法罗培南钠片制备工艺的研究

目的:探讨法罗培南钠片的最佳制备工艺条件。方法:采用正交设计,筛选出较优的制备参数,考察其溶出曲线相似因子(f2),并统计分析。结果:法罗培南钠片溶出曲线与参比制剂相似(f250)。结论:该制备条件参数下工艺可行,适合批量大生产。     

HPLC法测定酮洛芬在大鼠血浆中的浓度

目的:建立大鼠血浆中酮洛芬的HPLC测定方法,进行酮洛芬微乳凝胶的药物动力学研究.方法:血浆样品采用甲醇沉淀蛋白方法处理,萘普生钠为内标;色谱柱为DiamosilC18(200mm× 4.6mmi.d,5μm),流动相为甲醇-0.01 mol·L-1磷酸二氢钾(70:30,磷酸调pH3.0),流速1 mL·min-1,检测波长为255 nm.进样量为20μL,柱温为室温.结果酮洛芬与内标萘普生钠完全分离且血浆中内源性物质对酮洛芬的含量测定无影响;酮洛芬在0.2～50 μg·mL-1范围内线性关系良好,r=0.999 8;最低定量限为0.05μg·mL-1;日内和日间精密度均(RSD)小于2.4%;回收率为91.3%～107.2%.结论:所用方法灵敏、准确、重复性好、回收率高,可用于酮洛芬微乳凝胶的血药浓度检测.     

高效液相色谱法测定大鼠血清染料木素浓度

目的:建立大鼠血清中染料木素浓度的HPLC测定方法.方法:大鼠血清以叔丁基甲醚萃取,萃取物用氮气吹干后,用甲醇溶解用于色谱分析.色谱条件:采用Thermo C18柱(250ram×4.6mm,5μm);以乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾(35:65,pH=4.3)为流动相;流速为1.0mL/min;检测波长为260hm;柱温为40℃;进样量为10μL.结果:染料木素最低检测浓度为0.01mg/L;标准曲线线性范围为0.01～10.00μg/mL(r=0.9998);相对回收率为(101.31±3.47)%;日内RSD与日间RSD均小于10.00%.结论:该方法简便、快速、灵敏度高,重现性及稳定性较好,适用于大鼠血清染料木素浓度测定和药代动力学的研究.     

反相高效液相色谱法测定食用菌中7种有机酸的研究

利用反相高效液相色谱法同时分析食用菌中7种有机酸,优化后的色谱条件为:Green ODS-AQ柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为10mmol/L的磷酸二氢钾(pH2.8),流速为1.0mL/min,柱温30℃,检测波长为210nm,进样量10μL。该方法精密度、重复性、稳定性实验中7种有机酸的RSD值均小于5%,加样回收率在94.6%–99.3%之间;该方法简便,可应用于食用菌中7种有机酸的检测。运用建立的方法测定了8种食用菌中7种有机酸成分,结果发现不同食用菌中有机酸的种类和含量均差异显著。     

HPLC检测肠灌流模型中PMP衍生化葡寡糖含量的方法学建立

目的:建立肠灌流模型中1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化葡寡糖含量的检测方法,并进行方法学考察.方法:采用HPLC法测定,色谱条件为,色谱柱:phenomenex C18(250×4.60mm,51μm);流动相:100mMNaAc/乙腈(梯度洗脱);流速:1.0mL·min,-1;紫外检测波长245nm;进样量:20μL;柱温:40℃.结果:PMP衍生化葡寡糖在此色谱条件下获得良好分离,肠灌流液、血浆样品及酚红对10种化合物的检测均无影响.结论:该方法准确可靠,重复性良好,为寡糖的吸收研究提供了技术支持.     

高效液相色谱法测定硫酸特布他林片剂含量

目的:本文对高效液相色谱法测定硫酸特布他林片剂含量进行测定。方法:选取LabAlliance C8保护柱、AgilentEclipse XDB-C8柱,流动相为甲醇-水[10B90(包含28 mmol*L-1的磷酸二氢钾,再利用0.2%的磷酸进行调和,令pH值为4.6)],检测出的波长为280nm,进量样为20μL,柱温为室温即可[1]。结果:方法的线性范围是0.5-200μg·mL-1(其r值为019982),最低检测限是2.0 ng。回收率的范围为98.6%-102.7%,RSD的范围在0.38%-2.4%(n=5)。结论:方法非常方便,结果比较精确,可以用再硫酸特布他林片剂的质量控制中。     

利用SEC-HPLC法测定重组人透明质酸酶的纯度

目的:建立检测重组人透明质酸酶(rHuPH20)纯度的高效分子排阻色谱法(SEC-HPLC)。方法:利用SEC-HPLC法建立检测rHuPH20纯度的方法,并对方法的专属性、线性、精密度(重复性和中间精密度)、检测限、定量限和耐用性等指标进行评估。结果:空白溶剂在设定的积分范围内无特异峰出现;样品浓度为30~480μg/m L时,数据呈线性关系,决定系数r~2=0.9994;重复性实验峰面积相对标准偏差(RSD)为1.9%;中间精密度实验峰面积RSD为1.1%;检测限为样品浓度10μg/m L时进样体积20μL,即进样量0.2μg;定量限为样品浓度30μg/m L时进样体积20μL,即进样量0.6μg;耐用性实验中,峰保留时间RSD为0.4%,峰面积RSD为1.0%。结论:建立的SEC-HPLC法各项指标符合要求,可用于rHuPH20的纯度检测。     

反相高效液相色谱法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖甙和丁香脂素二糖甙

采用高效液相色谱法建立同时测定杜仲中松脂醇二葡萄糖甙(PDG)和丁香脂素二糖甙(SDG)的方法。色谱条件为:色谱柱为VP-ODSC18柱(150mm×4.6mm,预柱10mm×4.6mm);流动相为甲醇∶水(v/v)=30∶70;流速1mL/min;柱温25℃;进样量10μL;检测波长227nm。松脂醇二葡萄糖甙在和丁香脂素二糖甙进样量分别在30.8~154.0μg/mL之间,SDG的进样量在26.4~88.0μg/mL之间时,线性关系良好;平均回收率分别为99.8%,98.6%。结果表明该方法快速、准确、简单,可用于杜仲中松脂醇二葡萄糖甙和丁香脂素二糖甙的定量测定。     

鲟鱼外周血淋巴细胞的分离及最佳体外增殖性反应条件

以小体鲟(Acipenser ruthenus)为研究对象,应用不同浓度的淋巴细胞分离液对鲟鱼外周血淋巴细胞进行分离并探讨其增殖性反应的最佳条件。分别以植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(Con A)和脂多糖(LPS)作为淋巴细胞增殖丝裂原,采用L25(56)五因素五水平正交试验设计,用Enhanced Cell Counting Kit-8法(增强型CCK-8或WST-8)对培养时间、培养温度、细胞密度、胎牛血清浓度及丝裂原浓度等因素进行探索性研究。结果表明:70%的Percoll液(比重为1.092 g/m L)作为淋巴细胞分离液的分离效果最佳。鲟鱼最佳外周血淋巴细胞体外增殖反应条件为:3.625×10~6初始细胞量、20μg/m L的PHA或50μg/m L的Con A或10μg/m L的LPS作为丝裂原、10%-20%胎牛血清(FBS)、20-25℃培养2 d。     

高效液相色谱法联用蒸发光散射测定薏苡仁多糖的单糖组成

建立高效液相色谱法(HPLC)联用蒸发光散射(ELSD),对薏苡仁多糖的单糖组成进行测定。HPLC色谱条件:Supelco~?APHERA NH_2 Polymer色谱柱(150 mm×2 mm,5μm);流动相:乙腈-0.05 mol/L醋酸铵溶液(体积比为85∶15);流速:0.2 mL/min;进样量:10μL;柱温:35℃;ELSD检测条件:漂移管温度为60℃,载气流量为1.6 L/min。研究结果表明:甘露糖(mannose)、半乳糖(galactose)、葡萄糖醛酸(glucuroaicacid)、鼠李糖(rhamnose)、半乳糖醛酸(galacturonic acid)、葡萄糖(glucose)、阿拉伯糖(arabirose)和岩藻糖(flucose)的进样量对数与峰面积对数在一定范围内均呈现出较好的线性关系(0.999 1～0.999 9),回收率均在97.4%～100.4%,RSD均小于2%。研究表明该方法准确可靠,分离效果好,可用于测定薏苡仁多糖的单糖组成。     

法罗培南在大鼠肠道吸收部位的初步研究

目的:研究法罗培南在大鼠各肠段的吸收率,以确定最佳吸收部位,为制定合理的药物制剂提供科学依据.方法:采用大鼠在体肠循环法,各肠段区间如下:十二指肠段自幽门1cm处开始;空肠段离幽门15cm处开始;回肠段离盲肠上行20 cm处开始:结肠段从盲肠后段开始.各肠段取10 cm左右,将所取肠段两端开口、插管并结扎,插管与恒流泵连接.形成各自的回路.用HPLC法梯度洗脱测定法罗培南的浓度,依据药物在肠段中回流2小时后的减少量来确定各肠段法罗培南的吸收量.结果:法罗培南在大鼠各肠段吸收率平均值为十二指肠6.91±3.08%;空肠5.66±2.29%;回肠9.62±4.08%;结肠4.65±1.29%.稳定性实验、精密度实验、回收率实验的RSD分别为0.48%、0.234%和2.01%.结论:法罗培南在各肠段均有吸收,吸收率按回肠、十二指肠、空肠、结肠顺序依次降低.     

鲟鱼外周血淋巴细胞的分离及最佳体外增殖性反应条件北大核心CSCD

以小体鲟(Acipenser ruthenus)为研究对象,应用不同浓度的淋巴细胞分离液对鲟鱼外周血淋巴细胞进行分离并探讨其增殖性反应的最佳条件。分别以植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(Con A)和脂多糖(LPS)作为淋巴细胞增殖丝裂原,采用L25(56)五因素五水平正交试验设计,用Enhanced Cell Counting Kit-8法(增强型CCK-8或WST-8)对培养时间、培养温度、细胞密度、胎牛血清浓度及丝裂原浓度等因素进行探索性研究。结果表明:70%的Percoll液(比重为1.092 g/m L)作为淋巴细胞分离液的分离效果最佳。鲟鱼最佳外周血淋巴细胞体外增殖反应条件为:3.625×10~6初始细胞量、20μg/m L的PHA或50μg/m L的Con A或10μg/m L的LPS作为丝裂原、10%-20%胎牛血清(FBS)、20-25℃培养2 d。     

HPLC法测定白芥子药材中芥子碱硫氰酸盐的含量

本文采用RP-HPLC法测定了不同产地白芥子药材中芥子碱硫氰酸盐的含量,方法为色谱柱Alltima Phenyl,5μ,250×4.6mm;流动相乙腈-0.08mol/L磷酸二氢钾溶液(1585),检测波长326nm;流速1mL/min.柱温室温.实验表明,该法快速、简便,具有很好的重现性和稳定性.     

HPLC法测定牙膏中柚皮苷的含量

建立了高效液相色谱测定牙膏中柚皮苷含量的方法。采用的色谱条件:Hypersil BDS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温为40℃;以水(A相)和乙腈(B相),梯度洗脱程序为:0～15 min,10%～100%B;流速为1.0 mL/min;检测波长为283 nm;进样量为20μL。结果表明,柚皮苷的质量浓度在14.55～116.40μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均加标回收率为97.56%。该方法稳定、准确,重现性好,可作为牙膏中柚皮苷的含量测定和质量控制方法。     

高聚物型色谱柱在高效液相色谱法中一步分析制备葛根素及大豆苷元的应用

建立了使用以聚苯乙烯-二乙烯基苯(PS-DVB)为基质的高聚物型色谱柱一步分离制备葛根提取液中的葛根素和大豆苷元的方法。采用MKF-RP-HH色谱柱(300 mm×7.8 mm,8μm),葛根提取液经70%乙醇溶解稀释,以水(A)和甲醇(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 m L/min,检测波长250 nm,柱温30℃。结果表明:葛根提取液中的2种有效成分葛根素和大豆苷元均与杂质达到了较好的分离效果,且柱效大于2 100 N/m,优于常规的C-18硅胶色谱柱(柱效:1 000 N/m)。该高聚物型色谱柱不仅可用于上述分析,还可用作半制备柱制备得葛根素和大豆苷元纯品,葛根素在2~50μg/m L范围内线性关系良好,回归方程为y葛根=1.342 2x-1.018 4,线性相关系数为0.999;大豆苷元在2~20μg/m L范围内线性关系良好,回归方程为y大豆=2.275x+0.869 5,线性相关系数为0.999;葛根素和大豆苷元的纯化得率分别可达95.9%和78.5%。     

天然牛磺酸的离子色谱分析方法研究

通过考察实验的稳定性、精确度及回收率等,研究不同氨基酸对牛磺酸检测的干扰,成功建立了离子色谱法分离牛磺酸梯度洗脱程序,探索出一种更高效、更快速、更灵敏的离子色谱检测方法。色谱柱为氨基酸分析柱(Amino Pac PA-10,2 mm×250 mm)、氨基酸保护柱(Amino Pac PA-10 2 mm×50 mm);流动相组成为流动相A(纯水)、流动相B(250 mmol/L Na OH溶液),流动相C(1.0 mmol/L乙酸钠(Na OAc)),进行梯度洗脱;流速为0.24m L/min;柱温为30℃;采用积分脉冲安培检测器检测;进样量为25μL。该法优化了牛磺酸的检测时间,提高了牛磺酸的检测效率,可运用于实验和生产中。     

高效液相色谱法测定甜菊糖苷中甜菊醇的含量

建立高效液相色谱法测定甜菊糖苷中甜菊醇的含量。色谱条件:色谱柱为Phenomenex C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水(50∶50);流速1.0 mL/min;检测波长213 nm;柱温30℃;进样量10μL。线性范围为1.046μg/mL~52.3μg/mL(r=0.9997),加标平均回收率为96.60%,RSD为0.51%(n=6)。本方法准确度高、精密度高、重复性好、简捷易操作,可以作为甜菊糖苷中甜菊醇含量的测定方法。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测小菜蛾血清中的β-蜕皮激素

【目的】研究建立可以准确检测小菜蛾血清中痕量β-蜕皮激素的超效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析法。【方法】小菜蛾血清β-蜕皮激素样品用乙腈提取并进行蛋白沉淀,以C18色谱柱分离,经UPLC-MS/MS检测,以芸苔素内酯为内标物,内标法定量。【结果】结果表明,在0.5-50μg/L浓度范围内β-蜕皮激素线性相关系数R~2=0.9998;在0.5、10和50μg/L3个添加水平下的平均回收率在91.9%-104.9%之间,相对标准偏差(RSDS,n=5)在3.2%-9.2%之间;方法的定量限为0.5μg/L。【结论】该方法具有操作简单、灵敏度高,稳定性好,应用性强等优点,可为昆虫血清中的β-蜕皮激素检测提供科学准确的方法。     

葛根素抗心肌细胞过氧化氢损伤的线粒体相关机制

目的:探讨葛根素(puerarin,Pue)预处理抗过氧化氢(H2O2)应激损伤的作用是否与线粒体渗透性转换孔和/或线粒体钙激活钾通道有关。方法:采用酶解分离大鼠心肌细胞模型,台盼蓝拒染法测定心肌细胞存活率;Rhodamine123孵育测定线粒体膜电位值,分离线粒体测定mPTP孔开放程度。结果:与H2O2应激组相比,Pue(0.24mmol/L)预处理5min可明显对抗H2O2应激引起的心肌细胞存活率的降低,线粒体钙激活钾通道阻断剂paxilline(Pax,1μmol/L,预处理30min)、线粒体渗透性转换孔开放剂atractyloside(20μmol/L,预处理20min)或PKC抑制剂chelerythrine(5μmol/L,预处理30min)可拮抗Pue的作用。Pue预处理或钙激活钾通道开放剂NS1619(10μmol/L,10min)都明显减弱H2O2应激引起的线粒体膜电位的去极化,线粒体渗透性转换孔开放剂atractyloside能明显减弱Pue的作用。在分离心肌线粒体模型上,Pue(0.24mmol/L,5min)显著减弱CaCl2诱导的线粒体在A520处吸光度降低,Pax(1μmol/L,5min)可拮抗Pue的作用。结论:在大鼠分离心肌细胞模型或分离线粒体模型上,Pue预处理具有抗过氧化氢应激损伤的作用,这种保护作用可能与其抑制线粒体渗透性转换孔的开放和促进线粒体钙激活钾通道的开放有关。     

高效液相检测醋酸氢化可的松杂质的方法建立

目的:建立高效液相法测定醋酸氢化可的松中杂质的检测方法。方法:采用色谱柱:Agela Venusil MP C18 4.6×250mm,流动相:磷酸盐缓冲液(取8mmol/L磷酸二氢钾溶液,用8mmol/L磷酸氢二钾溶液调节PH值至5.0,临用新制)-甲醇(62:38);检测波长:254nm;柱温:40℃测定。结果:采用此高效液相法能将杂质与主成分有效分离,专属性良好,准去度高,8小时内溶液较稳定,耐用性强,经检测限试验证明该方法能有效检出杂质。结论:该方法简便,准确度高,专属性好,建议采用高效液相法测定醋酸氢化可的松的杂质。