肝星形细胞分泌的趋化因子CXCL1在肝癌转归中的作用

该文探讨了人肝星形细胞(hepatic stellate cells,HSC)对肝癌细胞(Hep G2、SMMC-7721)的迁移、侵袭能力和上皮–间质转化(epithelial-msenchymal transition,EMT)的影响及其机制。采用条件培养法培养肝癌细胞,利用细胞划痕和Transwell实验分析肝星形细胞对肝癌细胞的迁移和侵袭作用。Western blot分析肝星形细胞自身及其分泌到培养液中趋化因子CXCL1[chemokine(C-X-C motif)ligand 1]和肝癌细胞的CXCL1受体2—CXCR2(CXCL1 receptor 2)的表达量,以及条件培养下肝癌细胞中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β和Snail的表达变化。激光共聚焦显微术和Western blot检测肝癌细胞上皮标志物E-cadherin、间质标志物N-cadherin和Vimentin的表达变化。结果显示,在HSC中大量表达并分泌趋化因子CXCL1,而肝癌细胞Hep G2、SMMC-7721中高表达CXCR2。肝癌细胞通过条件培养后,细胞形态改变,细胞黏附下降,细胞迁移和侵袭能力增强,上皮标志物E-cadherin蛋白表达下调、间质标志物N-cadherin蛋白和Vimentin蛋白表达上调,PI3K/AKT信号通路中的关键成员PI3K和AKT磷酸化水平上调,p-GSK-3β和转录因子Snail表达上调。在肝癌细胞条件培养下加入CXCR2受体的特异性抑制剂(SB265610)后,肝癌细胞上皮标志物E-cadherin蛋白表达上调、间质标志物N-cadherin蛋白和Vimentin蛋白表达下调,p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β和Snail的表达下调。以上结果说明,肝星形细胞可能通过CXCL1/CXCR2轴活化PI3K/AKT信号通路并最终促进肝癌细胞上皮–间质转化。     

趋化因子受体CX3CR1对人肝癌细胞7721和HepG2的作用及其机制的研究

目的:探究趋化因子受体CX3CR1(C-X3-C motif chemokine receptor 1,CX3CR1)对人肝癌细胞7721和Hep G2增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:采用Q-PCR和Western blot法分别检测人正常肝细胞LO2和两种肝癌细胞(7721和Hep G2)中CX3CR1的基因表达情况(mRNA和蛋白质);以过表达CX3CR1的质粒转染7721细胞,用抑制CX3CR1的干扰RNA转染Hep G2细胞,通过Q-PCR和Western blot法检测CX3CR1的变化;应用MTT和流式细胞实验检测各组细胞的增殖能力;用集落形成实验检测各组细胞的自我更新和增殖能力;借助划痕愈合和Transwell检测各组细胞的迁移和侵袭能力;利用Western blot法检测PI3K/AKT、MAPK/ERK信号通路的激活情况。结果:CX3CR1在7721细胞中mRNA和蛋白质呈低表达趋势,而在Hep G2细胞中则呈高表达趋势;转染过表达CX3CR1质粒后7721细胞中CX3CR1的mRNA和蛋白水平有明显的升高,细胞的增殖、迁移、侵袭能力增强,p-AKT和p-ERK水平升高;转染干扰RNA后Hep G2细胞中的CX3CR1表达水平明显下降,增殖、迁移、侵袭能力减弱,p-AKT和p-ERK水平降低。结论:趋化因子受体CX3CR1可以促进人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,该作用可能与PI3K/AKT、MAPK/ERK信号通路激活有关。     

臭椿酮抑制急性骨髓性白血病细胞恶性生物学行为的研究

为了探讨臭椿酮（ailanthone,AIL）对急性骨髓性白血病（acute myelogenous leukemia,AML）细胞恶性生物学行为的影响,用不同浓度（0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 μmol·L^-1）的AIL处理对数生长期的HL-60细胞,将miR-449a mimic质粒、mimic对照质粒、miR-449a inhibitor质粒、inhibitor对照质粒分别转染至未经任何处理的HL-60细胞,并用1.0 μmol·L^-1浓度的AIL处理细胞24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖水平,细胞划痕实验检测细胞迁移水平,Transwell小室法检测细胞侵袭水平,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平,qRT-PCR法检测miR-449a mRNA表达水平,Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化PI3K（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）蛋白表达水平。结果显示,AIL干预后HL-60细胞增殖抑制率、凋亡率升高,细胞迁移率及细胞侵袭数降低（P<0.05）,miR-449a mRNA表达量升高（P<0.05）。过表达miR-449a可以抑制HL-60细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡（P<0.05）,抑制miR-449a的表达可以起到逆转AIL抑制HL-60细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡的作用（P<0.05）。AIL能够显著降低HL-60细胞中p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值（P<0.05）,抑制miR-449a表达可以逆转AIL对HL-60细胞p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值的下调作用（P<0.05）。结果表明,AIL可通过上调miR-449a抑制AML细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。结果表明,AIL有望成为AML治疗的候选药物。     

HINT2在甲状腺乳头状癌中的表达和功能研究

HINT2与多种肿瘤发生发展密切相关,在甲状腺癌中的功能还不清楚。该文使用组织芯片检测甲状腺乳头状癌组织中HINT2的表达,发现12例癌组织中HINT2蛋白表达水平显著高于正常组织(86%,P0.05)。该文构建高表达和低表达HINT2的甲状腺乳头状癌细胞系K1稳定克隆后,使用CCK8和克隆形成实验检测HINT2对细胞增殖能力的影响,采用Transwell和划痕法检测细胞迁移能力,使用Matrigel Transwell法检测细胞侵袭能力。结果发现,高表达HINT2促进了K1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,而干扰HINT2则抑制了细胞的这些恶性表型。最后,该文用Western blot方法检测AKT和ERK的活化情况,发现高表达HINT2促进AKT和ERK的磷酸化,而干扰HINT2则抑制AKT和ERK的磷酸化。这些结果说明,HINT2可能是甲状腺乳头状癌的原癌基因,通过调控PI3K/AKT和MAPK/ERK通路影响甲状腺肉头状癌的恶性表型。     

Nampt及高糖高胰岛素微环境对人顺铂耐药肺癌细胞株增殖和转移的影响

摘要 目的：探究烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）及高糖高胰岛素（HG+HI）微环境对人顺铂耐药肺癌细胞增殖和转移的影响。方法：将人顺铂耐药细胞株A549/DDP分为6组（n=6）：对照组（control）、高糖高胰岛素干预组（HH，使用添加30 mmol/L的葡萄糖和500 mU/L的胰岛素的培养基培养72 h）、分别转染sh-NC和sh-Nampt组（sh-NC和sh-Nampt，使用Lipofectamine 2000将sh-NC和sh-Nampt分别转染到细胞中，转染时间为48 h）、HH干预sh-NC和sh-Nampt组（HH+sh-NC和HH+sh-Nampt）。每组6个重复样本。qRT-PCR检测转染效率，MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell检测细胞迁移和侵袭，qRT-PCR检测Nampt mRNA，Western blot检测Nampt、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达。结果：与对照组和sh-NC组比较，sh-Nampt组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量降低，而细胞凋亡率升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低，Bax蛋白表达水平升高（P<0.005）。与对照组和sh-NC组比较，HH组和HH+sh-NC组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平升高，Bax蛋白表达水平降低（P<0.005）。与HH组和HH+sh-NC组比较，HH+sh-Nampt组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量降低，细胞凋亡率升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低，Bax蛋白表达水平升高（P<0.005）。结论：高糖高胰岛素微环境可能通过上调Nampt/PI3K/AKT信号通路诱导人顺铂耐药肺癌细胞的增殖和转移。     

shRNA介导DEPDC7基因沉默对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭及迁移能力影响的研究

功能未知基因DEPDC7(DEP domain containing 7)是从基因芯片数据挖掘得到的,基因表达谱提示只在肝组织中选择性高表达,但是关于DEPDC7在肝癌细胞内参与的生命活动及其分子机制的相关研究报道较少。该研究应用RNAi技术构建DEPDC7慢病毒载体并感染人肝癌细胞株HepG2,利用RT-q PCR和Western blot方法检测DEPDC7干扰效果。运用噻唑蓝(MTT)比色法和克隆形成方法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Transwell小室检测细胞侵袭迁移能力。结果显示,成功构建的DEPDC7慢病毒载体可以有效干扰DEPDC7 m RNA和蛋白的表达(P0.05)。此外,DEPDC7被沉默后,可以有效促进细胞周期从G1期向S期转变,细胞增殖和侵袭迁移能力均显著提高(P0.05)。该研究提示,肝癌细胞HepG2中DEPDC7低表达能有效提高细胞增殖、克隆形成和侵袭迁移能力,为后续研究DEPDC7转录调控机制等指明了方向。     

TRPM7调控PI3K/AKT通路对人脑血管外膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAFs)的异常增殖参与了血管增殖性疾病的发生发展。该研究探讨TRPM7(transient receptor potential melastatin 7)能否通过调控PI3K/AKT信号通路影响HBVAFs增殖和凋亡。体外培养HBVAFs细胞,分为如下几组:parental(正常培养HBVAFs细胞)、si-NC、si-TRPM7、si-NC+IGF-1(PI3K/AKT信号通路激活剂)、si-TRPM7+IGF-1。通过qRT-PCR法检测TRPM7 mRNA表达;CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况;Western blot法检测目的蛋白水平。结果显示,si-TRPM7转染可显著降低HBVAFs细胞中TRPM7 mRNA和蛋白表达水平(P0.001);与si-NC组比较,si-TRPM7组细胞增殖活力下降(P0.001),细胞G_0～G_1期细胞比率上升(P0.001),S期细胞比率下降(P0.001),周期调控蛋白CCND1、CDK2、CDK4水平均明显下降(P0.001),凋亡百分比增加(P0.001),Bcl-2、p-PI3K及p-AKT蛋白表达下降(P0.001),Bax、cleaved caspase-3及Cytochrome c蛋白表达增加(P0.001);而PI3K/AKT信号通路激活剂IGF-1处理可有效逆转si-TRPM7介导的上述改变(P0.001)。这些结果提示,干扰TRPM7表达可通过抑制PI3K/AKT信号通路激活发挥抑制HBVAFs细胞增殖并诱导凋亡的作用,为TRPM7作为血管增殖性疾病的治疗靶点提供理论依据。     

Hsa_circ_0000745对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移的作用及其机制

该文主要研究环状RNA hsacirc0000745对肝癌细胞的促肿瘤作用及其相关作用机制。首先,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测不同肝癌细胞中环状RNA hsacirc0000745的表达;其次,利用siRNA干扰技术敲低HepG2细胞中的hsacirc0000745;然后,采用CCK-8和平板克隆实验检测细胞的增殖能力,用Transwell实验和划痕愈合实验检测肝癌细胞HepG2的侵袭及迁移能力,利用Western blot方法检测增殖、侵袭及迁移相关蛋白的表达。结果表明,干扰hsacirc0000745后,肝癌细胞的增殖及克隆形成能力降低(P<0.05),同时伴有增殖相关蛋白cyclin D1表达水平下降(P<0.001),细胞迁移和侵袭能力降低(P<0.05),上皮标志物E-Cadherin的表达水平上调(P<0.05),而间质标志物N-Cadherin和Vimentin的表达水平下调(P<0.05)。该研究结果表明,干扰hsacirc0000745显著抑制肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力和上皮–间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)。这为肝癌的诊断和治疗提供了新的潜在靶点和视角。     

白藜芦醇通过Pi3K/AKT 通路抑制胃癌SGC-7901 细胞增殖和迁移

目的:验证白藜芦醇是否可以抑制胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移及其信号通路。方法:用不同浓度白藜芦醇干预SGC-7901细胞,再用LY-294002和IGF-1分别用来抑制和激活Pi3K/AKT通路。MTT法测细胞增殖,划痕试验和Transwell试验测细胞迁移,Western blot检测细胞迁移相关蛋白(MMP-2、MMP-9)、细胞迁移相关蛋白(P21、P27)、以及AKT、p-AKT的表达情况;结果:相比于对照组,白藜芦醇组胃癌细胞增殖和迁移减弱(P=0.001),p-AKT表达减少(P0.001);LY-294002可以抑制p-AKT的表达(P=0.004),和白藜芦醇一样可以抑制胃癌细胞的增殖和迁移;IGF-1可以显著增加p-AKT的表达(P0.001),可以逆转白藜芦醇对胃癌细胞增殖和迁移的抑制作用。结论:白藜芦醇通过抑制Pi3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖和迁移。     

RNA干扰CD151基因表达抑制肝癌细胞侵袭

目的研究RNA干扰(RNA interference RNAi)抑制CD151表达对人类肝癌细胞迁移侵袭的影响及分子机制。方法将CD151-siRNA在脂质体介导下瞬时转入人肝癌HepG2细胞,倒置荧光显微镜观察转染效率,用qPCR,western blot检测HepG2细胞CD151mRNA和蛋白表达,体外研究肿瘤细胞迁移和侵袭能力,并检测相关信号通路的变化。结果成功转染CD151-siRNA后,HepG2细胞CD151基因的表达与正常对照组和阴性对照组相比,mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05),细胞迁移和侵袭能力明显下降(P0.05),同时,沉默CD151的表达,FAK,ERK的磷酸化受抑制。结论CD151-siRNA能有效抑制人肝癌细胞CD151基因mRNA和蛋白的表达,通过抑制FAK,ERK蛋白的磷酸化水平,降低细胞的迁移和侵袭力。     

MicroRNA-630 suppresses epithelial-to-mesenchymal transition by regulating FoxM1 in gastric cancer cells

In the present study, we investigated the functional role of microRNA (miR)-630 in epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) of gastric cancer (GC) cells, as well as the regulatory mechanism. Cells of human GC cell line SGC 7901 were transfected with miR-630 mimic or miR-630 inhibitor. The transfection efficiency was confirmed by qRT-PCR. Cell migration and invasion were determined by Transwell assay. Protein expression of E-cadherin, vimentin, and Forkhead box protein M1 (FoxM1) was tested by Western blot. Moreover, the expression of FoxM1 was elevated or suppressed, and then the effects of miR-630 abnormal expression on EMT and properties of migration and invasion were examined again, as well as protein expression of Ras/phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/AKT related factors. The results showed that (i) the EMT and properties of migration and invasion were statistically decreased by overexpression of miR-630 compared to the control group but markedly increased by suppression of miR-630. However, (ii) abnormal expression of FoxM1 reversed these effects in GC cells. Moreover, (iii) expression of GTP-Rac1, p-PI3K, and p-AKT was decreased by miR-630 overexpression but increased by FoxM1 overexpression. (iv) The decreased levels of GTP-Rac1, p-PI3K, and p-AKT induced by miR-630 overexpression were dramatically elevated by simultaneous overexpression of FoxM1. In conclusion, our results suggest that miR-630 might be a tumor suppressor in GC cells. MiR-630 suppresses EMT by regulating FoxM1 in GC cells, supposedly via inactivation of the Ras/PI3K/AKT pathway.     

沉默脂肪细胞增强子结合蛋白2通过PI3K/Akt途径抑制肝癌细胞增殖和迁移

脂肪细胞增强子结合蛋白2(AEBP2)作为多梳抑制复合物2(PRC2)的组成蛋白质,参与多种肿瘤细胞的增殖和迁移,然而其在肝癌中的作用尚不清楚。本研究基于UALCAN和Kaplan-Meier Plotter数据库分析发现,AEBP2在肝癌组织中高表达,并且与患者的不良预后呈正相关。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹结果证实,AEBP2在肝癌细胞中的表达高于正常肝细胞。在HepG2和Huh-7细胞中转染AEBP2 siRNA,平板克隆、CCK-8、流式细胞术、划痕愈合和Transwell结果显示,沉默AEBP2可以抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡(P＜0.05)。免疫荧光检测和蛋白质印迹结果显示,沉默AEBP2能够抑制肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)(P＜0.05)。生物信息学分析结果表明,AEBP2参与调控PI3K/Akt信号通路。蛋白质印迹结果证实,沉默AEBP2能下调PI3K、p-AKT (S473)、mTOR、MMP-2和MMP-9的蛋白质表达水平(P＜0.05)。此外,沉默AEBP2对HepG2细胞迁移和侵袭的影响可被PI3K/Akt通路激动剂胰岛素样生长因子1(IGF-1)部分逆转(P＜0.01)。综上所述,AEBP2可能通过调节PI3K/Akt途径促进肝癌细胞增殖和迁移。本研究为AEBP2在肝癌中的作用提供理论依据。     

趋化因子受体CX3CR1调控人主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的作用研究

目的:探究趋化因子受体CX3CR1调控人主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的作用和机制,为钙化性主动脉瓣膜疾病的早期干预和治疗提供新思路。方法:取非钙化主动脉瓣(3例)和钙化主动脉瓣(5例),免疫组织化学染色检测成骨相关转录因子Runx2、骨桥蛋白OPN和骨钙蛋白OCN的表达;取3例非钙化的主动脉瓣,采用胶原酶连续消化法分离人主动脉瓣膜间质细胞,观察细胞形态及生长状态,并采用细胞免疫荧光进行表型鉴定。对成骨诱导培养的人主动脉瓣膜间质细胞分别过表达和干扰趋化因子受体CX3CR1,平行设置CM组、OM组和negative control+OM组,采用qPCR和Western blot检测Runx2、OPN和OCN的表达,Western blot检测AKT和p-AKT的表达。茜素红S染色评价晚期钙结节形成情况。结果:临床标本显示钙化的主动脉瓣较非钙化的主动脉瓣高表达CX3CR1(P 0. 05);成功分离人主动脉瓣膜间质细胞,α-SMA和Vimentin阳性,vWF阴性。与CM、OM、negative control组比较,CX3CR1+OM组Runx2、OPN和p-AKT表达上调(P 0. 05),且茜素红S染色可见明显钙结节;与CM、OM、negative siRNA control+OM组比较,si CX3CR1+OM组Runx2、OPN和p-AKT表达下调(P 0. 05),且茜素红S染色可见钙结节减少。结论:趋化因子受体CX3CR1可能通过AKT信号通路促进人主动脉瓣膜间质细胞成骨分化。     

四逆散对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其机制*

目的: 探讨含四逆散药液血清对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法: 将人肝癌HepG2细胞分为5组,每组3个复孔。实验组细胞用五氟尿嘧啶(5-FU)或不同浓度的含四逆散药液血清处理48 h后,用倒置显微镜观察含四逆散药液血清处理后人肝癌HepG2细胞形态的变化;MTT法检测含四逆散药液血清对HepG2细胞生长的抑制作用;荧光染色和流式细胞术分别分析含四逆散药液血清对HepG2细胞凋亡的影响。Rho123染色法检测线粒体膜电位变化,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果: 与对照组比较,含四逆散药液血清处理人肝癌HepG2细胞后,细胞数量显著减少(P＜0.01),形态发生改变,呈现典型的凋亡细胞形态;G1期细胞数明显增加,而G2 期细胞数量显著减少(P＜0.05);Bax、Caspase-3、-9和Cyt-c的表达显著升高,而Bcl-2的表达显著降低(P＜0.05);随着含四逆散药液血清浓度增大,HepG2细胞线粒体膜电位显著下降(P＜0.05)。结论: 四逆散可以抑制HepG2细胞增殖,并通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

CGK733 enhances multinucleated cell formation and cytotoxicity induced by taxol in Chk1-deficient HBV-positive hepatocellular carcinoma cells

Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most deadly human cancers. Chronic hepatitis B virus (HBV) infection is one of the predominant risk factors associated with the development of HCC and complicates the treatment of HCC. In this study, we demonstrate that a HBV-positive HCC cell line HepG2.2.15, was more resistant to chemotherapy agents than its parental HBV-negative cell line HepG2. HBV-positive HCC cells exhibited defective Chk1 phosphorylation and increased chromosomal instability. CGK733, a small molecule inhibitor reportedly targeting the kinase activities of ATM and ATR, significantly enhanced taxol-induced cytotoxicity in HBV-positive HepG2.2.15 cells. The mechanism lies in CGK733 triggers the formation of multinucleated cells thus promotes the premature mitotic exit of taxol-induced mitotic-damaged cells through multinucleation and mitotic catastrophe in HBV-positive HepG2.2.15 cells. These results suggest that CGK733 could potentially reverse the taxol resistance in HBV-positive HCC cells and may suggest a novel strategy to treat HBV-infected HCC patients.     

Anticancer effects of echinacoside in hepatocellular carcinoma mouse model and HepG2 cells

Echinacoside (ECH) is a phenylethanoid glycoside extracted from a Chinese herbal medicine, Cistanches salsa. ECH possesses many biological properties, including anti-inflammation, neural protection, liver protection, and antitumor. In the current study, we aimed to explore the effects of ECH on hepatocellular carcinoma (HCC) and the underlying mechanisms. The results showed that ECH could attenuate diethylnitrosamine (DEN)-induced HCC in mice, and exerted antiproliferative and proapoptotic functions on HepG2 HCC cell line. ECH exposure in HepG2 cells dose-dependently reduced the phosphorylation of AKT (p-AKT) and enhanced the expression of p21 (a cell cycle inhibitor) and Bax (a proapoptotic protein). Furthermore, ECH significantly suppressed insulin-like growth factor-1-induced p-AKT and cell proliferation. These data indicated that phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/AKT signaling was involved in the anti-HCC activity of ECH. Gene set enrichment analysis results revealed a positive correlation between the PI3K pathway and triggering receptors expressed on myeloid cells 2 (TREM2) expression in HCC tissues. ECH exposure significantly decreased TREM2 protein levels in HepG2 cells and DEN-induced HCC. Furthermore, ECH-mediated proliferation inhibition and AKT signaling inactivation were notably attenuated by TREM2 overexpression. In conclusion, ECH exerted its antitumor activity via decreasing TREM2 expression and PI3K/AKT signaling.     

RHCG基因在非小细胞肺癌中的表达及对细胞增殖的影响

为了探讨Rh type C glycoprotein (RHCG)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖的影响及可能的作用机制,本研究使用荧光定量PCR法检测12对NSCLC及癌旁组织样本中RHCG mRNA的表达水平及pcDNA3.1-RHCG质粒对A549细胞RHCG m RNA的表达;采用CCK-8法检测细胞增殖能力;运用PI染色法检测细胞周期;使用免疫印迹法检p-PI3K、PI3K、p-AKT以及AKT蛋白表达水平。本研究发现,与癌旁组织比较,NSCLC中RHCG m RNA表达水平明显降低。RHCG过表达能抑制NSCLC细胞系A549细胞增殖能力。此外,RHCG过表达使A549细胞周期G1/S期转化发生阻滞。本研究还发现,RHCG过表达可下调A549细胞p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT水平。本研究表明,RHCG抑制NSCLC细胞增殖的作用与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

紫草素对肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响及其机制

目的: 探讨紫草素对肝癌SMMC-772细胞的作用及分子机制。方法: SMMC-7721细胞分别经0、5、20、80、320 ng/ml的紫草素作用0 h、24 h、48 h和72 h后,适时采用CCK8法观察该细胞增殖的活性,hoechst染色分析细胞的核型变化,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Western blot证实细胞内蛋白表达水平的改变,通过小鼠体内实验观察该药的抑瘤作用。结果: 本研究体外实验发现紫草素可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖活性并诱导其凋亡(P＜0.01),上调基因p53的表达,并抑制AKT、PI3K蛋白的磷酸化,体内实验也证实紫草素可显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长(P＜0.01),作用效果随用药剂量和时间的增加而增加。结论: 紫草素可通过影响PI3K/AKT信号通路抑制SMMC-7721细胞的增殖,且诱导其凋亡,具有潜在的抗肝癌作用。