佛波酯能改变细胞表面糖蛋白N－糖链的结构

利用标记Ｎ－糖链的凝集素亲和层析法研究了佛波醇肉桂酸乙酸酯（ＰＭＡ）对人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１表面糖蛋白上Ｎ－糖链结构的影响,发现１００ｎｍｏｌ／Ｌ的ＰＭＡ处理５天后,可使细胞表面Ｎ－糖链中高甘露糖型和杂合型以及四天线、Ｃ２Ｃ２,６三天线复杂型的比例增高,而二天线复杂型降低。此结果与我们曾报道的视黄酸（ＲＡ）和双丁配环磷酸腺苷（ｄｂ－ｃＡＭＰ）对该细胞表面Ｎ－糖链的影响相反。因ＲＡ和ｄｂ－ｃＡＭＰ是ＳＭＭＣ－７７２１细胞的分化诱导剂,可抑制细胞生长;而ＰＭＡ是该细胞的增殖促进剂,故细胞表面Ｎ－糖链的变化与细胞的分化和增殖密切相关。     

视黄酸对人肝癌细胞表面N糖链类型及天线数的影响

本文采用系列凝集素柱层析法,并配合外切糖苷酶处理研究了在视黄酸作用１－５天过程中人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞表面Ｎ糖结构的变化。结果表明,ＲＡ促进＾３Ｈ－甘露糖参入细胞表面Ｎ糖链,使高甘露糖型Ｎ糖的百分比下降,复杂型百分比长升,并促进二天线Ｎ糖链的生物合成,使多天线特别是四天线和Ｃ２,Ｃ２１ｂ三天线Ｎ糖链的合成减少。结果提示,Ｎ糖链结构的这些变化可能是ＲＡ诱导ＳＭＭＣ－７７２１细胞向正常方向     

双丁酰环磷酸腺苷耐人肝癌细胞株SMMC－7721表面N－糟链类型及天线数的影响

本文采用系列凝集素柱层析法,并配合外切精苷酶研究了在双丁酰环磷酸腺苷（ｄＢ－ｃＡＭＰ）作用１～５天过程中人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞表面Ｎ－糖链类型及复杂型糖链天线数的变化。结果表明,ｄＢ－ｃＡＭＰ促进３Ｈ—Ｍａｎ参入细胞表面Ｎ－糖链,使高甘露糖型Ｎ－糖链的百分比下降,并促进二天线Ｎ－糖链的生物合成。使多天线特别是四天线和Ｃ２Ｃ２Ｃ６三天线Ｎ－糖链的百分比减少．结果提示,Ｎ－糖链结构的这些变化可能是ｄＢ－ｃＡＭＰ诱导ＳＭＭＣ－７７２１细胞向正常方向分化的结果。     

双丁酰环烯酸腺苷对人肝癌细胞株SMMC—7721表面N—糖…

本文采用系列凝集素柱层析法,并配合外切糖苷酶研究了在双丁酰环磷酸腺苷（ｄＢ－ｃＡＭＰ）作用１－５过程中人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞表面Ｎ－糖链类型及复杂型糖链天线数的变化。结果表明,ｄＢ－ｃＡＭＰ促进＾３Ｈ－Ｍａｎ参人细胞表面Ｎ－糖链,使高甘露糖型Ｎ－糖链的百分比下降,并促进二天线Ｎ－糖链的生物合成,使多天线特别是四天线和Ｃ２Ｃ２Ｃ６三天线Ｎ－糖链的百分比减少。结果提示,Ｎ－糖链结构的这些变     

Swainsonine对胰岛素受体功能影响的研究

以Ｓｗａｉｓｏｎｉｎｅ（Ｓｗ）作为高尔基体Ｎ－糖链加工酶系中α－甘露糖苷酶ＩＩ的特异抑制剂。研究Ｎ－糖链结构和胰岛素受体（Ｉｎｓ－Ｒ）功能的关系,发现Ｓｗ不影响细胞生长和３Ｈ－亮氨酸参入ＳＭＭＣ７７２１细胞,但明显促进３Ｈ－甘露糖参入细胞总糖蛋白和表面糖蛋白,并使后者的ＣｏｎＡ强结合组分显著增加,提示Ｓｗ使Ｉｎｓ－Ｒ的Ｎ－糖链变成杂合型及高甘露糖型,胰岛素结合试验后作Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析,发现Ｓ     

多天线糖链对运铁蛋白与受体结合及内吞的研究

应用系列凝集素柱层析法（伴刀豆球蛋白,小扁豆凝集素,欧曼陀罗凝集素）分别从正常人血清及孕妇血清中提纯含有二天线无核心岩藻糖复杂型糖链的运铁蛋白及含有多天线无核心岩藻糖复杂型糖链的运铁蛋白。与正常的含有二天线糖链的运铁蛋白相比,含有多天线糖链的运铁蛋白与ＳＭＭＣ－７７２１细胞膜表面的运铁蛋白受体的亲和力下降,但最大结合量不变,此外,其在内吞过程中于细胞膜上的停留时间延长。结果表明糖链结构改变对运铁蛋白的功能有影响。     

分化剂和增殖剂对肝癌细胞N－乙酰基葡萄糖转移酶的调节

用我室建立的ＨＰＬＣ法测定分化诱导剂,视黄酸（ＲＡ）和双丁酰环磷酸腺苷（ｄｂ－ｃＡＭＰ）,及增殖促进剂,佛波醇肉桂酸乙酸酯（ＰＭＡ）对ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞Ｎ－乙酰氨基葡萄糖转移酶Ｖ和ＩＩＩ（ＧｎＴ－Ｖ,ＧｎＴ－ＩＩＩ）的影响,发现对照细胞在培养５天后ＧｎＴ－Ｖ略见升高。经ＲＡ和ｄｂ－ｃＡＭＰ处理后,可通天降低ＧｎＴ－Ｖ的活力,但不论对照或处理细胞均未测出ＧｎＴ－ＩＩＩ的活力。ＰＭＡ可增高ＧｎＴ－Ｖ和ＧｎＴ－ＩＩＩ的活力,对ＧｎＴ－ＩＩＩ的增加较ＧｕＴ－Ｖ发生较早亦较强。以上结果和我室报道的ＲＡ或ｄｂ－ｃＡＭＰ减少而ＰＭＡ增加ＳＭＭＣ－７７２１细胞表面Ｎ－糖链的天线数相符,也和大鼠化学诱发肝癌中ＧｎＴ－ＩＩＩ和Ｖ的增高相一致。     

多天线糖链对运铁蛋白与受体结合及内吞的研究

应用系列凝集素柱层析法（伴刀豆球蛋白,小扁豆凝集素,欧曼陀罗凝集素）分别从正常人血清及孕妇血清中提纯含有二天线无核心岩藻糖复杂型糖链的运铁蛋白及含有多天线无核心岩藻糖复杂型糖链的运铁蛋白,与正常的含有二天线糖链的运铁蛋白相比,含有多天线糖链的运铁蛋白,与正常的含有二天线糖链的运铁蛋白相比,含有多天线糖链的运铁蛋白与ＳＭＭＣ－７７２１细胞膜表面的运铁蛋白受体的亲和力下降,但最大结合量不变,此外,其在     

Swainsonine对胰岛素受体功能影响的研究

以Ｓｗａｉｓｏｎｉｎｅ（Ｓｗ）作为高尔基体付糖链加工酶系中α－甘露糖苷酶Ⅱ的特异抑制剂,研究Ｎ－糖链结构和胰岛素受体（Ｉｎｓ－Ｒ）功能的关系．发现Ｓｗ不影响细胞生长和３Ｈ－亮氨酸参入ＳＭＭＣ７７２１细胞,但明显促进３Ｈ－甘露糖参入细胞总糖蛋白和表面糖蛋白,并使后者的ＣｏｎＡ强结合组分显著增加,提示Ｓｗ使Ｉｎｓ－Ｒ的Ｎ－糖链变成杂合型及高甘露糖型。胰岛素结合试验后作Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析：发现Ｓｗ不改变Ｉｎｓ－Ｒ的结合容量和每个细胞表面的结合位点数,也不改变结合动力学。再用部分纯化的Ｉｎｓ－Ｒ研究自身磷酸化和对外源底物的酪氨酸蛋白激酶活力,也未发现Ｓｗ处理和对照细胞间的明显区别,表示Ｓｗ也不影响Ｉｓｎ－Ｒ的跨膜信息传递,结合已报道的衣霉素使细胞表面Ｉｎｓ－Ｒ减少的结果,提示Ｉｎｓ－Ｒ运送至细胞膜需要Ｎ－糖链存在,但糖链的类型对ＩＮＳ－Ｒ的代谢和结合动力学并不重要     

地衣霉素对细胞膜表面运铁蛋白受体功能的影响

应用抑制糖蛋白Ｎ－糖链合成的地衣霉素处理ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞,３Ｈ甘露糖掺入实验显示细胞表面糖蛋白Ｎ－糖链的合成受到显著抑制,但细胞膜表面运铁蛋白受体内吞再循环的过程无显明变化,进一步的研究表明受体与运铁蛋白的亲和力亦无改变,但细胞膜表面运铁蛋白受体数减少。结果提示用地衣霉素处理细胞后,在内质网合成的无Ｎ－糖链的运铁蛋白受体影响其运输到细胞膜表面表达。     

地衣霉素对细胞膜表面运铁蛋白受体功能的影响

应用抑制糖蛋白Ｎ－糖链合成的地衣霉素处理ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞,３Ｈ甘露糖掺入实验显示细胞膜表面糖蛋白Ｎ－糖链的合成受到显著抑制,但细胞膜表面运铁蛋白受体内吞再循环的过程无显明变化,进一步的研究表明受体与运铁蛋白的亲和力亦无改变,但细胞膜表面运铁蛋白受体数减少。结果提示用地衣霉素处理细胞后,在内质网合成的无Ｎ－糖链的运铁蛋白受体影响其运输到细胞膜表面表达。     

人胎盘纤连蛋白N糖链结构研究

分离纯化了人胎盘纤连蛋白（Ｆｎ）,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带,纯化Ｆｎ仍保持其搞原性,得率为３８．７％。根据植物凝集素识别专一糖链结构的原理,应用斑点印迹法,亲和层析法和Ｗｅｓｔｅｒｎ转移电泳研究糖链结构,结果证实：１．人胎盘Ｆｎ分子中含有复杂型Ｎ糖链（包括二天线和大于二天线的结构）以及高甘露糖型和／或杂合型Ｎ糖链;复杂型Ｎ糖链中含有平分型ＧｌｃＮＡｃ,糖链末端也可连有唾液酸;２．胰糜蛋白酶水解而获得的明胶结合片段（４４ｋＤ）含有二天线和多天线复杂型糖链,也可接有平分型ＧｌｃＮＡｃ;３．肝素结合片段（３０ｋＤ）以及明胶、肝素均不结合的Ｆｎ片段不含有多天线复杂型Ｎ糖链。     

外源性神经节苷脂GM3影响人肝癌细胞生长的可能机制的初步研究

通过苔酚蓝染色细胞发现,外源性ＧＭ３能明显抑制人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞生长,在ＧＭ３处理３ｄ时,出现明显差异,通过ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ分析发现,外源性ＧＭ３可明显影响人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ四种癌基因的ｍＲＮＡ表达,未经ＧＭ３处理的细胞中没有检测到ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ,但ｃ－ｊｕｎ微量表达,并有ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ的高     

人胎盘纤维蛋白N糖链结构研究

分离纯化了人胎盘纤连蛋白,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带,纯化Ｆｎ仍保持其搞原性,得率为３８．７％。根据植物凝集素识别专一糖链结构的原理,应用斑点印迹法。亲和层析法和Ｗｅｓｔｅｒｎ转移电泳研究糖链结构,结果证实：１．人胎盘Ｆｎ分子中含有复杂Ｎ糖链（包括二天线和大于二天线的结构）以及高甘露糖型和／或杂合型Ｎ糖链;复杂型Ｎ糖糖链中含有平分型ＧｌｃＮＡｃ,糖链末端也可连有唾液酸;２．胰糜蛋白酶水解而获得     

人胚肺成纤维细胞株纤连蛋白结构域N─糖链结构研究

本文应用明胶、肝素亲和层析二步法首先纯化了人胚肺成纤维细胞培养液的纤连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｏｔｈｅ,Ｆｎ）,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带,然后用胰糜蛋白酶消化纯化的Ｆｎ所获得的酶解波,经分离分别得到明胶结合片段和肝素结合片段,再应用凝集素－ＨＲＰ染色的Ｗｅｓｔｅｎ转移电泳法研究糖链结构,结果证实：１．Ｆｎ中明胶结合片段（４４ｋｄ）中含有二天线和多天线复杂型糖链,并接有平分型ｇｌｃＮＡｃ糖基、核心力Ｆｕｃ。２肝素结合片段（３０ｋｄ）只含有二天线复杂型糖链,不含平分型ＧｌｃＮＡｃ糖基及核心Ｆｕｃ．     

衣霉素对人肝癌细胞表面胰岛素受体的影响

衣霉素是一种糖蛋白Ｎ－连接型糖链合成的抑制剂。它可抑制人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１的生长,其抑制率和剂量及处理时间有相关性。衣霉素处理细胞１８ｈ尚可显著抑制＾３Ｈ－亮氨酸的参入。这些标记化合物的参入抑制都有量效关系。０．１μｇ／ｍＬ衣霉素处理１８ｈ后,细胞表面胰岛素受体和胰岛素的结合容量下降,而对照细胞和处理细胞的胰岛素竞争结合曲线基本平行。这主要由于衣霉素抑制新合成的胰岛素受体的糖基化所致。我     

N-糖链合成抑制剂对NIH3T3细胞粘附作用和整合蛋白表达的影响

研究了Ｎ－糖链合成抑制剂——Ｄｅｏｘｙｍａｎｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（ＤＭＭ）和衣霉素（ＴＭ）对ＮＩＨ３Ｔ３细胞粘附作用和细胞表面α５β１整合蛋白含量的影响．研究结果发现甘露糖苷酶Ⅰ抑制剂－ＤＭＭ处理ＮＩＨ３Ｔ３细胞后,３Ｈ－甘露糖（３Ｈ－Ｍａｎ）参入ＮＩＨ３Ｔ３细胞较对照细胞增加一倍,多天线复杂型糖链增加１８％,而细胞表面α５β１整合蛋白与纤连蛋白粘附能力却下降１７％,但对膜整合蛋白α５和β１亚基表达量无明显影响,提示不成熟的糖链对整合蛋白参与的细胞粘附功能有一定影响,但不影响糖蛋白运输及整合到膜上．十四糖二磷酸长萜醇合成抑制剂——ＴＭ为０．５μｇ／ｍｌ时,Ｎ－糖链合成显著抑制,３Ｈ－Ｍａｎ参入减少了５２％,细胞粘附能力下降了３７％,细胞表面膜整合蛋白α５亚基下降了２２％,而β１亚基无明显变化,提示ＴＭ的脱糖基化作用可引起α５亚基转运至细胞膜表面下降,以至影响了细胞的粘附能力．此外,脱糖整合蛋白与纤连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,Ｆｎ）的结合力下降也是原因之一．     

内皮素受体反义寡聚核苷酸对内皮素受体基因表达及血管平滑肌细胞增殖的影响

报道了内皮素Ａ型受体反义寡聚核苷酸（ＯＤＮｓ）对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖及内皮素受体基因表达的影响．~３Ｈ－ＴｄＲ参入结果显示,内皮素Ａ型受体反义ＯＤＮｓ处理细胞可显著抑制内皮素诱导的ＶＳＭＣ的ＤＮＡ合成,反转录－ＰＣＲ及受体结合实验结果表明,ＯＤＮｓ的上述作用与降低ＶＳＭＣ内皮素Ａ型受体基因表达活性有关．     

重组腺病毒介导的白细胞介素—12（IL—12）在肝癌细胞中的表达

利用腺病毒表达系统在肝癌细胞中成功地表达了有生物活性的白细胞介素－１２（ＩＬ－１２）。ＩＬ－１２的Ｐ３５和Ｐ４０ ｃＤＮＡ分别克隆到腺病毒载体ｐＡＣＣＭＶ．ｐＬｐＡ,构建ｐＡＣ／Ｐ３５和ｐＡＣ／Ｐ４０表面质粒。与腺病毒重组质粒ｐＪＭ１７共转染２９３细胞,通过基因重组产生ＩＬ－１２Ｐ３５和Ｐ４０重组腺病毒。用重组腺病毒感染肝癌细胞株ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１,经ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ检测证明,     

人胚肺成纤维细胞株纤连蛋白结构域N—糖链结构研究

本文应用明胶、肝素亲和层析二步法首先纯化了人胚肺成纤维细胞培养液的纤连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,Ｆｎ）,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带,然后用胰糜蛋白酶消化纯化的Ｆｎ所获得的酶解液,经分离分别得到明胶结合片段和肝素结合片段,再应用凝集素－ＨＲＰ染色的Ｗｅｓｔｅｒｎ转移电泳法研究糖链结构,结果证实：１．Ｆｎ中明胶结合片段（４４ｋｄ）中含有二天线和多天线复杂型糖链,并接有平分型ＧｌｃＮＡｃ糖基、核