溶剂稳定性蛋白酶产生菌的筛选和鉴定

自油污土样等样品中分离获得一株具有产胞外溶剂稳定性蛋白酶的耐有机溶剂极端微生物,经BIOLOG系统鉴定及16S rDNA序列(GenBank,EF105377)分析,该菌株为Bacillus licheniformis YP1。该菌株能耐受中浓度盐、强碱性环境(pH12)及多种不同浓度的有机溶剂,但对多种抗生素敏感。在YP1产蛋白酶发酵过程中添加各种有机溶剂结果表明,丙酮虽抑制了菌体生物量的生长却促进了单位菌体的蛋白酶分泌,而长链烷醇如辛醇、十二醇等能强烈抑制该蛋白酶的分泌。该菌株所产蛋白酶经11种50%(V/V)有机溶剂处理后均能保留高活力。该溶剂稳定性蛋白酶在有机相生物催化等领域具有良好的应用前景。     

蛋白酶产生菌的筛选和紫外诱变育种

目的:筛选水产品加工用蛋白酶产生菌,为酶的的分子改造和水产品加工提供材料基础.方法:通过在富含水产品蛋白的场所的针对性采样,菌落平板筛选结合发酵上清液平板验证以及Folin-酚试剂定量检测确认筛选结果,并通过紫外诱变提高产中性蛋白酶菌株的产酶能力.结果:从12份土样中分离187株具有明显蛋白酶活性的单菌落.在挑取的11株透明圈明显的蛋白酶产生菌中,菌株W9在所有菌株中可以稳定产生较高的蛋白酶酶活力,约为1 594U/ml.通过对其进行紫外诱变后,在突变株中筛选得到一株酶活约为1 845U/ml的 W9UV突变株,比野生菌株酶活提高了15.6%.结论:突变菌株W9UV可稳定产生较高的蛋白酶酶活力,发酵性能优良.     

脲酶抑制剂产生菌筛选和抑制剂的提取

建立了筛选脲酶抑制剂产生菌的模式,获得三个菌株,其中代号为I36的菌株,经鉴定为赭曲霉。该菌株产生脲酶抑制剂适宜的培养条件：培养基为2％葡萄糖,10％马铃薯,pH值自然,28～30℃,液体静置培养12d。测定液体培养液（含粗制粉2.0mg）对灰泥田和黄泥田土壤酶活性的抑制率4d分别为13.5％和100％。从赭曲霉代谢产物提取到的其中一种抑酶物质,经硅胶薄层层析和高效液相色谱鉴定达到均一。     

碱性蛋白酶产生菌的筛选及发酵条件考查

从土壤中分离到的167株芽胞杆菌中选出一株高产、稳产碱性蛋白酶菌株A4－3（嗜碱性枯草芽胞杆菌）。该菌株最适产酶条件为（g／100ml）：蔗糖6．0;豆饼水解液10.0;Na2CO31．0;起始pH9．5。在该条件下,经37℃振荡培养48h,酶活力达2612u／ml。     

枯草杆菌中性蛋白酶天然抑制剂的筛选

用透明因法和福林──酚法筛选了２１种植物中的蛋白酶活性抑制剂,其中来自鼓皮、高粱、玉米和土豆的抑制剂的活性在本研究条件下达５０％以上。进一步研究了麸皮、玉米两种抑制剂在不同温度和ｐＨ值下的稳定性,结果表明,两者的稳定性相差甚远,是两类不同的抑制剂。玉米抑制剂比麸皮抑制剂更稳定。     

胞外弹性蛋白酶产生菌的筛选及酶的纯化

从土壤中筛选到132株能分泌胞外弹性蛋白酶的细菌,经复筛得5株产酶在100u/ml以上,其中No.17-87菌每毫升发酵液含酶120单位,经鉴定为芳香黄杆菌。该菌在26℃发酵21小时酶产量即达峰值。从发酵液中分离纯化得到聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的酶制品。SDS-PAGE测得分子量为21300,最适作用温度为50℃,最适作用pH为7.4,在pH4.5—9.5范围内稳定,重金属离子Fe^(3+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)、Cr^(3+)、CO^(2+)、Ni^(2+)、Hg^(2+)和Ag^+等严重抑制酶活性。     

弹性蛋白酶产生菌发酵条件的研究

针对不同碳氮源及无机盐对芽胞杆菌EA915产弹性蛋白酶的影响进行了研究,结果表明,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为酵母膏,无机盐硫酸镁,硫酸亚铁对弹性蛋白酶的产生有促进作用.初步研究了产酶条件,在初始pH为7.0、摇瓶装液量20mL/250mL ,37℃下发酵52h,酶活最高,达到160 U/mL.     

深层培养黑曲霉生产酸性蛋白酶的研究I．酸性蛋白酶产生菌的筛选及其培养条件

用5种培养基,从120株霉菌中筛得5株产生酸性蛋白酶的黑曲霉及其突变株。对影响这些菌株生产酸性蛋白酶的各种因素的研究结果表明,黑曲霉生产酸性蛋白酶需要高浓度的氮源,特别是无机氮,这与其他微生物蛋白酶的生产有所不同。另外,CaCl2,、胨、豆饼粉、蚕蛹粉、鱼粉的石灰水解液均能促进酸性蛋白酶的生产。磷酸盐、微量的Cu++、Fe++、Mn++、Ni++、于产酶略有促进作用。培养基中固形物的浓度、通气量、起始pH、种子培养条件以及种龄、种量等都对产酶有明显的影响。     

微生物蛋白酶抑制剂的筛选和检测方法

源于微生物的蛋白酶抑制剂都具有小分子、低毒性的特点,它比来自于动、植物体的大分子蛋白酶抑制剂在医学上更有实际意义。从病理学的角度来看,蛋白水解酶与炎症、受精、致癌及肌肉萎缩等疑难疾病有着密切的联系。可以想像作为控制蛋白酶活力的抑制剂势必在防治上述疾病中发挥其潜在的作用。动物实验与临床应用证实了上述认识的正确性。抗肽剂、抑糜酶剂和亮肽剂都能抑制烧伤时的疼痛,具有显著抑制水泡形成的作用。抑胃酶剂、亮肽剂、抗肽剂和抑糜酶剂都具有抑制海胆受精过程的效果。亮肽剂能抑制由致癌物质诱发的鼷鼠皮肤肿瘤的形成和大肠癌的发生也能抑制食道癌、乳癌的发生。抑胃酶剂还具有显著地     

高温中性蛋白酶及其产生菌的初步研究

对高温中性蛋白酶产生菌耐热芽孢杆菌(Thermophilic Bacillus)XJT9503的产酶条件及酶的提取进行了初步研究。耐热芽孢杆菌XJT503产酶的摇瓶培养基最适碳源为葡萄糖,最适氮源为豆饼粉,100r／min,46℃培养60h酶活最高。实验结果表明高温中性蛋白酶提取可采用硫酸铵分级沉淀法。     

脂肪酶产生菌的筛选及鉴定研究

为寻找合适的产脂肪酶野生菌,以期能高效的催化合成生物柴油。通过添加橄榄油作为惟一碳源进行富集培养,然后以透明圈平板筛选法从油污土壤样品中成功地筛选到了一株酶活力值为10.12U/ml产脂肪酶菌株。通过对该菌株表型、生理生化特征分析及16S rRNA部分序列的系统进化发育分析鉴定该菌为芽胞杆菌属,定名为BacilluspumilusB2。     

脱落酸产生菌的初步筛选

从三份不同来源的土样中分离出４０株真菌。以脱落酸（±）ＡＢＡ为对照,通过移块法从中筛出１５株脱落酸产生菌,并进一步从中复筛出１０个较优的脱落酸产生菌,用丙酮－乙酸乙酯抽提,证实其中８株能产生脱落酸。通过对菌落培养特征和形态特征的观察,初步鉴定它们分属于萄葡孢属、曲霉属和青霉属。     

镰刀菌毒素的研究 Ⅰ.T-2毒素产生菌株的筛选

<正> 镰刀菌属(Fusarium)是危害性最大的真菌之一,不仅侵染田间作物和库贮谷物,造成经济损失,而且产生毒素,引起人畜镰刀菌毒素中毒。黄曲霉毒素的致癌作用被证实后,更引起世界各国对镰刀菌毒素及其中毒现象的重视(孟昭赫等,1979)。镰刀菌产生的毒素主要是单端孢霉烯族化合物,其中 T-2毒素的毒性最强(Ronald,1981),它能引起兔子皮肤反应和抑制植物种子发芽等生物毒性效应(Burme-istes,1970;Ueno,1971)。国内尚未见人工培养产生 T-2毒素的报告。为给农业、食品卫生和环境保护等方面研究提供科学依据,本文报告 T-2毒素产生菌株的筛选。     

美洲大蠊肠道耐热碱性蛋白酶产生菌筛选及其酶特性

昆虫肠道菌是重要的微生物资源。为拓展微生物酶资源菌种来源,本研究以含Na₂CO₃和脱脂奶粉的培养基从美洲大蠊Periplaneta americana(L.)肠道中筛选产碱性蛋白酶的嗜碱细菌,进行形态学和16S rDNA序列鉴定,并分析温度、pH和Na₂CO₃对菌株生长的影响;采用福林-酚法和SDS-PAGE酶谱法测定温度、pH对菌株所产蛋白酶活性和稳定性的影响。结果显示,从美洲大蠊肠道分离到一株嗜碱细菌PaGA523-1,革兰氏阳性,具芽孢,经鉴定为列城芽孢杆菌Bacillus lehensis,其最适生长pH范围为9～11,最适生长温度为37℃,可在含0.03～0.09 mol/L Na₂CO₃的肉汤蛋白胨液体培养基中生长。在含Na₂CO₃的玉米粉-黄豆饼粉发酵培养基中,菌株PaGA523-1可产生蛋白酶。该蛋白酶的最适反应温度为62℃,最适反应pH范围为9～11。蛋白酶在不同pH缓冲液(7～11)和热处理(...     

冠状病毒主蛋白酶小分子有机硒化合物抑制剂筛选

[目的]基于荧光共振能量转移技术（FRET）筛选抑制冠状病毒主蛋白酶(M^pro)活性的小分子有机硒化合物。[方法]将两种冠状病毒M^pro蛋白在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中表达并纯化;基于FRET确认M^pro蛋白的体外活性并对13种小分子有机硒化合物进行筛选;进一步用MTT法测定有效化合物的细胞毒性;最后利用计算机软件AutoDock 4.2.6对有效化合物和两种冠状病毒M^pro进行分子对接分析。[结果]成功表达纯化出具有酶活性的两种M^pro蛋白;筛选发现11种化合物对两种M^pro均具有抑制效果,其中SLL-1A-46的抑制效果最显著,其对两种M^pro的酶活半抑制浓度(IC₅₀)分别为：23.95μmol/L（MERS-CoV）、24.97μmol/L（SARS-CoV）;细胞毒性检测结果显示SLL-1A-46对三种细胞的半数毒性浓度(CC₅₀)分别为75.41μmol/L（Vero E6）、39.96μmol/L（A549）和65.06μmol/L（293T）;分子对接结果提示SLL-1A-46与两种M^pro活性位点处的结合能分别为-8.26 kcal/mol（MERS-CoV）和-8.37 kcal/mol（SARS-CoV）。[结论]初步筛选到11种抑制两种冠状病毒M^pro酶活性的小分子有机硒化合物,SLL-1A-46具有作为广谱冠状病毒M^pro抑制剂的潜力,其与两种M^pro的结合特点为广谱冠状病毒M^pro抑制剂的药物设计提供线索。     

SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂的筛选及抑制动力学研究

对SARS冠状病毒主蛋白酶(SARS-CoV M^pro)进行异源重组表达与提纯,并以其为靶点,利用基于荧光共振能量转移(FRET)技术的体外药物筛选模型,对蛋白酶抑制剂聚焦库96种化合物进行了体外抑制活性的评价,并从动力学的角度探讨筛选出的阳性化合物对SARS-CoV M^pro的抑制能力与机制。结果表明:通过筛选获得抑制率>80%、淬灭率<20%的化合物5种,为P-1-08、P-1-19、P-2-24、P-2-28、P-2-54,其半数有效抑制浓度(IC₅₀)分别为:0.69±0.05μmol/L、1.19±0.41μmol/L、0.14±0.01μmol/L、1.36±0.07μmol/L、0.36±0.03μmol/L。其中化合物P-1-08、P-1-19、P-2-24、P-2-54对SARS冠状病毒主蛋白酶的抑制作用为不可逆抑制,化合物P-2-28的抑制作用为可逆抑制。根据Lineweaver-Burk图和Dixon图的研究,发现化合物P-2-28对SARS冠状病毒主蛋白酶呈竞争性抑制,抑制常数Ki为0.81μmol/L。通过对底物浓度,IC₅₀值及Ki值关系的研究,进一步验证了P-2-28的抑制作用为竞争性抑制。该抑制剂的发现为SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂的研究打下基础,为抗SARS病毒药物开发提供了先导化合物。     

新型冠状病毒主蛋白酶抑制剂的筛选方法研究进展

新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)席卷全球,具有较高的传染性和死亡率,但目前尚缺乏安全有效的COVID-19疫苗与治疗药物.新型冠状病毒主蛋白酶(main protease,Mpro)的进化高度保守,在调控新冠病毒RNA复制中具有重要的生物学功能,已成为新型广谱抗冠状...     

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究 Ⅰ.碱性蛋白酶高产菌的筛选及产酶条件初探

从成都佳丰食品厂等处采集的样品中平板分离初筛到124株碱性蛋白酶产生菌,进一步复筛出一株高产,且稳定的碱性蛋白酶产生菌株B．L．JF-ld,初步鉴定为地衣穿孢杆菌（Bacilluslicheniformis）。该菌的最适产酶条件为：培养基（％）为麦芽糖7．5,酵母膏3,NaCl0．5,K2HPO4·3H2O0．53,NaHPO4·2H2O0．03,Na2CO30．056,MnSO4l×10－4mol／L,pH8．7,通气量为（1：0．5）～（1：1）（v／v）,37℃发酵40h,酶活力单位高达7180U／ml。