多聚酶链反应存在的问题与解决办法

<正>将分子诊断技术用于传染病的诊断,是以鉴定病原体DNA或RNA中的特殊标记序列(SignatureSequences)为其依据。所以,如从临床标本中检出特征性的核酸,大多表示有新近感染。尽管核酸探针已被广泛用于病原体的检查,但将之作为常规检查的实验室还相当少。其主要原因是,技术要求高,难于自动化,而且常缺乏微生物学标本所需要的敏感度。故多数病原体探针仍然是用来确证培养物,所以,尚离不开原始培养。     

染色体DNA指纹图法——一种用于病原微生物种、株鉴定的新方法

<正>DNA探针技术在临床微生物学诊断中有巨大潜力,它提供了快速、价廉地鉴定在合成培养基上不易生长的病原体的可能性,包括检测携带已知毒力因子和抗生素抗性基因的病原体株,同时可以直接检测临床标本和污染食品中的传染原。目前已有大量有价值的资料,详细综述了此技术在这些方面和微生物学其它方面的应用(Highfield和Dougan,1985;Edberg,1986;Goldmann,1987;Miotti,1987;Tenover,1988;Landegren等,1988)。 在微生物鉴定领域,诊断用探针已可购得,可用于检测各种菌种,包括嗜肺军团菌、结核杆菌、淋球菌、肠道致病性大肠杆菌、肺炎支原体和沙门氏菌某些血清型(Tenover,1988)。另一应用引起了流行病学家的兴趣,即利用探针检测提供的DNA指纹图对医院内和社会的疾病爆发进行研究和控制,因为这些DNA指纹图对核苷序列中较小的基     

呼吸道感染临床实验室检查标本的评价

急性呼吸道感染(RTIs)是临床常见多发病,其病原体对抗生素耐药率的增加对诊断微生物学构成了严峻的挑战。临床微生物室对感染病原体的检出率较低,一般只有50%,且不同部位感染所采集的标本,其结果差异很大。本研究将评述呼吸道感染实验室检查标本采集的影响因素和常见病原体肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、卡他莫拉菌、肺炎衣原体、嗜肺性军团病杆菌、呼吸道病毒、尿抗原试验的临床意义。     

DNA探针—测抗微生物抗性的替代方法?

<正>引言 利用DNA探针做传染病的临床诊断在科学文献的许多报告中已有描述。DNA探针方法学的应用首先是为了获得特异性抗菌素抗性基因传播的资料以及作为研究其发展关系的工具,而不是检测抗微生物抗性。然而DNA探针主要优点之一是它能够用于检出微生物特异性基因而不需要先行分离与生长。由于这一技术能在病人原始标本中直接测定传     

肺部真菌病的实验室诊断——真菌镜检与培养

1标本采集 肺部感染的病原学诊断技术包括临床标本采集和实验室对病原体的检测两个部分。临床上应按疑似或需检测的肺部感染的病原体种类，采集相应的临床标本和采取相宜的实验室检测方法。     

DNA探针的诊断应用

<正>使用重组DNA技术制备特异的分子(常为DNA)探针已为医学和兽医诊断实验室提高对传染病、遗传紊乱、恶性肿瘤的诊断提供了新的强有力的工具,同时也给完成如组织分型、亲缘关系试验这类工作提供了更灵敏感更特异的方法,该技术对法医学也是很有用的(如表1)。DNA探针作为诊断试剂的应用或使实验室减少周转时间,拓宽所检测、鉴别和/或定量的试样的范围,且由于简化     

单纯疱疹病毒1型引起的发热出疹性疾病需要与手足口病进行鉴别

对2008年在甘肃省发生的一起疑似手足口病(HFMD)的发热出疹性疾病的流行进行病原体的实验室检测,明确引起这起传染病流行的病原体。从4名发热出疹患者采集的8份临床标本中(每个患者采集咽拭子和疱疹液标本),首先将临床标本接种到RD和HEp-2细胞上进行病毒分离,对病毒分离阳性的标本提取病毒核酸,然后使用荧光定量-逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)进行人肠道病毒(HEV)核酸的检测。对HEV检测结果阴性的标本采用序列非依赖的单引物扩增技术(SISPA)进行"未知病原体"的鉴定。分离到的6株病毒均鉴定为单纯疱疹病毒I型(HSV-1),结合分析这起流行中患者的临床表现、流行病学调查结果以及实验室检测结果,表明HSV-1是引起这起发热出疹性疾病流行的病原体。6株HSV-1的gG区核苷酸和氨基酸水平上差异都较小,同源性分别高达98.8%和97.9%,说明这起疫情是由同一个病毒传播链引起的。HSV-1等病毒引起的发热出疹性疾病需要与HFMD进行鉴别诊断,由于仅从临床症状和流行病学资料上判断引起发热出疹性疾病的病原体是非常困难的,因此,必须依赖于实验室的诊断。     

传染病医院检验科生物安全管理及防护措施探讨

目的:探讨传染病医院检验科生物安全管理及防护措施.方法:对传染病医院检验科实验室相关人员的职责进行明确分工,使其进一步了解实验室生物操作风险的种类及来源,并在实验室配备必要的安全防护措施,对标本施行严格的管理制度.结果:严格施行检验科实验室生物安全管理,增加防护措施,可以有效的避免生物安全事故的发生.结论:对检验科实验室生物安全管理进行规范后可以有效地减少实验室工作人员的风险,同时也有效避免了病源微生物的外泄,最大限度的保障了实验室的生物安全.     

时间对微生物标本检验阳性率的影响分析

目的:对不同检验时间的临床微生物标本的阳性率进行探讨。方法:回顾性分析我院2013年12月至2014年5月间住院治疗的2106例患者在不同检验时间进行临床微生物检验的临床资料。结果:第一时间血培养标本、非呼吸道标本的阳性检出率明显高于第二时间(10.23%/6.25%、35.16%22.14%),差异有统计学意义(P0.05);且第一时间呼吸道标本阳性率明显低于第二时间呼吸道标本的阳性率(28.92%/36.29%),差异有统计学意义(P0.05);但两时间粪便标本阳性率相同,均为2.40%。结论:对于临床微生物标本应尽量做到立即送检,以减少微生物繁殖、厌氧菌的过度生长等对微生物检验准确性的影响;同时,要加强临床检验人员专业素养、提升技术水平,从而提高微生物检验质量,为感染性疾病的诊治提供有利依据。     

共同应对甲型H1N1流感疫情：德国艾本德股份公司向上海市公共卫生临床中心捐赠荧光定量PCR仪

上海市公共卫生临床中心是上海指定的防控甲型H1N1流感的定点医疗机构,中心应急检测与生物安全实验室是国家病原微生物卫生应急实验室网络成员,承担着传染病病原体检测和监测任务。在2006年高致病性禽流感、2008年手足口病的病毒检测中发挥了重要作用,累积了宝贵的经验。     

生物安全柜的选择和使用

在临床实验室,操作感染性标本时或作病原体分离培养、制备菌种时会因为样品的振荡、摇动、倾注、搅拌、移液等操作或液体的洒落,产生肉眼看不见的直径＜5μm的气溶胶或产生直径为5～100μm的液滴,这些微粒中含有活的致病微生物,可以被操作者吸入或污染工作台面上的其他样品.生物安全柜是一种设备,它的作用就是有效地降低实验室获得性感染的机会,减少人与样品或样品与样品之间交叉污染的机会,用于保护操作人员,保护实验室环境,保护实验材料的生物安全.     

临床微生物实验室如何应对新发和再发传染病

为使临床微生物实验室能较好地应对包括生物恐怖在内的各种新发和再发传染病,文中列出了发达国家主要担忧的各种相关病原,并回顾了快速、准确鉴定病原微生物的技术发展状况.     

共同应对甲型H1N1流感疫情：德国艾本德股份公司向上海市公共卫生临床中心捐赠荧光定量PCR仪

上海市公共卫生临床中心是上海指定的防控甲型H1N1流感的定点医疗机构,中心应急检测与生物安全实验室是国家病原微生物卫生应急实验室网络成员,承担着传染病病原体检测和监测任务。在2006年高致病性禽流感,2008年手足口病的病毒检测中发挥了重要作用,积累了宝贵的经验。     

遗传聚类群特异的寡核苷酸探针

近十几年来,随着分子遗传学的不断发展和基因工程研究的深入,人们已清楚地认识到,不同种生物体含有不同的DNA序列。于是我们可以利用核苷酸咸基序互补的原理,通过核酸杂交阐明细菌间的亲缘关系。核酸杂交探针广泛地应用于微生物的鉴定、传染病诊断、流行病学调查、环境中遗传变异的检测和微生物生态系统中群体结构和动力学的研究。用于微生物鉴定的探针是     

华东病原体发现与研究中心

正2018年,上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心在原有实验室基础上成立了华东病原体发现与研究中心,研究方向包括自然环境及临床标本中未知病原体的发现与鉴定、病毒遗传进化和传播规律、病毒与宿主间的相互作用、病毒与环境间的相互关系等;同时,也是上     

肽核酸探针在微生物诊断领域的应用进展

肽核酸(Polyamide nucleic acid,PNA)是以中性酰胺键为骨架的脱氧核糖核酸(DNA)结构类似物,它可以特异性地与DNA杂交,且具有极高的生物稳定性.相比较传统的DNA探针技术,肽核酸探针以其特殊的结构和性质在食品、环境及临床等微生物快速诊断领域显示出独特的优势.就肽核酸探针在微生物诊断方面的应用进展做简要综述.     

动物基因工程疫苗研究进展

现代医学的主要成就之一是向人和动物体内导入抗传染免疫性,疫苗已成为控制多种动物传染病的有效方法。常规疫苗从分类上可分为弱毒活疫苗和灭活疫苗两类。由于常规疫苗本身存在的缺陷,且有些病原体不能在体外培养中生长或不能在体外传代致弱,至今尚无相应的疫苗,另外用常规方法生产国内没有的外来传染病的毒力致弱活疫茁需要严格的实验室控制,疫苗的使用引起病原体的扩散也使之不易被接受,所以有必要寻找新的方法生产更有效、更安全、性能更好的疫苗。随着遗传学、分子生物学和生物工程技术的发展,人们对各种基因、微生物病原体的致病机理和宿主     

多重连接探针扩增技术在临床病原体检测中的应用

真菌等临床病原体的诊断、基因分型和耐药性检测对于临床诊治十分重要。多重连接探针扩增是一个可以同时定量检测多个基因序列的,简单、有效、快速的方法。其步骤包括待测DNA变性、半探针与待测DNA杂交,半探针的连接、PCR法扩增、凝胶电泳或者毛细管电泳鉴定扩增产物。MLPA已经在临床微生物诊断和研究中有了一定的应用,虽然尚处于起步阶段,但因其操作简便,反应快速,高通量,高敏感性和特异性的特点,拥有良好的应用前景。     

肺炎支原体实验室检测方法研究进展

肺炎支原体(Mycoplosma pneumonia,MP)为人类非典型肺炎的病原体,是引起呼吸道感染的重要病原体。但是支原体肺炎与其他病原体感染的肺炎,在临床症状、影像学上并无特异性差别,且其对一般治疗肺炎、上呼吸道感染的药物有耐药性,因此肺炎支原体及时、准确的实验室检测对于支原体肺炎的诊断治疗显得尤为重要。目前MP的实验室检测方法不断推陈出新,但各种方法均有其优势与不足,临床可选择两种不同的方法同时检测。比如:血清学抗体的检测结合MP快速培养药敏的方法;血清学抗体的检测结合PCR的方法,不同方法相互补充为临床的早期诊断、治疗提供依据。而MP药敏试验的检测和耐药机制的研究对于临床用药方案的选择,减少耐药株的产生和流行具有重要意义。     

微生物降解菲的机理研究进展*

针对微生物降解菲的机理研究进展,论述了细菌、真菌在好氧、厌氧条件下代谢菲的产物以及推测的降解途径;在此基础上概括了催化反应的酶系以及编码酶系的基因簇。简要介绍了基因探针的应用,并结合本实验室的初步研究,指出了该领域有待深入探讨的问题。