一种简单、快速、微量聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳方法

Bio-Rad公司的微量聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳(ModelⅢ Mini IEF Cell),不需要使用电极缓冲液,聚焦电泳时间仅用1.5小时,效果甚佳,但要使用该公司专有的凝胶支持薄膜,难于推广应用,我们经过试验,建立了一种简单、快速的微量凝胶等电聚焦电泳方法,40min完成等电聚焦过程,采用快速染色、脱色和干燥,将电泳图谱制成透明的薄膜,整个过程可以     

利用激光扫描共聚焦显微镜研究视皮层脑片长时程增强过程中？…

本文使用１５－２０天龄幼年大鼠视皮层脑片的标本,在通氧状态下,用荧光探针ＡＯ染色,激光扫描共聚焦显微镜对全脑片不同层面进行共聚焦断层扫描,沿纵轴每２０μｍ扫一次,共扫描１６次。再利用总值方式的投影算法对其三维重建,分析幼年大鼠视皮层脑片长时程增强过程中核酸的变化。     

激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）法观察宁夏枸杞的胚珠发育

宁夏枸杞胚珠孚尔根染色后经透明用激光扫描共聚焦显微镜直接观察各发育时期胚珠内部结构。结果显示,用孚尔根染色后,枸杞大孢子发生和雌配子体发育的各个阶段都可在激光共聚焦显微镜下清楚呈现。此种方法克服了胚囊因深埋在胚珠体细胞组织中而难以观察的问题。与经典的切片方法相比,该法可对胚珠整体进行观察,操作简单、可在较短时间内大规模地检测胚囊发育状况。     

三种显微技术对人毛囊蠕形螨的观察和研究

目的 采用荧光显微镜、扫描电镜和激光共聚焦显微镜对人体毛囊形蠕形螨进行形态学观察.方法 选用5 μg/mL碘化丙啶(propidine iodide,PI)对虫体进行荧光染色,避光染色15 min,分别置于荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察;2.5%戊二醛固定虫体标本,梯度酒精和叔丁醇脱水,金喷镀后扫描电镜观察.结果 荧光显微镜下碘化丙啶对虫体有很强的结合力,虫体荧光信号均匀展示于细胞表面,充分展现虫体形态,扫描电镜更加清楚、细致地展示人体毛囊型蠕形螨的超微结构,激光共聚焦显微镜将虫体分层扫描图片进行三维重建,真实、完全、直观地展露了虫体.结论 三种显微技术均可展示蠕形螨超微形态.PI对虫体有很好的荧光染色作用,使激光扫描共聚焦显微镜能够获得更加精准的超微形态结构,结合三维重建技术有着广泛的应用价值.     

利用激光扫描共聚焦显微镜研究视皮层脑片长时程增强过程中核酸的变化

本文使用 1 5— 2 0天龄幼年大鼠视皮层脑片的标本 ,在通氧状态下 ,用荧光探针 AO染色 ,激光扫描共聚焦显微镜对全脑片不同层面进行共聚焦断层扫描 ,沿纵轴每 2 0μm扫一次 ,共扫描 1 6次。再利用总值方式的投影算法对其三维重建 ,分析幼年大鼠视皮层脑片长时程增强过程中核酸的变化。     

对细胞膜质蛋白共定位染色方法的改良

[目的]将流式细胞术染色方法进行改良用于T细胞膜质蛋白共定位的共聚焦显微镜检测,在共定位表达于细胞膜上的CD4和细胞质内表达的TIPE2蛋白较常规镜检免疫荧光染色法可提高实验效率。[方法]取小鼠脾脏T细胞,用流式细胞术的染色方法代替实验室常规免疫染色法,对细胞膜上的CD4与细胞质内的TIPE2蛋白进行染色,制片并在激光共聚焦显微镜下观察。[结果]小鼠脾脏CD4+T细胞上出现了TIPE2蛋白的共表达,符合实验预期,同时实验效率从原有10%提高到90%。[结论]采用该染色方法后突破了常规免疫荧光染色必须要在载玻片上进行的局限,简化了操作,保证了实验的有效性,提高实验效率。     

冬虫夏草、蛹虫草菌丝隔膜和细胞核荧光染色

冬虫夏草和蛹虫草作为重要的药用真菌,得到广泛的重视,迄今已有大量的研究报道。然而,作为细胞学研究的基础处理方法,其菌丝隔膜和细胞核染色却缺乏必要的研究。荧光染色是一种程序简便、快速灵敏的染色方法。本研究选用DAPI、PI、Calcoflour White和刚果红等4种染料,对冬虫夏草、蛹虫草菌丝的隔膜和细胞核进行单独与组合染色实验,通过显微观察比较得出较好的染色方法。结果表明DAPI对冬虫夏草和蛹虫草菌丝的细胞核染色效果都较好,而Calcoflour White对两者的细胞壁染色效果较好且隔膜清晰。DAPI与Calcoflour White两者进行冬虫夏草菌丝组合染色的效果为最佳,但在蛹虫草菌丝染色中效果不太稳定。对蛹虫草菌丝较好的组合染色是DAPI与刚果红的组合,但其染色结果需要在激光共聚焦显微镜下观察。     

一种简便经济的薄层凝胶电泳保存方法——滤纸转移自干法

在分析性聚丙烯酰胺凝胶电泳特别是平板等电聚焦电泳中,薄层凝胶越来越被广泛采用,它有节省试剂、加样量少、电泳时间短、分辨率高及冷却效果好等优点。分析者都希望能将电泳染色后的凝胶理想地保存下来,目前所采用的方法均是直接将凝胶干燥在玻璃板或凝胶支持膜上(由于凝胶太薄不能转移),或者使用专用的透明保存膜,有时还要用真空干燥器干燥。     

非培养细胞的贴壁方法及细胞内Ca^2＋观测

本文介绍非培养细胞贴壁的简易方法和细胞内Ｃａ＾２＋观察。以ｆｌｕｏ－３／ＡＭ进行染色,在３７℃孵育箱内孵育６０分钟,用激光共聚焦显微镜监测细胞内Ｃａ＾２＋的荧光信号。结果表明本方法可成功地应用于共聚焦显微镜测定细胞的研究。     

凝胶等电点聚焦电泳蛋白质的直接固定染色法

聚丙烯酰胺凝胶等电点聚焦电泳是一个分离蛋白质组分很有价值的方法。其优点是分辨率高、重演性好,且分离后的蛋白质区带的等电点亦大致可知,近年来该方法的应用越来越广。但等电点聚焦电泳后凝胶蛋白质区带的染色恰很费时而手续繁。由于两性电介质(Ampboline)也和染料牢固结合呈色,所以要花数天时间先把凝胶中的两性电介质脱净,方可染色。染色后又需进行长时间的背景脱色,才能得到区带清晰的蛋白质带谱。为此,一些研究者摸索了毋须预先脱去两性电介质的直接固定染色法。我们比较了Malik和Reisner的直染法,尤以Malik法效果最好。     

果实蛋白质组学研究的实验方法

双向电泳技术是蛋白质组学研究的基本方法之一。果实由于富含糖、多酚、单宁和有机酸等物质,蛋白质的提取比其它植物组织更加困难。本文主要介绍不同果实蛋白质的提取、等电聚焦系统和凝胶染色技术,并建立了一套适用于桃、樱桃、苹果、芒果和冬枣等多种果实蛋白质组学的研究方法。结果表明,采用匀浆法和酚抽提法提取果实的蛋白质,裂解缓冲液2溶解蛋白质,并用固相pH梯度进行等电聚焦,可以获得背景清晰和分辨率高的凝胶图谱,具有较好的重复性,可用于果实蛋白质组学的研究。我们的研究结果显示,固相干胶条与IEF管胶相比,具有更加明显的优势。而不同的染色方法,对结果影响不大。     

小菜蛾血淋巴蛋白质双向电泳技术体系的建立及优化

采用不同方法对小菜蛾Plutella xylostella(L.)血淋巴进行双向电泳研究,建立了一套适用于小菜蛾血淋巴蛋白质组分析的双向电泳体系。从样品处理方案、等电聚焦时间、染色方法等因素对小菜蛾双向电泳结果的影响进行了分析和优化。结果表明,TCA/丙酮沉淀法提取蛋白损失少,图谱均匀清晰,分辨率和重复性更高。不同长度胶条的最佳上样量不同,胶条长度为7、17、24cm时,最佳上样量依次为20～50μg、50～300μg、100～500μg,而聚焦时间则分别以24000、50000、65000vhr为宜。第二向聚丙烯酰胺凝胶的浓度以12%为宜,电泳后蛋白点呈均匀分布。银染的灵敏度明显高于考马斯亮蓝染色,可以检测出更多的蛋白点,但考马斯亮蓝染色在后续蛋白点质谱鉴定中具有优势。     

果实蛋白质组学研究的实验方法

双向电泳技术是蛋白质组学研究的基本方法之一。果实由于富含糖、多酚、单宁和有机酸等物质,蛋白质的提取比其它植物组织更加困难。本文主要介绍不同果实蛋白质的提取、等电聚焦系统和凝胶染色技术,并建立了一套适用于桃、樱桃、苹果、芒果和冬枣等多种果实蛋白质组学的研究方法。结果表明,采用匀浆法和酚抽提法提取果实的蛋白质,裂解缓冲液2溶解蛋白质,并用固相pH梯度进行等电聚焦,可以获得背景清晰和分辨率高的凝胶图谱,具有较好的重复性,可用于果实蛋白质组学的研究。我们的研究结果显示,固相干胶条与IEF管胶相比,具有更加明显的优势。而不同的染色方法,对结果影响不大。     

水稻双受精过程的共聚焦显微镜观察

(郑州大学离子束生物工程省重点实验室,郑州450052)摘要:首次利用核特异荧光染色与整体透明技术并利用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)对水稻双受精过程进行了观察。激光扫描共聚焦显微镜具有"组织与细胞CT"的功能,可以对整体组织进行扫描并构建三维结构。经荧光染色及透明处理后,在激光扫描共聚焦显微镜下经488nm激光激发,胚囊内各细胞的细胞核以及核仁发出明亮荧光,细胞核轮廓比较清晰,层次感强,并能清晰观察到胚囊内各细胞的结构特点和空间位置关系。不论是对开花前较小的成熟胚囊材料还是开花后较大的胚囊材料都取得了较好的观察效果。同传统的光学显微镜和荧光显微镜相比,其观察到的图像更清晰、更直观、更具立体感。     

山茶叶片可溶性蛋白双向电泳技术的建立

建立了山茶低温诱导蛋白研究中叶片蛋白双向电泳技术体系.采用固相pH胶条在IPGphor TM等电聚焦系统上进行等电聚焦,在Ettan TM Dalt Ⅱ高通量电泳仪上进行SDS-PAGE电泳,以银染法染色,得到了分离效果良好的蛋白质双向电泳图谱.讨论了蛋白沉降方法、蛋白提取液的组成及其他技术环节对蛋白图谱的影响.     

一种同步观察喜树碱与菌根丛枝结构的方法

本文介绍一种用激光共聚焦扫描显微镜同步观察喜树碱、丛枝茵根及其结构的方法.喜树丛枝茵根经甘油浸润和明胶包埋后制成切片,再经酸性品红染色后在激光共聚焦扫描显微镜下观察.波长488mm处激发光下可获得清晰的丛枝茵根透射图像.364 nm处激发光下可获得喜树碱的荧光图像,通过两图像的叠加,在喜树丛枝菌根中得到喜树碱的定位图像.用此方法初步研究了喜树丛枝茼根的喜树碱分布.     

植物病原真菌细胞核和隔膜的双重荧光染色技术

<正> 近年来的研究证实,真菌细胞核的荧光染色是一程序简便、快速而准确的染色技术。作者(1993)在应用荧光染料4,6-Diamidion-2-phemylindol(DAPI)和Hoechest 33258对植物病原真菌的染色中,虽然菌丝细胞核明显可辩,但不能观察到菌丝隔膜,因而无法统计每一菌丝细胞中的核数目。     

SNFYMPL荧光探针和共聚焦显微内镜在胃癌诊断中的应用

目的:探讨荧光探针SNFYMPLGGGSK-FITC与胃癌组织的结合能力,预测其在胃癌诊断中的应用价值。方法:收集我院2015年6月至10月收治的48例胃癌患者手术切除的肿瘤和癌旁组织,使用异硫氰酸荧光素FITC标记的线性七肽SNFYMPL及无关序列肽探针对其冰冻切片进行荧光染色,通过共聚焦激光扫描显微镜CLSM检测其结合能力,并与组织病理结果对比。结果:SNFYMPLGGGSK-FITC对胃癌组织荧光染色的阳性率为81.25%(39/48),明显优于无关序列肽探针的14.58%(7/48),差异有统计学意义(P0.001)。SNFYMPLGGGSK-FITC对癌旁组织荧光染色的阳性率为27.08%(13/48),明显低于对胃癌组织荧光染色阳性率,差异有统计学意义(P0.001)。结论:FITC标记的SNFYMPL短肽探针与胃癌组织较强结合能力,图像组织分辨率好,可以作为共聚焦激光显微内镜在胃癌诊断的潜在靶向分子进一步研究。     

纯化的重组人α1型干扰素的某些理化性质

经SDS-PAGE银染色分析表明,重组人α1型干扰素基因在大肠杆菌中的表达产物rHuIFN-α1分子中含有巯基,易形成分子聚合体。等电聚焦电泳(IEF)的银染色结果揭示了其多种等电点的分子形式。双向电泳证明,每种等电点的rHuIFN-α1都可形成自身的聚合体。初步讨论了rHuIFN-α1的分子聚合体和多种等电点体的形成原因。     

抗砷细胞荧光染色后的激光共聚焦显微镜检测

目的:应用激光共聚焦显微镜检测活细胞内荧光物质含量.方法:传代培养长期低剂量砷诱导的抗砷细胞,用荧光染料Rhodamine-123对细胞染色30min,实验组与维拉帕米(Verapamil)共同孵育,对照组为单加Rhodamine-123的抗砷细胞.应用激光共聚焦显微镜采集Rhodamine-123的荧光图像动态序列,并且记录不同时间段的细胞内荧光强度.结果:实验组细胞染色12h,24h,36h,48h,60h后,荧光强度依次为(51.567±0.7572)、(46.533±0.7095)、(39.557±0.601)、(38.6±0.6245)和(38.505±0.718),明显高于同时间段对照组的荧光强度,差异均有显著性(P＜0.01).结论:应用激光共聚焦显微成像技术能进行活细胞水平荧光物质实时定量检测.