苏芸金杆菌的一个新变种——云南变种

113菌株是从罹病致死的斜纹夜娥(prodenia litura Fabrieius)幼虫体上分离出来的产晶体芽孢杆菌,其形态、生理、生化及血清学反应与现在已知的苏芸金杆菌的各个对比菌株有别,是一个新变种,定名为苏芸金杆菌云南变种(Bacillus thuringiensis Var·yunnanensis)。     

我国部分地区土壤中的苏芸金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌

从云南、贵州、四川和陕西4省的土壤中分离到大量苏芸金芽孢杆菌(Bacillus thuringie—nsis)和球形芽孢杆菌(Bacillus sphaeticus)菌株。血清型分析表明,苏芸金芽孢杆菌分离株分属于23个血清型中的13个血清型,另有近20％的自凝型菌株及部分与所有标准菌抗血清无反应的菌株。对该两种昆虫病原细菌的生态分布规律进行了分析。研究了全部苏芸金芽孢杆菌分离株对鳞翅目、鞘翅目及双翅目的6种昆虫的毒力特性、伴孢晶体与芽孢的形态,以及晶体蛋白质成分。观察和测定了球形芽孢杆菌分离株的形态和毒力,并分析了部分菌株的晶体蛋白质成分。得到22株高效苏芸金芽孢杆菌和2株高效球形芽孢杆菌。证明苏芸金芽孢杆菌是典型的土壤微生物类群,我国西南地区土壤中的苏芸金芽孢杆菌资源十分丰富。     

苏芸金杆菌的一个新血清型

从土壤中分离出一株产生伴孢晶体的芽孢杆菌。该菌株具有苏芸金杆菌的典型特征,严生不规则型晶体,鞭毛抗原及生化反应与已知的苏芸金杆菌21个血清型不㈤,不产生β-外毒素。对棉铃虫、粘虫、大蜡螟及尖音库蚊幼虫均无毒性,是一个新血清型(H22),定名为苏芸金杆菌山东变种(Bacillus thuringiensis serovar shandongiensis, H22)。     

苏芸金杆菌天门变种——“7216”菌的研究

1972年从棉花红铃虫(Pectinophora gossypiella Saunders)中分离出一株能形成伴孢晶体的芽孢杆菌“7216”。该菌具有苏芸金杆菌(Bacillus tkuriniientis)的典型特征[1]。血清型属Hsasb,但培养特征、生化特性有别于H,中的阿莱变种和戈尔斯德变种,认为是苏芸金杆离的一个新变种,定名为苏芸金杆菌天门变种Bacillua thuriniensit var．Tianmentig(7216)。     

苏芸金杆菌的酯酶分析

用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了Bacillus thuringtcnsis 20个变种21个菌株的酯酶图型。试验证明,酯酶的电泳图型与H抗原密切相关,除了个别血清型外,苏芸金杆菌的每一个血清型都表现出一个不同的酯酶图型。本试验采用的方法优于淀粉凝肢电泳方法,因而分离的酯酶区带比国外报道的要多,其图型也有变化。文中还首次报道了 B. t. var. Kurstaki、B. t. var.Ostriniae、B．T．Var．Dsrmstadiensis、B. t. var toumanoffi B. t. var thompsoni、B. t. var．Pakistani、B. t. var. israelensis和B．T．Var．Yunnanensis的酯酶图型,并将20个变种定为17个酯酶型。文中讨论了酯酶型与生化特征及血清型之间的关系。改进了的这一方法可用于苏芸金杆菌的快速鉴定中,本试验得到的各种酯酶图型可为苏芸金杆菌的酯酶分析提供参考。     

苏芸金芽孢杆菌的一个新亚种

由北京近郊温泉地区油松林间土壤中,分离到一株产生伴孢内含物的芽孢杆菌TW 20。该菌株具有苏芸金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的典型特征,但无鞭毛抗原(H),伴孢内含物与孢子常常不分开,位于孢子囊一端由数个不同形状的晶体组成．其生化反应特性及酯酶型与已知23个血清型30个亚种的标准菌株均不相同。对油松毛虫(Dendrolimus tabulaef-ormis)、午毒蛾(Lymautria dispar)、黄褐天幕毛虫(Malacosoma neustria testcea)、光肩星天牛(Anoplophora glabripennis)幼虫没有明显的致病性。根据上述特性,菌株TW20属于一个新的酯酶型亚种,定名为苏芸金芽孢杆菌温泉亚种——Bacillus thuringiensis subsp. Wequanen-sis。     

苏芸金杆菌以色列变种在不同培养基上的产毒能力

苏芸金杆菌以色列变种(Bacillus thuringiensis subsp.israelensis)对蚊幼虫的杀虫活性,主要在于蛋白质晶体,而营养条件对晶体的合成有着重要影响。据研究,苏芸金杆菌不同血清型对培养基的要求各有差异。关于适合苏芸金杆菌以色列变种产生毒力的培养基,特别是     

昆虫病原菌苏云金芽孢杆菌群(Bacillus thuringiensis Group)的分类

采用形态、生化、血清学的方法对国外引种的15株巳知菌和本国51株未知菌进行了变种的分型研究。结果表明：苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)作为有益的细菌资源在藏国分布较广。51株菌中属于血清型H1苏云金芽孢杆菌苏云金变种(Baeillus thuringiensisvar. Thuringiensis)有11株,血清型H50-5b苏云金芽孢杆菌蜡螟变种(B．Thur．Var．Galleriae)31株,血清型H4-4b苏云金芽孢杆菌松蜩变种(B.thur. Var. dengrolimut)3株,血清型H4-4a。苏云金芽孢杆菌肯尼亚变种(B. thur. Var kenyae) 5株,同时发现血清型H．苏云金芽孢杆菌玉米螟变种(B. thur var. ostrinia,)一株。玉米螟变种不同于该菌群的巳知菌株,认为是一个新变种。实践证明,利用血清学抗原抗体具有高度特异{生的凝集反应来鉴别苏云垒芽孢杆菌变种,简便,快速,准确。而该群噬菌体却不能作为区分变种的标准。     

土壤来源的五个苏云金芽孢杆菌新亚种的鉴定

从中国土壤中分离的大量苏云金芽孢杆菌菌株中鉴定出H42、H43、H56、H60及H62等5种新H血清型,并进行了形态、培养特征、生化反应、晶体蛋白质成分及毒力特性等项检测鉴定,鉴定了5个苏云金芽孢杆菌新亚种： Bacillus thuringiensis subsp. jinghongiensis (H42), B.thuringiensis subsp. guiyangiensis (H43),B.thuringiensis subsp. rongseni(H56),B.thuringiensis subsp. pingluonsis(H60)及B.thuringiensis subsp. zhaodongensis(H62) 。毒力生物测定证明5个新亚种的代表菌株对棉铃虫(Heliothis armigera)\,小菜蛾(Plutella xylostella)\,柳蓝叶甲(Plagiodera versicolora)幼虫均无毒力。H42、H43、H56、H60对埃及伊蚊(Aedes aegypti)\,斑须按蚊(Anopheles stephensi)及尖音库蚊(Culex pipiens)亦均无毒;H62对埃及伊蚊无毒,但对尖音库蚊与斑须按蚊有低毒。     

苏芸金杆菌的质粒检测及载晶体蛋白合成基因的质粒在不同菌株间的传递

分析了苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)7个变种19个野生菌株及无晶体(sp+cr-)和无芽孢(sp-cr+)突变株的质粒图型,证实了苏芸金杆菌的质粒组成既有变种的特异性,亦有菌株的特异性。载有晶体蛋白质合成基因的质粒,B. thuringiensis var．Kurstaki HD-191 菌株可能为42和50Mdal,B．Thuringiensis var. aizawai HD-282菌株为47Mdal, B．Thuringiensis var．Israelensis IPS-82菌株为57Mdal的质粒,而B．Thuringiensis var. wuhanensis 140 菌株的此种基因则可能不在质粒上而在染色体中。HD-191载晶体蛋白合成基因的质粒以很高频率被传递给其无晶体突变株HD-1并在后者细胞中表达。B. thuringiensis var. israelensisIPS-82菌株和 B．Thuringiensis var. kurstaki 无晶体突变株HD—1之间载晶体蛋白合成基因质粒的传递未能成功,提示可能存在着不相容性的障碍。     

几种细菌杀虫剂的菌种鉴定

以鉴定为目的,对国内广泛使用的几种昆虫病原性产伴孢晶体芽孢杆菌：青虫菌,杀螟杆菌及140杀虫菌,荆菌II号进行了形态、培养特性、生化反应、外毒素产生、抗原分析及酯酶分析等研究。上述各菌的生化反应、鞭毛抗原分析(140菌无鞭毛抗原)、菌体抗原分析、酯酶电泳图型等特性,均与苏云金杆菌蜡螟变种(Bacillus thuringensis var. galleriae)相同。以微生物学方法测定上述各菌均能产生β-外毒素。故青虫菌、杀螟杆菌、荆菌II号均鉴定为Bacillus thttringensis var．Galleriae血清型H5酯酶型5 galleriae;140菌鉴定为Bacillus thuringensis var．Gulleriae(无鞭毛菌株)酯酶型5 galleriae。对生化反应、抗原分析及酯酶分析的特点进行了比较和讨论,认为抗原分析具有特异性高及快速的优点。并认为菌体抗原同样具有变种特异性,也能用于该菌群的鉴定工作。     

对蚊的高毒效菌株187的研究

对湖北省医学科学院疟疾室筛选的对蚊具有高毒效的菌株187的生物学特性和毒性进行了研究。此菌株的血清型、酯酶型和主要生化反应与参考菌株苏芸金杆菌以色列变种(Bacrillusthuringiensis var. israelensis)1897菌株相同,但在菌体大小、鞭毛、繖毛、运动性、菌落特征、晶体形态和生化特性等方面又有差异。因此认为此菌株属于苏芸金杆菌H。型的一个新品系。其菌披对白纹伊蚊,致乏库蚊和中华按蚊的毒力分别是1897菌株的3．32、2．82和2.48倍,晶体的毒力则分别为1897菌株的4．0·、7．03和1．28倍。     

几种苏芸金杆菌晶体的超微结构

观察了苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)7个菌株晶体的超薄切片,不同来源的晶体内部超微结构有明显差异。 6种晶体具有晶格构造,但1897菌株的晶体内部具有非均一构造。无鞭毛菌株H0的晶体具有极易碎裂的特点。HD-1的晶体的镶嵌型构造进一步被证实。血清8型006菌株的晶体不具有任何蛋白质晶格结构。讨论了苏芸金杆菌晶体的超微结构与其对昆虫毒力的关系。     

几种苏芸金杆菌晶体的毒力及形态结构

研究了苏芸金杆菌(Bacillus thurin&itntis)6个变种的7个菌株的提纯晶体对家蚕(Bombyx mori)和棉铃虫(Heliothis armigera)的毒力及其在电镜下的形态与结构。证明7种晶体对两种昆虫的毒力大小有不同的顺序。方形晶体和具镶嵌形的菱形晶体对两种昆虫皆有较高毒力,细小菱形晶体的毒力皆很低,不规则的颗粒状晶体和六角彤晶体不显示毒性或仅具很低毒件。不同晶体的表面结构亦有差异。并证明方形晶体和两种具镶嵌型构造的菱形晶体易受超声波破坏,小菱形及其它两种非菱形晶体对超声波有较大抗性。认为苏芸金杆菌晶体的形态结构及其对超声波的抗性与它们对鳞翅目昆虫的毒力之间有一定关系。     

中国Btken-Ag的特性及其杀虫毒肽的研究

苏芸金芽孢杆菌肯尼亚亚种Ag株(Bacillus thuringiensis serovar.kenyae strainAg,以下简称为Btken-Ag)是血清型H4a-4c中对棉铃虫、粘虫等多种夜蛾科害虫具有高毒力的优良品系,经生理生化、H抗原、酯酶谱、抗生谱和质粒谱等性状比较分析,与标准株肯尼亚亚种023大体相同,但其质粒谱及伴孢晶体多肽组分与023明显有别.该菌株伴孢晶体多形,其主要杀虫成分为61000多肽,经ELISA同源分析,此毒肽与同血清型中的023、7501晶体蛋白高度同源,与商品生产株H3a-3b—HD-1株部分同源,与对蚊虫高效的H14-1897及球形芽孢杆菌Ts-1无同源性.此外,对H4中10株相关株、H7-5、HD-1及1897共13株进行了对棉铃虫、粘虫及蚊虫的杀虫毒力比较测定,其中Btken-Ag的优选株H4-1及b1-4对棉铃虫的毒力高于023株及HD-1株.     

苏芸金杆菌晶体与芽孢分离的研究

用泛影葡胺(Urografin)等密度离心洼与液体双相法共分离了苏芸金杆菌九个菌株(分属六个变种)的晶体与芽饱。两种方法分离的晶体纯度最高均可达99％以上。后一方法有时在有的晶体制剂中尚混杂一些营养体或孢子囊的膜。将两种方法进行了比较。     

通过原生质体融合产生的苏云金杆菌的新菌株

用苏云金杆菌以色列变种Bacillus thuuringiensis subsp.israelensis和苏云金杆菌库斯塔基变种Bacillus thuringuensis subsp.kurstaki HD-1进行了PEG诱导的原生质体融合实验,探讨了影响原生质体形的几个条件。用抗性标记对融合子进行了选择,在198株融合子中,有17株稳定传代10次以上。它们具有两个亲本菌株所具有的一些特性。在融合子中,BTI比HD-1稳定。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法研究比较了稳定融合子的晶体毒素成分,观察到了代表HD—l毒素蛋白和BTI毒素蛋白的带。杀虫试验结果表明,融合形成的杂种菌株具有毒杀文字孑孓和鳞翅目幼虫的能力。     

杀鞘翅目苏云金芽孢杆菌新菌株及其杀虫剂的研究

从中国土壤中分离出2株杀鞘翅目昆虫的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis) YM03及SHQ11-10。YM03的血清型为H8a8b,SHQ1110的H血清型未知。二菌株皆产近菱形的薄扁伴孢晶体,分别含68～70kD和65kD的晶体蛋白质。毒力生物测定证明对柳蓝叶甲(Plagiodera versicolora)及马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)有高毒效。发酵性能良好。YM03粉剂田间防治马铃薯甲虫有高效。稀释400倍喷雾,防治效果达94.6%。     

苏芸金杆菌以色列变种灭蚊的有效成份

苏芸金杆菌以色列变种(Bacillus thuringiensis var. israelensis)对双翅目的蚊幼虫具有较高的毒杀力,而对鳞翅目昆虫无效。为探讨其毒杀机理及其与其它苏芸金杆菌的差异,我们做了如下一些试验。一、菌液上清液与沉淀物的毒效比较苏芸金杆菌以色列变种1897菌株(引自中国科学院动物研究所),以含糖肉汤培养基摇瓶培养,将培养24及48小时的菌液,离心(3000转/分)20分钟。分出上清液及沉淀物。上清液用     

苏芸金杆菌一些菌株保藏方法的研究

众所周知,苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)作为细菌杀虫剂,成功地应用于生物防治的重要条件之一就是菌株的稳定性。而在菌种保藏中如何保持这种稳定性,则是具有实际意义的研究课题。本文的目的在于通过对苏芸金杆菌12个变种的14个菌株保藏方法的比较鉴定,试图选择出简便易行的最佳保藏方