一步法电泳分析肌联蛋白亚型和肌球蛋白重链

目的为研究超大分子量肌小节蛋白肌联蛋白(titin)的生理病理功能,在一次电泳过程中同时分离titin各亚型和中分子量肌小节蛋白肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)。方法使用16cm×18cm垂直电泳系统,在电泳板下1/3灌注10g/L SDS-PAGE胶,上2/3灌注60g/L SDS-琼脂糖(SDS-VAGE)胶。低温8℃下持续电泳5h,在电泳板上层以SDS-VAGE胶电泳分离titin亚型,下层以SDS-PAGE胶电泳分离MHC。电泳后VAGE胶使用银染法标记titin各亚型,PAGE胶使用考马斯亮蓝染色法标记MHC。结果 titin各亚型得到有效的分离,目标蛋白条带显示清晰,与其分子量大小一一对应,分离效果明确。结论一步法垂直电泳系统可应用于超大分子量蛋白的电泳,同时可分离多个分子量差距大的蛋白,提高蛋白电泳实验效率。     

种子中Puroindoline蛋白的SDS-PAGE分析

Puroindolne蛋白是小麦中特殊的Triton X-114可溶性蛋白质,对小麦籽粒硬度有着决定性的影响.从二倍体、六倍体小麦材料及小麦近缘种粗山羊草成熟种子中提取Puroindoline蛋白,就对该蛋白的SDS-PAGE及染色条件进行了优化和讨论,建立了浓缩胶T(凝胶浓度)为4、C(交联度)为2.6、电泳电压为128 V;分离胶T为13.5、C为2.6、电泳电压240 V,分离胶电泳时间1.5 h的结果稳定且重复性好的优化的SDS-PAGE条件.同时为降低电泳染色的实验成本,简化实验步骤,用蓝染法代替常用的银染法,并获得了良好的效果,为小麦中Puroindoline蛋白质的进一步研究奠定了实验基础.     

用于测定小分子多肽的两种电泳方法的比较

对于小分子多肽的分析目前多采用甘油—SDS—PAGE系统,但经实践后发现,此系统电泳时间太长,导致小分子扩散丢失较多,小分子成像不清。后经用尿素代替甘油,同时降低三层胶的浓度,制成15.5%T(C=6%)的分离胶、10%T(C=3%)的间隙胶与4%T(C=3%)的浓缩胶,结果不但节省了电泳时间,且小分子多肽成像清楚。     

棉铃虫围食膜蛋白的电泳分离技术

比较了棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)围食膜不同处理方法,不同围食膜数量,在不同电泳下的分离效果,筛选最佳的围食膜蛋白分离技术。结果表明:冷冻干燥与非冷冻干燥处理围食膜后进行SDS-PAGE电泳分离效果基本相同,建议使用冷冻干燥后处理较好。取1、3、5条围食膜进行SDS-PAGE电泳,都能将围食膜蛋白分离,且分离效果基本一致,建议5条围食膜最合适,具有可靠性和代表性。浓缩胶为5%、分离胶分别为8%、10%和12%时棉铃虫围食膜的SDS-PAGE电泳分离效果差异不大,而分离胶为12%时效果较好。无水三氟利克酸处理围食膜后进行NuPAGE电泳,分离出的围食膜蛋白大约30多种,远远超过上述方法分离的16²0种,且需要的围食膜材料少,分离效果最佳,但费用高。     

蜜蜂血淋巴蛋白质的淀粉胶电泳

凝胶电泳是区域电泳的一种,系利用凝胶(如琼脂、淀粉及多聚丙烯酰腈胺凝胶)作为电泳的支持物。1955年smithics首先应用淀粉胶电泳来分离人血清蛋自质。一系列的工作证明这种电泳法具有分辨力高、泳动区带清晰等优点。作者等曾采用该方法研究了家蚕Bombyx mori和蓖麻蚕Attacus cynthia rinici发育过程中血淋巴蛋白质成分的变化,发现随龄期的增长,其蛋白成分也相应增加。对于蜜蜂血淋巴生化成分的分析,尤其蛋白质、氨基酸和糖类等的研究近年来已日益受到重视。本实验应用淀粉胶电泳法研究了蜜蜂Apis millefera血淋巴蛋白质的胶电泳特性。 材料和方法 淀粉肢电泳包括有淀粉的部分水解、制胶、血淋巴     

黄原胶降解菌BIT-BJ001培养条件的优化

黄原胶在采油工程中有重要的应用,但其难降解性质给采油工程带来很多问题。从塔里木油田胡杨木根部样品中分离得到1株黄原胶降解菌BIT-BJ001,对其发酵条件的研究表明,此黄原胶降解菌最适培养条件为:黄原胶0.3%,酵母粉0.5%,Na+浓度0.8%,Mg2+浓度0.8%,初始pH值为10,温度60℃。菌种BIT-BJ001降解黄原胶的能力与发酵时间、发酵液中还原糖浓度有关,发酵96 h,黄原胶降粘率达到最高,发酵液中还原糖浓度过高,将抑制菌株对黄原胶的降解。     

一种改进的β淀粉样蛋白的电泳分离方法

目的：建立一种简便、快捷的β淀粉样蛋白的电泳分离方法。方法：比较以往报道的各种低分子量蛋白的电泳分离方法,对电泳缓冲液系统、分离胶和浓缩胶的浓度,电泳程序等进行了优化,结果：用改进的Two Phases Tris-Trincine-SDS-PAGE可以简单,快速,清地分离β淀粉样蛋白,结论：新建立的Two Phases Tris-Trincine-SDS-PAGE是一种较好地分离β淀粉样蛋白和其它超低分子量蛋白或多肽的电泳方法。     

凝胶电泳的凝胶浓度和交联度的正确选择

本文总结了前人对凝胶结构的分析后,提出在PAGE中,对未知样品电泳宜先在C%＝4%,T%＝5—10.5%的系列浓度分离胶,C%＝20%,T%＝3.5%的浓缩胶中作Disc-PAGE,选择该样品的最适分离胶浓度。再按此分离胶浓度作Vertical-PAGE,并在加样品量时作样品量的梯度,找出加样品的最适量。然后重复多次,以达到样品在PAGE中的最佳分辨率。     

小麦低分子量麦谷蛋白亚基分离条件优化

目的：优化一种有效分离小麦LMW-GS的实验条件。方法：以面包小麦L88-6作为材料,采用SDS-PAGE技术,通过对麦谷蛋白提取液、分离胶浓度、分离时间、电泳缓冲液等条件进行实验比较。结果与结论：含0.3mol/LNaI和1.4%4-VP的麦谷蛋白提取液能有效提取LMW-GS成分,分离胶浓度为T=14%C=3%、分离时间为40h、Tris-硼酸或Tris-甘氨酸电极缓冲液的分离条件分离效果好、重复性好、简单易行,为小麦低分子量麦谷蛋白亚基深入研究的第一个限速步骤提供了良好的解决方案。     

不经染色直接从SDS-PAGE制备凝胶中准确切下所需蛋白条带的方法

蛋白样品的垂直板SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)不但是一种最常用的蛋白分析方法,也经常用于蛋白质的制备。从电泳凝胶上纯化蛋白,一般都要先用考马斯亮蓝染色,然后切下所需的蛋白条带。这里介绍一种可以不染色,直接从SDS-PAGE制备凝胶上准确切割所需蛋白条带的方法。与染色后切胶的方法相比,这种方法简单、省时,分离到的蛋白容易从胶中洗脱回收,并可明显提高回收率,而且省去了令人烦怖的从回收的蛋白中脱去染色时结合的染料的问题。作者曾用此方法分离过多种蛋白,屡试不爽。这种方法与一般的SDS-PAGE制备电泳的差别主要在电泳结束后对凝胶的处理上。     

种子醇溶蛋白提取及检测条件探索

以大麦、小麦、玉米、高粱和苏丹草的种子为材料提取种子的醇溶蛋白,分析了不同提取剂及不同固液比[种子粉末样品质量(g)与提取剂的体积(mL)的比例]对种子醇溶蛋白提取效果的影响,并对SDS-PAGE检测醇溶蛋白中的不同胶浓度、厚度以及样品上样量等的影响进行了研究.结果表明,60%的正丙醇、乙二醇、异丙醇和叔丁醇分别是小麦、大麦、玉米以及高粱和苏丹草的最佳提取剂,将1∶6比例提取的种子醇溶蛋白以15μL上样,0.5mm厚度的15%分离胶电泳可以得到清晰的电泳检测图谱.     

简易连续密度梯度凝胶电泳

目前,圆盘电泳由于其操作的简便和测定的灵敏已在生化研究中广泛地应用。但是,对于一些含有多种蛋白质分子的样品来讲,一种胶的浓度往往不能同时适合于各种蛋白质分子的分离。连续密度梯度凝胶由于其凝胶的浓度可在一定范围内(如4％—12％)连续地逐步增加,故颇能得到良好的     

用于荧光辅助糖电泳寡糖标尺的构建

荧光辅助糖电泳(FACE)是一种简洁廉价的分离糖类方法。寡糖首先与8-氨基萘基-1,3,6-三磺酸(ANTS)反应标记,然后,ANTS标记的寡糖通过在32％丙烯酰胺-2．4％双丙烯酰胺组成的分离胶上电泳从而得以相互分离。结果表明,电泳图谱能准确反映寡糖的聚合度梯度,因而,一种具有连续聚合度的淀粉水解液的荧光标记电泳图谱可以作为荧光辅助糖电泳的分子量标尺。     

蚕核糖核酸结构与功能的研究——Ⅰ.长距离垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳装置的改进及蚕后部丝腺体小分子RNA的分离

对长距离平板垂直聚丙烯酰胺电泳的装置作了改进以后有如下一些特点: (1)装置结构简单可靠,其基本材料只需二块有机玻璃板和一根乳胶管; (2)制胶长度可达40厘米或更长,但只需一次灌胶; (3)不需要在装置边缘涂抹任何脂类物质,底部也不需要填塞任何蜡泥塑料,而无渗漏现象; (4)制胶厚度可达0.5～2.5毫米。由于以上特点,而使本装置优于其他垂直平板电泳装置。用本装置对五龄蓖麻蚕和家蚕后部丝腺体小分子RNA进行分离,分离效果和重复性良好。     

一种小麦高、低分子量麦谷蛋白亚基的提取方法

用7.5%的异丙醇和0.3 mol/L的NaI去除醇溶蛋白和其他单体蛋白, 以二硫苏糖醇(DTT)为强还原剂, 以4-乙烯基吡啶 (VP)保护巯基, 防止其重新氧化。在25%的异丙醇和0.04 mol/L的Tris-HCl (pH=8.0)缓冲液中提取小麦总麦谷蛋白亚基、在4%浓缩胶和13%分离胶的不连续分离体系中进行SDS-PAGE电泳, 结果表明, 该方法不仅能有效去除醇溶蛋白和其他蛋白对麦谷蛋白亚基电泳的影响, 且高分子量麦谷蛋白亚基 (HMW-GS) 和低分子量麦谷蛋白亚基 (LMW-GS)的提取分离一步完成, 更重要的是, 利用该方法提取出的HMW-GS和LMW-GS在电泳分析中, 具有高的分辨率, 可以有效区分各电泳谱带, 为进一步研究奠定了基础。     

用垂直凝胶脉冲电泳分离染色体DNA

脉冲电场凝胶电泳(PFGE)是近几年发展起来的一种分离高分子DNA片段(50—10000kb)的有效方法。包括正交场,六边形场,反向场和垂直胶脉冲电泳。本文改进了垂直胶脉冲电场(TAFE)的条件,使酵母DCo4染色体电泳核型从11条带提高到14条。利用TAFE鉴定了蛋白酶消化法和TLS法制备的人基因A,其分子长度主要分布在200—450kb。     

用于测定小分子多肽的两种电泳方法的比较

对于小分子多肽的分析目前多采用甘油－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ系统,但经实践后发现,此系统电泳时间太长,导致小分子扩散丢失较多,小分子成像不清,后经用尿素代替甘不同,同时降低三层胶的浓度,制成１５.5％Ｔ（Ｃ＝６％）的分离胶、１０％Ｔ（Ｃ＝３％）的间隙胶与４％Ｔ（Ｃ＝３％）的浓缩胶档但节省了电泳时间,且小分子多肽成像清楚。     

琼脂糖凝胶电泳技术

九、碱性琼脂糖凝胶 科学家们认为,琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段的一种极好的方法。这种技术操作简单,快速,并且还能解决在密度梯度离心中所存在的DNA片段不能充分分离的难题。此外,还能直接确定凝胶中DNA的位置:其方法是先用低浓度的能发荧光的具有插入本领的染料(溴乙锭),对胶中DNA条带进行染色;然后,把电泳胶置于紫外光下进行直接检测,其灵敏度可达1毫微克(ng)。     

蚕核糖核酸结构与功能的研究 Ⅰ.长距离垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳装置的改进及蚕后部丝腺体小分子RNA的分离

对长距离平板垂直聚丙烯酰胺电泳的装置作了改进以后有如下一些特点:(1)装置结构简单可靠,其基本材料只需二块有机玻璃板和一根乳胶管;(2)制胶长度可达40厘米或更长,但只需一次灌胶;(3)不需要在装置边缘涂抹任何脂类物质,底部也不需要填塞任何蜡泥塑料,而无渗漏现象;(4)制胶厚度可达0.5～2.5毫米。由于以上特点,而使本装置优于其他垂直平板电泳装置。用本装置对五龄蓖麻蚕和家蚕后部丝腺体小分子RNA 进行分离,分离效果和重复性良好。     

薯蓣内生真菌抗氧化活性的初步研究

用碘量法研究了4株薯蓣内生真菌的发酵液和菌丝的抗氧化活性。结果表明,4株菌株的菌丝和发酵液具有不同的抗氧化活性,其中从薯蓣块茎中分离得到菌株EDT5发酵液的抗氧化活性最强,从薯蓣种子中分离得到菌株EDS4发酵液的抗氧化活性次之,并且在一定范围内,随着发酵液粗提物浓度的增加,其抗氧化活性增强。EDT5和EDS4发酵液的抗氧化效果高于或近于其宿主薯蓣而高于维生素E的抗氧化效果,表明内生真菌是天然抗氧化产物开发的潜在重要资源之一。