中性蛋白酶高产菌株的筛选及产酶酶系分析

目的:满足水产中对中性蛋白酶的需求。方法:以实验室保藏的米曲霉ZW为出发菌株,经Co60定向诱变,通过透明圈法初筛、摇瓶发酵复筛,筛选中性蛋白酶活力高的菌株,并对其进行产酶酶系分析。结果:筛选到的米曲霉ZW-06产中性蛋白酶酶活可达15000U/g干曲,比诱变前酶活提高了74%,是目前国内报道的固体发酵产中性蛋白酶活力最高的菌株;经过10代传代之后,酶活力仍保持稳定。通过对米曲霉ZW-06进行产酶酶系分析,发现发酵产物中除了有较高的中性蛋白酶酶活,还有较高的木聚糖酶和酸性纤维素酶酶活,酶活分别达到49879U/g干曲和21099U/g干曲。结论:米曲霉ZW-06在饲料工业中有很大     

酸性蛋白酶在酱油酿造中的应用研究

低盐固态酿造酱油,在发酵过程中pH偏酸。采用在发酵中期添加适量的酸性蛋白酶,弥补在制曲时米曲霉所产生的酸性蛋白酶活性的不足。增强在酸性环境下对蛋白质的分解作用,提高原料蛋白质的利用率,增产酱油8.0％左右。     

羊毛生物整理复合酶高产菌的激光选育*

采用激光对宇佐美曲霉棕色突变株W25进行诱变处理。选育到一株产酸性蛋白酶、纤维素CMC酶的复合酶生产菌L86,与出发菌株相比发酵单位酸性蛋白酶提高了42.7%、纤维素CMC酶提高了40.9%。所选育的L86经多次传代,遗传性状非常稳定。生物整理试验表明,L86复合酶比较适合用作羊毛织物生物整理用酶。     

多酶系曲霉菌种选育通过鉴定

兰州大学生物系于1983年承担了甘肃省科委下达的“多酶系曲霉菌种选育”课题,于85年7月3日在兰州通过鉴定。甘—8412菌株的谷氨酰胺酶、肽酶,碱性蛋白酶、中性蛋白酶、脂肪酶、β—淀粉酶等主要酶活力,分别较亲本提高20—50％;低温菌种甘—8477的谷氨酰胺酶活力较亲本提高41.78％,它适宜于西北、东北等     

羊毛生物整理复合酶高产菌的激光选育

采用激光对宇佐美曲霉棕色突变株W25进行诱变处理。选衣到一株产酸性蛋白酶、纤维素CMC酶的复合酶生产菌L86,与出发菌株相比发酵单位酸性蛋白酶提高了42．7％、纤维素CMC酶提高了40．9％。所选衣的L86经多次传代,遗传性状非常稳定。生物整理试验表明,L86复合酶比较适合用作羊毛织物生物整理用酶。     

碱性纤维素酶及其去污机理

纤维素酶的研究,已有四五十年的历史。但是,一直是以木霉（Trichodern。a）、曲霉U印eryillus）属等真菌产生的酸性纤维素酶为研究对象,以将木质纤维素转化成葡萄糖为主要研究方向进行的。近年来,碱性纤维素酶在洗涤剂工业上的成功应用,改变了传统的去污机制,建立了一套新的去污机理,被洗涤剂工业称之为一次技术大革命,使碱性纤维素酶成为世界各国普遍重视的一种极具生命力的新型酶制剂。三产碱性纤维素酶的微生物及其酶的性质碱性微生物可以分为嗜碱菌和耐碱菌。只有在pHS以上才能生长的被称之为嗜碱菌;最适pH是中性,但在碱性…     

海南近海水域产碱性蛋白酶菌株的分离筛选及发酵条件优化

【背景】微生物蛋白酶在工业生物技术上具有广阔的应用前景。在微生物蛋白酶中,碱性蛋白酶占全球酶总产量的50%以上,获取产碱性蛋白酶的新微生物资源意义重要。【目的】在海南近海贝类养殖基地海泥中筛选获得高产碱性蛋白酶的菌株,对其生长特性进行探究并优化菌株产酶条件,获得新的蛋白酶生产资源。【方法】以酪素培养基为筛选培养基,采用形态学结合系统发育分析鉴定菌株,通过响应面实验优化菌株的产酶条件。【结果】筛选获得一株高产碱性蛋白酶的菌株F3,鉴定为粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）。菌株在最优产酶条件下发酵酶活达到（339.36±4.30） U/mL。【结论】筛选获得的菌株粘质沙雷氏菌F3有较好的产碱性蛋白酶的能力。     

微生态白酒糟饲料发酵条件的优化

为优化微生态白酒糟饲料发酵条件,以米曲霉、黑曲霉和酵母菌组合发酵白酒糟,共设计16个发酵组合,根据感官特征初筛出3个组合进行后续发酵实验。测定发酵前、后常规营养成分及发酵后的酶活力,确定最优组合并检测氨基酸含量。结果显示,以米曲霉(0.05%)、黑曲霉(0.05%)和酵母菌(0.05%)组合发酵(80%酒糟+10%玉米+10%麦麸)的效果最好:与发酵前相比,粗蛋白含量、真蛋白含量、酸性蛋白酶活力、中性蛋白酶活力和纤维素酶活力分别提高了30.39%、38.06%、41.69%、67.00%和103.84%,总氨基酸含量提升17.74%,酸性洗涤纤维和中性洗涤纤维含量分别降低23.64%、20.40%。     

响应面法优化黄绿蜜环菌子实体蛋白酶解条件

黄绿蜜环菌（Armillaria luteo—virens Sacc）子实体中蛋白含量很高,采用酶水解黄绿蜜环菌子实体蛋白的方法是生产具有生物学功能特性的活性肽的有效途径。实验采用酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶水解黄绿蜜环菌子实体蛋白制备生物活性肽。实验中确定了酶解前处理条件,即最适宜的酶制剂为中性蛋白酶。酶解条件的优化采用中心组合响应面分析法：建立数学模型回归分析,模型评价,最后进行验证实验。结果表明：底物浓度为7．6％、加酶量为1．6％、酶解温度为52％、酶解时间为6．4h,此条件下蛋白水解度最高。     

酶法提取金乌贼墨汁中黑色素的工艺条件研究

以金乌贼墨汁为原料,采用单因素试验,对胰蛋白酶,木瓜蛋白酶,胃蛋白酶,中性蛋白酶和碱性蛋白酶等五种酶提取黑色素的效果进行比较分析,筛选出水解效果较好的碱性蛋白酶。并通过正交试验,优化了碱性蛋白酶酶解金乌贼墨汁的最佳工艺,实验结果表明,在底物浓度2%、水解温度50℃、pH值为7.4,加酶量4200U/g和水解8h的条件下进行水解的效果较好。     

米曲霉蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

【目的】获得米曲霉蛋白酶主要成分及其酶学性质。【方法】利用硫酸铵盐析,DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析、Phenyl-Sepharose HP疏水层析和Superdex-G75/200凝胶层析对米曲霉所产蛋白酶系进行分离纯化,SDS-PAGE检测蛋白酶纯度和分子量,采用高效液相凝胶色谱分析两种蛋白酶酶解产物。【结果】从米曲霉所产蛋白酶系中分离纯化获得两种蛋白酶组分P1和P2,分子质量分别约为37 kD和45 kD。以酪蛋白为底物时,P1的Km=8.36 g/L,Vm=12.95μg/(mL·min),最适反应条件为pH 8.0、45°C;P2的Km=4.11 g/L,Vm=4.86μg/(mL·min),最适反应条件为pH 7.0、45°C。两种蛋白酶均对酪蛋白水解活性最高,而对牛血清蛋白的水解活性很低。P1和P2分别酶解大豆分离蛋白后水解产物中肽分子质量分布呈现出一定的差异。【结论】两种蛋白酶的酶学性质存在差异;两者对疏水氨基酸构成的肽键具有选择性,但其作用基团存在特异性。这些研究结果将为米曲霉所产蛋白酶在食品上的应用提供指导。     

曼氏无针乌贼墨汁黑色素的提取工艺研究

曼氏无针乌贼墨汁的主要成分是黑色素、蛋白质及灰分。使用酶解法去除杂质,获得高纯度墨汁黑色素。通过对碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶的水解效果进行比较,挑选出水解效果最好的蛋白酶。通过单因素实验,比较不同p H值、温度、加酶量、水解时间,对黑色素提取的影响。在单因素实验的基础上,通过正交试验优化黑色素的提取工艺。实验结果表明,高纯度的黑色素可以用1.5%碱性蛋白酶在温度为50℃,p H值10.5和底物浓度为2%的条件下酶解4 h获得。     

米曲霉酸性蛋白酶基因在毕赤酵母中的异源表达及酶学性质

酸性蛋白酶作为一类重要的天冬氨酸蛋白酶,被广泛应用于食品、医药和皮革等领域。为推动酸性蛋白酶的研究及应用,通过对发酵豆制品样品进行宏基因组测序,从中获得米曲霉酸性蛋白酶基因pepA,在毕赤酵母GS115中进行异源表达,并对重组酶PepA进行酶学性质分析。结果显示毕赤酵母发酵上清液中酸性蛋白酶的活性为50.62 U/mL。SDS-PAGE验证PepA的分子量约为50 kDa,且发酵上清液几乎无杂蛋白。PepA的最适pH值为4.5,最适温度为50℃,Mn~(2+)和Cu~(2+)对其具有激活作用,而Fe~(3+)、Fe~(2+)与Ca~(2+)则具有抑制作用。上述研究结果可为米曲霉酸性蛋白酶的异源表达及其相关工业应用提供指导。     

一株海洋细菌产碱性蛋白酶的研究

对1株产碱性蛋白酶的海洋细菌Pseudomonas sp.7-11发酵产生碱性蛋白酶的条件和酶的调控机制进行了初步研究。结果显示,7－11为好氧菌,具有嗜低温特性,且适宜在偏碱性的条件下生长并产酶,该菌产生碱性蛋白酶表现出初级动力学持征;酷蛋白培养基适合菌株产酶;K^ 对于菌株产酶有关键作用;复合氨基酸对产酶有抑制作用;初步显示,7－11产生蛋白酶受诱导及阻遏两种方向的调控。     

高产复合酶菌株HD-1选育的研究

从产果胶酶的黑曲霉(Aspergillus niger)菌中分离出一支产酸性蛋白酶等多种水解酶的菌株No．3号。经铜蒸汽激光诱变,选育出一支高产复合酶的菌株FID-1,该菌在简单的固体发酵培养基上,28℃培养48hr,每克鲜曲的酶活力(U)为：酸性蛋白酶7500u、纤维素Cx 酶 9061U、纤维素CL酶3581U、果胶酶5471U、糖化酶5582U。酶活平均提高率为38.86％,最高幅度是78.6％。该菌经多次连续传代和贮存一年后,产酶性状稳定。该菌株是目前国内饲料用酶制帮生产株中,酶系最齐全,产酶水平位于前列的优良菌株。     

蛋白酶分泌菌对重金属胁迫的反应

本文研究了Pb、Zn、Cu和Cd对3种蛋白酶产生菌：碱性地衣芽孢杆菌2709(Bacillus licheniformis 2709)、中性枯草杆菌1.398(Bacillus subtilis1.398)和酸性宇佐美曲霉537(Aspergillus usamii 537)生长及其酶活性的影响, 并采用生长抑制皿分析(GIPA)方法针对3种菌株在Pb、Zn、Cu、Cd不同胁迫浓度下的生长量进行打分, 分析其耐性与抗性指标(MTC与MIC)。结果表明4种重金属在超过一定临界浓度后, 对3种菌株的生长和蛋白酶活性均产生了较大的抑制作用。碱性蛋白酶对4种重金属均具有较大的适应性, 其次是中性蛋白酶对Zn和Cd具有一定的适应性, 而酸性蛋白酶对4种重金属均表现出被抑制状态。3种菌株对Pb和Zn耐性与抗性最高(2.0 mmol/L~6.0 mmol/L), 其次是对Cd也具有一定的抗性(0.5 mmol/L~0.75 mmol/L)。     

字佐美曲霉酸性蛋白酶的研究I．酸性蛋白酶537菌株的选育及其发酵条件

用紫外光、乙烯亚胺、60钻、甲基磺酸乙酯连续交替诱变处理宇佐美曲霉的白色变种B1,获得一株高产酸性蛋白酶的突变株537,在摇瓶培养条件下其产酶水平是出发菌株的35倍。试验结果表明,对宇佐美曲霉的多因素连续诱变处理,以及采用对萌动孢子处理的方法均有助于获得较理想的结果。此外,简化了的培养基,不仅使所得的突变株提高了产酶水平,而且培养基中不需要添加豆饼水解液,可直接采用豆饼粉和较高浓度的无机氮源。另外,氯化钙、磷酸盐对产酶有促进作用。诱变菌株经多次传代和长期保存后,产酶活力稳定不变。     

碱性蛋白酶

碱性蛋白酶在洗涤剂、制革、丝绸、饲料、医药、食品、环保等领域被广泛应用,具有重要的工业和经济价值。在筛选新型蛋白酶产酶菌株方面,近年来已报道了具有较高pH适应性的碱性蛋白酶,碱性弹性蛋白酶,水解多种底物的碱性蛋白酶,具有耐热、耐表面活性剂、耐氧化剂等特     

蛋白酶分泌菌对重金属胁迫的反应

本文研究了Pb、zn、cu和Cd对3种蛋白酶产生菌:碱性地衣芽孢杆菌2709(Bacilluslicheniformis 2709)、中性枯草杆菌1.398(Bacillus subtilis1.398)和酸性宇佐美曲霉537(Aspergillususamii 537)生长及其酶活性的影响,并采用生长抑制皿分析(GIPA)方法针对3种菌株在Pb、zn、Cu、Cd不同胁迫浓度下的生长量进行打分,分析其耐性与抗性指标(MTC与MIC).结果表明4种重金属在超过一定临界浓度后,对3种菌株的生长和蛋白酶活性均产生了较大的抑制作用.碱性蛋白酶对4种重金属均具有较大的适应性,其次是中性蛋白酶对Zn和Cd具有一定的适应性.而酸性蛋白酶对4种重金属均表现出被抑制状态.3种菌株对Pb和Zn耐性与抗性最高(2.0 mmol/L～6.0 mmol/L),其次是对Cd也具有一定的抗性(0.5 mmol/L～0.75 mmol/L).     

利用柑橘皮固体发酵生产复合酶菌株的选育

本试验对14个菌株以柑橘皮为主要原料固体发酵生产复合酶的生产性能进行了比较, 发现宇佐美曲霉Aspergillus usaanii具有较好的复合酶产率,为进一步提高该菌株的产酶能力, 我们利用γ-射线辐射对其进行了诱变育种,选育得到一株纤维素酶活提高26%、酸性蛋白酶提高28%、木聚糖酶提高24.5%的突变菌株AU—C33。采用正交试验方法对该菌株的基础培养基进行了优化,结果表明豆粕和尿素含量对各酶活具有极显著影响。以柑橘粉计,当添加23% 豆粕、8%麸皮、3%尿素,水分含量在60%,28℃培养60h后,CMCase、FPA、β-葡萄糖苷酶、酸性蛋白酶和木聚糖酶分别达到了20.8U/g、7.25U/g、74.7U/g、7248.4U/g和3222.6U/g。