高速逆流色谱制备玫瑰红景天中的三种酚性化合物

采用高速逆流色谱方法(HSCCC,High-speed Counter-current Chromatography)同时分离三种玫瑰红景天酚性化合物。玫瑰红景天提取物经聚酰胺吸附多酚后经硅胶柱分级得预分离样品,采用正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(4∶5∶4∶5,v/v/v/v)组成的两相溶剂系统对预分离样品进行分离纯化,一次进样150 mg,一次色谱分离得到化合物1:68.5 mg、化合物2:8.5 mg、化合物3:45.5 mg,纯度都超过98%。通过ESI-MS、1H NMR对其结构进行鉴定化合物1为没食子酸(Gallic acid),化合物2为没食子酸甲酯(Methyl gallate),化合物3为山奈酚(Kaempferol)。结果表明利用HSCCC可以成功分离三种酚性化合物,分离效果好,产品纯度高。     

溶剂系统极性在高速逆流色谱分离油橄榄叶多酚类化合物过程中的影响

为探讨目标化合物极性和溶剂系统极性在HSCCC分离过程中的相关性,本文以油橄榄叶中的2种主要有效成分-橄榄苦苷和木犀草素-7'-O-β-D-葡萄糖苷为目标化合物,系统考察正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水系统[(1∶19∶1∶19,v/v)、(1∶9∶1∶9,v/v)、(1∶9∶2∶8,v/v)、(1∶9∶3∶7,v/v)、(1∶6∶1∶6,v/v)、(1∶5∶1∶5,v/v)]不同比例组成的两相溶剂系统对目标化合物分离的影响。结果表明:橄榄苦苷、木犀草素-7'-O-β-D-葡萄糖苷随着溶剂系统的极性的减小,其分离效果呈现先增强后减弱的趋势,在最佳的分离条件下,分离制备所得橄榄苦苷、木犀草素-7'-O-β-D-葡萄糖苷的纯度按照HPLC归一化法检测,分别为87.8%和77.5%。本实验结果为HSCCC溶剂系统快速筛选及提高HSCCC在复杂体系中分离制备目标化合物的效率提供技术支持。     

高速逆流色谱分离制备栀子苷

以栀子苷粗提取物为原料,采用高速逆流色谱法分离栀子苷,溶剂系统为A:乙酸乙酯∶正丁醇∶水(2∶1.5∶3)和B∶正丁醇∶水(1∶1),上相为固定相,下相为流动相,流速为2.0 mL/min,转速为850 r/min,温度控制在25℃,纯度用HPLC测定.结果表明,利用溶剂系统A和B进行HSCCC制备栀子苷,使栀子苷含量从50.75％(HPLC)分别提高至86.6％和91.8％,回收率分别为81.36％和78.12％.     

高速逆流色谱分离小孢拟盘多毛孢PM-1 菌株中的除草活性物质

【目的】应用高速逆流色谱法(High-speed counter-current chromatography,HSCCC)实现对小孢拟盘多毛孢Pestalotiopsis microspora PM-1菌株代谢产物中除草活性物质的首次分离。【方法】以正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水(4:5:4:5,V/V/V/V)为最佳的两相溶剂体系,上相(水相)为固定相,下相(有机相)为流动相,正相洗脱。【结果】在流速2 mL/min、转速900 r/min、检测波长254 nm的条件下进行分离,得到4个馏分,其中馏分Ⅱ对马唐的活性较强。馏分Ⅱ经高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)以乙腈:水=75:25(V/V)为流动相经过C18柱进一步分离检测,所得馏分A对马唐种子萌发有较强的抑制作用。其保留时间为7.954 min,该峰经二极管阵列光谱检测为单一组分。【结论】利用最佳的高速逆流色谱条件和高效液相色谱条件对小孢拟盘多毛孢Pestalotiopsismicrospora PM-1菌株代谢产物进行分离,可获得除草活性化合物——馏分A。     

从珠子草中分离得到的化合物:软木三萜酮在溶液和晶体中的结构

首次从大戟科植物珠子草中分离得到软木三萜酮.利用晶体X-射线法与一维和二维核磁共振法测定了该化合物的结构,指认了核磁共振信号的归属.晶体衍射结果表明,化合物是以斜方晶体空间群形成晶体,晶体数据维P2(1)2(1)2(1)with a=6.361(2)A,b=13.933(3)A,c=28.440(6)A,α=90°,β=90°,γ=90°,V=2520.6(11)A3,Z=4.在晶体中存在一个微弱的分子间的作用力C-H……O=C,此作用力被认为是晶体形成的重要因素.NMR方法确定化合物的结构相同,表明了软木三萜酮在晶体和溶液具有相同的构型.     

HPLC-MS/MS法快速测定人血浆中美利曲辛及生物等效性研究

目的:建立测定人血浆中关利曲辛浓度的高效液相串联质谱法(HPLC-MS/MS),用于氟哌噻吨美利曲辛片的生物等效性研究.方法:以Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6mm× 150mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈(含1%甲酸):0.02mo·L-1甲酸铵水溶液(80∶20,V∶),流速:0.8mL·min-1;柱温:40℃,以醋酸乙酯:二氯甲烷(4∶1,V∶V)为提取剂.样品经电喷雾离子源正离子化后,通过三重四级杆串联质谱仪,采用选择反应监测(SRM)对美利曲辛(m/z 292.2→232.2)和阿米替林(m/z 278.1-91.0)进行测定.结果:美利曲辛的高(50μg·L-1)、中(20μg·L-1)、低(0.5μg·L-1)3个浓度的平均回收率分别为97.53%、104.03%和106.87%,日内(n=5)、日间(n=3)RSD均小于15%;分析方法的最低定量限为0.2μg·L-1.线性范围为:0.2～60μg·L-1,回归方程为:F=1.8691ρ+0.0555,r=0.9986(n=9),权重为1/ρ2.结论:该方法灵敏、准确、简单、快速,可用于临床血浓监测和药动学研究.     

高速逆流色谱结合制备液相色谱分离纯化桂枝中化学成分

本文首次采用高速逆流色谱结合高效液相色谱的方法对桂枝正丁醇相进行分离纯化。首先,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(8∶2∶6∶4,v/v)为高速逆流色谱溶剂系统,将桂枝正丁醇萃取相分为两个馏分,然后结合制备高效液相,共分离得到4个高纯度化合物。通过核磁共振波谱鉴定其化学结构,分别为香豆素(1)、反式-邻甲氧基桂皮酸(2)、桂皮酸(3)、反式-桂皮醛(4),这四种化合物纯度经高效液相检测均大于95%。该方法简便、快速、节省溶剂,可以对桂枝正丁醇相进行快速有效的分离纯化,具有较好的实用价值,为桂枝资源的进一步开发应用提供了技术和物质支持。     

用高效液相色谱法测定开裂甾体化合物

用反相HPLC内标定量方法测定18-甲基-3-甲氧基-8,14-开裂雌甾-1,3,5(10),9(11)-四烯-14,17-二酮微生物不对称还原成具有光学活性17β-羟基化合物的转化率。色谱采用μ-BondapakC₁₄色谱柱;甲醇-水73∶27(V/V)为流动相,流量0.8 ml/min;UV 254 nm检测;雄甾-4-烯-3,17-二酮作内标。     

藤黄灰链霉菌-H103发酵液中抗真菌活性成分的分离纯化

通过大孔树脂吸附等方法对藤黄灰链霉菌H103发酵液中的抗真菌活性成分进行了分离纯化,得到了纯度较高的活性物质的结晶,并且建立了通过大孔树脂吸附-结晶的分离纯化路线以及反相高压液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)的检测方法,为进一步的理化性状研究打下了一个良好的基础。实验表明,最佳吸附树脂为X-5树脂,洗脱剂为50%乙醇,HPLC条件为:反相色谱柱Agilent 20RBA×310SB-C18(150mm×4.6mm i.d,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱,0~4.0m in,V(A):V(B)=20∶80,4.0~9.5m in,V(A)∶V(B)=45∶55,此后V(A):V(B)=80∶20,流动相流速:0.8mL/m in,柱温:30℃,ELSD条件:漂移管温度115℃,载气流速(空气)2.3L/m in。     

高速逆流色谱法分离纯化青皮中六种多甲氧基黄酮

应用高速逆流色谱法(HSCCC)分离制备了青皮中6种多甲氧基黄酮类(Polymethoxyflavones,PMFs)化合物。以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比为4∶6∶4∶6)为两相溶剂系统,在主机转速800 r/min、流动相流速2mL/min、检测波长254 nm条件下进行分离制备,460 min内从270 mg青皮粗提物中一步分离制备得到甜橙素(1,sinensetin)3.5 mg,5,7,8,4-四甲氧基黄酮(2)13.9 mg,川陈皮素(3,Nobiletin)51.3 mg,3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮(4)9.5 mg,橘皮素(5,Tangeretin)44.7 mg,5-去甲川陈皮素(6,5-O-DesmethylNobiletin)11.2 mg,纯度均达97%以上,各化合物结构经质谱和核磁共振氢谱、碳谱鉴定。利用该方法可以对青皮中的黄酮类化合物进行快速的分离和纯化。     

高速逆流色谱法从白芍中分离纯化五没食子酰基葡萄糖

本文建立高速逆流色谱(HSCCC)方法,从白芍粗提物中分离纯化五没食子酰基葡萄糖.分别采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体积比0.5∶5∶1∶5及0.5∶5∶0.5∶5混合溶剂作为两相溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,转速为800 rpm,流速为2.0 mL/min,用HPLC检测及ESI-MS进行验证.经过两次HSCCC分离纯化,得到五没食子酰基葡萄糖纯度为95.7％.     

应用高速逆流色谱分离桑枝酚类成分

建立了高速逆流色谱(HsCCC)分离制备高纯度的桑枝酚类成分的新方法.分离条件如下:溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇冰(1∶1∶1∶2,v/v),上相为固定相,下相为流动相;流速2.0 mL/min;转速900rpm;进样量75 mg.收集得到三个高纯度化合物,经HPLC、MS、1H和13C NMR等分别鉴定为反式氧化白藜芦醇(25.2mg),反式白藜芦醇(7.4 mg)和桑辛素M(29.1 mg).高速逆流色谱可以高效分离桑枝成分,方法简便,技术可行,优于传统的柱色谱法.     

螺旋槽圆盘柱高速逆流色谱及其在多肽和蛋白分离中的应用

本研究重点考察了实验室自行设计研制的J型螺旋槽圆盘柱逆流色谱系统对正丁醇-醋酸-水体系和聚乙二醇(PEG1000)-磷酸盐-水双水相体系的固定相保留能力,并研究了流动相流速(F)、柱转速(w)和温度(T)等因素对固定相保留率(Sf)的影响。结果表明,该新型分离柱可使两种溶剂体系在L-I-T、U-O-H和L-I-H三种洗脱模式下都可获得较高的Sf,即以下相为流动相,采用由螺旋槽内端(I)向外端(O)的流通方式,或以上相为流动相,采用由螺旋槽外端(O)向内端(I)的流通方式可以获得较高的固定相保留。其保留能力较传统的螺旋管逆流色谱柱有显著提高。Sf随着w的增加而升高,随着F的增加而降低,且Sf与F1/2/w线性相关。20oC～45oC之间温度对Sf影响不明显,但低于20oC不利于双水相体系的保留。应用研究表明,采用正丁醇-醋酸-水(4:1:5,V/V/V)和PEG1000-磷酸钾盐-水(12.5:12.5:75,W/W/W)(pH9.0)体系可以在较高的流动相流速和较高的固定相保留下分别实现对亮氨酸-酪氨酸(Leu-Tyr)和缬氨酸-酪氨酸(Val-Tyr)二肽混合物、细胞色素C与肌红蛋白混合物、肌红蛋白与溶菌酶...     

高速逆流色谱分离制备川西獐牙菜中两种苷类化合物

采用高速逆流色谱从川西獐牙菜中分离制备了两种高纯度苷类化合物.以正丁醇-氯仿-甲醇-水(3.4∶8∶5∶6,v/v)为溶剂系统,主机转速为800 rpm,流速:O～210 min,1.5mL/min;210 ～360m in,2.5 mL/min,检测波长254 nm的条件下进行分离制备,在360 min内从100 mg样品中一步分离制备得到1-O-樱草糖-3,7,8-三甲氧基(口山)酮(Ⅰ,11 mg)和异荭草苷(Ⅱ,24 mg).经HPLC检测,两个化合物的纯度均在99％以上,结构由UV、1H和13C NMR鉴定.     

不同钙-醇溶解体系丝素蛋白的制备及表征研究

采用 ４种中性盐溶液 Ｃａ（ＮＯ３）２４Ｈ２Ｏ 甲醇、Ｃａ（ＮＯ３）２４Ｈ２Ｏ 乙醇、ＣａＣｌ２ 甲醇 水和 ＣａＣｌ２ 乙醇 水（摩尔比分别为 １∶２、１∶２、１∶２∶８、１∶２∶８）处理蚕丝纤维,透析后经冷冻干燥制成固体,利用ＳＤＳ ＰＡＧＥ、电镜扫描和红外光谱对制得的固体进行表征。ＳＤＳ ＰＡＧＥ结果表明：Ｃａ（ＮＯ３）２４Ｈ２Ｏ 醇体系降解丝素蛋白较 ＣａＣｌ２ 醇 水体系降解程度高;电镜扫描的结果表明 Ｃａ（ＮＯ３）２４Ｈ２Ｏ 甲醇和 ＣａＣｌ２ 乙醇 水溶解体系处理的丝素蛋白溶解比较完全,Ｃａ（ＮＯ３）２４Ｈ２Ｏ 甲醇处理的丝素蛋白冻干后为颗粒状,而 ＣａＣｌ２ 乙醇 水处理的丝素蛋白冻干后为片状。红外光谱的结果表明：４种溶液处理后的丝素蛋白构象均介于 β折叠和无规则卷曲之间,从而为丝素蛋白在药物缓释载体领域的应用提供了一定的理论依据。     

Position 4 analogues of [deamino-Cys(1)] arginine vasopressin exhibit striking species differences for human and rat V(2)/V(1b) receptor selectivity.

Arginine vasopressin (AVP) mediates a wide variety of biological actions by acting on three distinct G-protein coupled receptors, termed V(1a) (vascular), V(1b) (pituitary) and V(2) (renal). It also binds to the oxytocin (OT) receptor. As part of a program aimed at the design of selective agonists for the human V(1b) receptor, we recently reported the human V(1b), V(1a), V(2) and OT receptor affinities of the following position 4 substituted analogues of [deamino-Cys(1)] arginine vasopressin (dAVP)-(1) d[Leu(4)]AVP, (2) d[Orn(4)]AVP, (3) d[Lys(4)]AVP, (4) d[Har(4)]AVP, (5) d[Arg(4)]AVP, (6) d[Val(4)]AVP, (7) d[Ala(4)]AVP, (8) d[Abu(4)]AVP, (9) d[Nva(4)]AVP, (10) d[Nle(4)]AVP, (11) d[Ile(4)]AVP, (12) d[Phe(4)]AVP, (13) d[Asn(4)]AVP, (14) d[Thr(4)]AVP: (15) d[Dap(4)]AVP. With the exception of Nos. 7 and 12, all peptides exhibit very high affinities for the human V(1b) receptor. Furthermore, peptides 1-4 exhibit high selectivities for the human V(1b) receptor with respect to the V(1a), V(2) and OT receptors and, with d[Cha(4)]AVP, in functional tests, are the first high affinity selective agonists for the human V(1b) receptor (Cheng LL et al., J. Med. Chem. 47: 2375-2388, 2004). We report here the pharmacological properties of peptides 1-4, 5 (from a resynthesis), 7, 9-13, 15 in rat bioassays (antidiuretic, vasopressor and oxytocic) (in vitro: no Mg(++)) with those previously reported for peptides 5, 6, 8, 14. We also report the rat V(1b), V(1a), V(2) and OT receptor affinities of peptides 1-5 and the rat V(2) receptor affinities for peptides: 7-15.The antidiuretic activities in units/mg of peptides 1-15, are: 1=378; 2=260; 3=35; 4=505; 5=748; 6=1150; 7=841; 8=1020; 9=877; 10=1141; 11=819, 12=110; 13=996; 14=758; 15=1053. Peptides 1-4 exhibit respectively the following rat and human (in brackets) V(2) receptor affinities: 1=3.1 nm (245 nm); 2=3.4 nm (1125 nm); 3=24.6 nm (11,170 nm); 4=0.6 nm (1386 nm). Their rat V(1b) receptor affinities are 1=0.02 nm; 2=0.45 nm; 3=9.8 nm; 4=0.32 nm. Their rat V(1a) receptor affinities are 1=1252 nm; 2=900 nm; 3=1478 nm; 4=32 nm. Their rat oxytocin (OT) receptor affinities are 1=481 nm; 2=997 nm; 3=5042 nm; 4=2996 nm. All four peptides have high affinities and selectivities for the rat V(1b) receptor with respect to the rat V(1a) and OT receptors. However, in contrast to their high selectivity for the human V(1b) receptor with respect to the human V(2) receptor, they are not selective for the V(1b) receptor with respect to the V(2) receptor in the rat. These findings confirm previous observations of profound species differences between the rat and human V(2) receptors. Peptides 1-4 are promising leads to the design of the first high affinity selective agonists for the rat V(1b) receptor.     

高速逆流色谱法分离纯化丹参并尝试制订中药指纹图谱

用国产高速逆流色谱（HSCCC）分离纯化中草药——丹参,选用正己烷乙醇水体系,固定相保留率达到788%。采用分步洗脱,3个产地丹参各分离得到12个洗脱组分,经高效液相色谱仪和紫外光谱仪检测证明3张HSCCC洗脱图谱中对应洗脱峰为同一组分。HSCCC洗脱图谱不包含非共有峰,并且对应洗脱峰保留时间的相对标准偏差RSD<3%,符合国家标准关于制订指纹图谱方法学考察资料的技术参数。因此,HSCCC作为制订指纹图谱的方法之一具有可行性。     

Purification of betulinic acid from Eugenia florida (Myrtaceae) by high-speed counter-current chromatography

A high yield of betulinic acid (up to 17% from the ethanolic extract) was found in the leaves of Eugenia florida collected in south-eastern Brazil, making this species a potential commercial source of the title compound. Extracts of E. florida were subjected to solvent partition, and rapid high-speed counter-current chromatography (HSCCC) was applied to the semi-crude extracts to afford betulinic acid in high purity. The mobile and stationary phases were derived from the two-phase solvent system composed of n-hexane-ethyl acetate-methanol-water (10:5:2.5:1). The developing solvent system (stationary and mobile phases) for optimum HSCCC separation was chosen by dissolving the fraction to be chromatographed in the proposed solvent mixture and determining the amount of betulinic acid in each phase by densitometric TLC. Purified betulinic acid was characterized by 13C-NMR, GC-MS and co-injection of its methyl ester with standards in GC-FID. The HSCCC technique is commonly employed to isolate triterpene glycosides, but is applied in this study to an aglycone.     

高速逆流色谱用于天然产物分离和指纹图谱构建

利用国产高速逆流色谱分离纯化雪莲黄酮类成分和丹参醌类成分。雪莲分离选用氯仿 甲醇 水 (10∶7∶3)体系 ,固定相保留率 72 % ,仪器参数 80 0r min 2mL min ,采用一步洗脱法 ,7h内得到 14个组分 ;丹参分离选用正己烷 乙醇 水 (10∶5 5∶4 5 )体系 ,固定相保留率达到 78 8% ,采用分步洗脱 ,3个产地丹参在 13h内各分离得到 12个洗脱组分。HSCCC洗脱图谱可以表现出不同产地丹参的差别 ,并且各对应洗脱峰保留时间的相对标准偏差 <3% ,因此提出将HSCCC作为构建中药指纹图谱的方法之一 ,其可行性需要通过与常规的指纹图谱构建方法比较之后做出评价。     

高速逆流色谱仪分离纯化芦荟多糖的研究

采用紫外-可见分光光度计法进行了高速逆流色谱技术分离芦荟多糖的溶剂系统研究,得出了高速逆流色谱分离芦荟多糖的溶剂系统为w(PEG600)∶w(KH2PO4)∶w(K2HPO4)∶w(H2O)=5∶15∶15∶65,加入NaCl的质量分数为2%。在水浴温度30℃,转速600 r/min,下相流速为2 mL/min的条件下,采用高速逆流色谱技术成功分离出芦荟多糖粗品,得到APS-1和APS-2两个组分,经Sephadex G-100凝胶柱层析技术和高效凝胶渗透色谱技术初步分析:APS-1和APS-2均为单一组分。