽、裂解性能高、理化因子耐受性强、不携带有害基因等优点,具有较好的开发价值,有望作为抗生素替代品用于鸡场致病性大肠杆菌病的防控。     

一株感染铜绿假单胞菌的双链RNA噬菌体PaP6的分离和鉴定

【目的】鉴定一株新分离的铜绿假单胞菌噬菌体PaP6的生物学特性。【方法】利用铜绿假单胞菌临床分离株PA038为宿主,从西南医院污水中分离得到一株裂解性噬菌体PaP6,观察其噬斑特点;氯化铯密度梯度离心纯化噬菌体颗粒后,用透射电子显微镜观察噬菌体形态;提取PaP6基因组,通过DNA酶和RNA酶酶切,做基因组酶切图谱分析;按照感染复数(MOI)分别为10、1、0.1、0.01、0.001和0.000 1加入噬菌体和宿主菌,裂解细菌后,测定噬菌体滴度;以MOI=10的比例加入噬菌体和宿主菌,绘制一步生长曲线;用112株铜绿假单胞菌临床分离株检测PaP6宿主谱。【结果】PaP6的噬斑直径约2 mm-4 mm,圆形透明,边缘清晰;PaP6噬菌体呈多面体立体对称的头部,直径约45 nm;酶切图谱表明PaP6基因组对DNase不敏感,对RNase敏感,未酶切基因组具有3节段双链RNA(dsRNA),长度分别约为9.0、4.5、3.5 kb,共约17 kb;当MOI为0.1时PaP6感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高,达到3.4×109 PFU/m L;用一步生长曲线描绘了其生长特性;PaP6可以感染40.1%的临床分离株,是一株比较广谱的噬菌体。【结论】首次报道了一株铜绿假单胞菌的ds RNA分节段噬菌体,分类学上属于囊病毒科,该噬菌体具有较广的宿主谱,在噬菌体治疗领域具有应用前景。     

<Emphasis Type="Italic">Salmonella typhimurium</Emphasis> engineered to produce CCL21 inhibit tumor growth

Intravenously-applied bacteria tend to accumulate in tumors and can sporadically lead to tumor regression. Systemic administration of attenuated Salmonella typhimurium is safe and has shown no significant adverse effects in humans. The purpose of this study was to test the hypothesis that engineering S. typhimurium to express a chemokine, CCL21, would increase anti-tumor activity. We engineered an attenuated strain of S. typhimurium to produce the chemokine CCL21. Attenuated S. typhimurium expressing CCL21 significantly inhibited the growth of primary tumors and pulmonary metastases in preclinical models of multi-drug-resistant murine carcinomas, while control bacteria did not. Histological analysis of tumors showed marked inflammatory cell infiltrates in mice treated with CCL21-expressing but not control bacteria. Levels of cytokines and chemokines known to be induced by CCL21 [e.g., interferon-γ (INFγ), CXCL9, and CXCL10] were significantly elevated in tumors of mice treated with CCL21-expressing but not control S. typhimurium. The anti-tumor activity was found to be dependent on CD4- and CD8-expressing cells, based on antibody-mediated in vivo immuno-depletion experiments. Anti-tumor activity was achieved without evidence of toxicity. In summary, chemokine-expressing, attenuated bacteria may provide a novel approach to cancer immunotherapy for effective and well-tolerated in vivo delivery of immunomodulatory proteins. Markus Loeffler and John C. Reed should be considered senior authors.     

噬菌体治疗肺炎克雷伯菌感染的研究进展

随着细菌的进化以及部分抗生素的滥用，耐药细菌的感染已成为21世纪主要的公共卫生挑战之一。其中，耐药肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)问题尤为突出。噬菌体在治疗耐药细菌感染引起的疾病方面展现出一定的潜力及独特优势，但目前噬菌体治疗尚缺乏统一的临床指导规范。虽然临床上有少数将噬菌体用于治疗肺炎克雷伯菌感染的成功案例，但多数情况下是采用噬菌体配合抗生素疗法，噬菌体在其中的作用仍不明确。本文综合评述国内外研究数据，回顾与噬菌体治疗肺炎克雷伯菌感染相关的数个重点问题，包括噬菌体的特性以及影响其疗效的因素，旨在为肺炎克雷伯菌和其他耐药细菌的噬菌体治疗提供参考。     

水产动物副溶血弧菌病及其噬菌体防治研究进展

副溶血弧菌是水产动物弧菌病的重要病原微生物之一,又是食源性致病菌,摄入被其污染的水产品后可引发肠胃炎、败血症和坏死性筋膜炎等疾病,对水产养殖业及公共卫生安全均具有较大威胁。抗生素大量使用甚至滥用,不可避免地会带来水产品药物残留和细菌耐药等问题,开发安全有效的抗生素替代品迫在眉睫。作为细菌病毒,噬菌体具有宿主特异性强、易筛选、易保存、高效直接等优点,在水产养殖病害防控和食品安全领域受到广泛关注。本文概述了水产动物的副溶血弧菌病及该菌噬菌体防治的研究进展,为副溶血弧菌噬菌体及制剂应用于水产养殖病害生物防控提供参考。     

噬菌体治疗肺炎克雷伯菌感染的研究进展

肺炎克雷伯菌是肠杆菌科家族中的一员,在各种环境中广泛存在,可导致诸如奶牛乳房炎在内的多种动物疫病,引起人类的肺炎、尿路感染、菌血症、伤口性感染和化脓性脓肿在内的多种临床感染。该菌对抗生素的耐受日趋严重,而且高毒力菌株不断出现,给该菌的防控带来了巨大挑战。噬菌体是一种裂解细菌的病毒,因其具有治疗耐药细菌感染的潜力而备受关注,世界各地均有使用噬菌体成功治疗耐药细菌感染的案例。本文基于国内外对肺炎克雷伯菌及其噬菌体的研究数据,综述了肺炎克雷伯菌的流行病学调查情况和噬菌体在治疗肺炎克雷伯菌感染方面的应用,以期为基于肺炎克雷伯菌噬菌体的抗菌研究和临床应用提供参考。     

纳米材料治疗具核梭杆菌促进的结直肠癌研究进展

具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)是一种口腔厌氧菌,最近被发现在人类结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞表面聚集,其富集程度与癌症治疗预后呈高度负相关。大量研究表明,Fn参与CRC的发生与发展过程,Fn与肿瘤微环境中多种组分相互作用从而增强肿瘤的耐药性。近年来,开始有研究利用纳米材料抑制Fn在肿瘤部位的增殖或通过直接靶向Fn治疗CRC。因此,本综述一方面将对近年来Fn在CRC中促肿瘤的机制进行梳理总结,另一方面将归纳整理不同纳米材料应用于Fn相关CRC治疗的最新研究进展,最后对纳米材料在Fn介导的CRC治疗中的应用前景进行了展望。     

Evaluation of two vaccines for the treatment of pythiosis insidiosi in horses

Two vaccines to treat pythiosis insidiosi in horses were evaluated in 71 Costa Rican horses between 1982 to 1988. One vaccine used a cell-mass (CMV) as antigen and the other a soluble concentrated antigen (SCAV). Both vaccines cured horses infected with Pythium insidiosum (p value 14%). The age of lesions prior to vaccination was important in the response of the horses to immunotherapy. All horses with lesions 0.5 months or less in duration were cured regardless of the vaccine used. Horses with lesions two or more months old did not respond to either vaccine. The age of the horses did not have any influence on their response to the vaccinations. The CMV produced a prominent inflammatory reaction at the side of injection, while the SCAV gave a low inflammatory reaction. In addition, the CMV lost its effectiveness two to three weeks after its preparation. By contrast, the SCAV maintained its ability to cure horses even after 18 months. Immunotherapy using SCAV can thus be used as the vaccine of choice in early cases of equine cutaneous pythiosis insidiosi.Private practice     

Measurement of serum levels of natalizumab, an immunoglobulin G4 therapeutic monoclonal antibody

Chlorophyllide a is a metabolite late in the biosynthesis of chlorophylls and bacteriochlorophylls. Isolation procedures for chlorophyllide a from Rhodobacter capsulatus CB1200 and barley (Hordeum vulgare L.) are described and compared. R. capsulatus CB1200 is a double mutant in the bacteriochlorophyllide a biosynthetic pathway, and chlorophyllide a is excreted by the cells when grown in Tween 80-containing liquid medium. It was purified by liquid or solid phase extraction, yielding 7 mg of chlorophyllide a from 1 L of culture. In a second approach, intrinsic chlorophyllase activity was used to dephytylate chlorophyll in an acetonic preparation of leaves of wild-type or chlorophyll b-deficient barley. Purification was achieved by liquid phase extraction, yielding 14 μg of chlorophyllide a per gram of barley leaves. Chlorophyllide a was identified by thin layer chromatography, absorption spectroscopy, and mass spectrometry.     

Phage therapy of coral disease

At present there are no known procedures for preventing or treating infectious diseases of corals. Toward this end, the use of phage therapy has been investigated. Lytic bacteriophages (phages) were isolated for two bacterial pathogens that are responsible for coral diseases, Vibrio coralliilyticus, which is the causative agent of bleaching and tissue lysis of Pocillopora damicornis, and Thalosomonas loyaeana, which causes the white plague-like disease of Favia favus. By using these phages in controlled aquaria experiments, it was demonstrated that each of these diseases could be controlled by the pathogen-specific phage. The data indicate that initially the phages bind to the pathogen in seawater and are then brought to the coral surface where they multiply and lyse the pathogen. The phages remained associated with the coral and could prevent subsequent infections. These data suggest that phage therapy has the potential to control the spread of infectious coral diseases.     

Antisense Downregulation of the Apoptosis-related Bcl-2 and Bcl-xL Proteins: A New Approach to Cancer Therapy

Members of the bcl-2 family genes are thought to be central regulators of apoptosis. Overexpression of antiapoptotic proteins, such as Bcl-2 and Bcl-xL, contributes not only to the development of cancer but also to its resistance against a wide variety of anticancer agents. Thus, downregulation of Bcl-2 and Bcl-xL can potentially be used to improve therapeutic approaches to advanced cancer. The use of antisense biotechnology to downregulate antiapoptotic bcl family members in diverse cancers in vitro and in vivo is reviewed. The effects and potential limitations of antisense strategies are also discussed in the context of a critical view of recent research in the field.     

In Vivo Gene Electroporation of Glial Cell Line-Derived Neurotrophic Factor (GDNF) into Skeletal Muscle of SOD1 Mutant Mice

Motor neurons degenerate with intracellular vacuolar change and eventually disappear in spinal cords of SOD1 mutant mice, resembling human amyotrophic lateral sclerosis (ALS). The GDNF gene was electroporatically transferred into the leg muscles of SOD1 mutant mice and expressed in muscle cells. This gene therapy with GDNF delayed the deterioration of motor performance, being retrogradely transported into spinal motor neurons. However, the number of the motor neurons and survival of the mutant mice were not improved by GDNF treatment. These results indicate that in vivo gene electroporation of GDNF into muscles could be an appropriate therapeutic approach to ameliorate an early dysfunction of motor neurons in SOD1 mutant mice, but further improvement is needed to use this gene transfer as an effective treatment of ALS.