原核生物mRNA稳定性的分子机制

原核生物ｍＲＮＡ稳定性的分子机制钟珍萍＊（中国科学院发育所,北京１０００８０）原核生物通过快速繁殖来适应生存,这决定了其ｍＲＮＡ稳定性通常远远次于真核基因ｍＲＮＡ,半衰期仅０．５-５０ｍｉｎ。细胞如何在这么短时间内迅速降解大量的ｍＲＮＡ分子呢？通过哪些机制来实现各ｍＲＮＡ之间的稳定性有如此精细的差异？就目前所掌握的资料来看,这是由ｍＲＮＡ自身的序列元件、细胞内核酸酶、核糖体以及结合蛋白共同完...     

真核mRNA3′非翻译区在基因表达中的作用

真核生物ｍＲＮＡ的３′非翻译区（３′ＵＴＲ）在基因表达调控中发挥重要作用．它不仅调控ｍＲＮＡ在体内的稳定性和降解速率,控制着ｍＲＮＡ的利用效率,还参与ｍＲＮＡ翻译过程的调控．     

大鼠交叉上核中SS和VIPmRNA昼夜节律的研究

用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交方法分析ＬＤ循环条件下大鼠ＳＣＮ和ＣＸ的ＳＳｍＲＮＡ和ＶＩＰｍＲＮＡ丰度的昼夜变化，结果表明这两种ｍＲＮＡ昼夜间的相对含量在ＣＸ中基本不变，而在ＳＣＮ中则呈现规律性变化的模式，与双侧眼球摘除后大鼠ＳＣＮｍＲＮＡ丰度昼夜变化的实验结果相比较，ＳＳｍＲＮＡ丰度变化不受外界光的影响，具有内源性的昼夜节律，而ＶＩＰｍＲＮＡ丰度的昼夜变化则受外界光的影响。     

mRNA差别显示技术及其在生命科学中的应用

ｍＲＮＡ表达水平的变化决定细胞的功能状态,个体发育、细胞增殖分化与凋谢、生理刺激和药物治疗等过程,都会出现ｍＲＮＡ 表达水平的变化。阐明这种变化有助于揭示细胞生理过程的分子机制。该技术无需更多的背景资料,可快速有效地分离表达水平出现差别的基础,这些基因编剧编码的功能多肽在细胞生理过程中扮演着重要角色。     

病毒与细胞中参与mRNA加帽过程的酶

病毒与细胞中参与ｍＲＮＡ加帽过程的酶张庆华陈继明（南京农业大学动物疫病诊断与免疫重点实验室,南京２１００９５）关键词ｍＲＮＡ加帽酶病毒与真核细胞的ｍＲＮＡ的５′端ｍ７ＧｐｐｐＮ帽子结构有增加ｍＲＮＡ稳定性等重要功能,并为核糖体识别所必需。这一帽子结构...     

真核mRNA3′非翻译区的功能研究进展

真核ｍＲＮＡ的３′非翻译区的功能比人们目前认为的更为复杂。近年来的研究揭示,ｍＲＮＡ３′非翻译区不但决定该ｍＲＮＡ的稳定性,而且还控制着该特定ｍＲＮＡ的翻译时间、翻译地点和翻译产物。值得注意的是真核ｍＲＮＡ３′非翻译区内的突变可能导致肿瘤的发生。文章介绍了１９９１—１９９２年间国际上关于３′非翻译区的一些新发现。     

膀胱癌中内皮素作用的研究

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交技术及放射免疫方法对人膀胱移行细胞癌组织中内皮素－１ｍＲＮＡ及内皮素活性分子的表达水平进行检测,研究了佛波酯对人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ－８７细胞中内皮素活性分子表达水平的调节作用,并探讨了内皮素抗血清及内皮素Ａ型受体竞争性拮抗剂ＢＱ１２３对ＢＩＵ－８７细胞ＤＮＡ合成的影响。结果表明,人膀胱移行细胞癌组织中内皮素－１ｍＲＮＡ及内皮素活性分子的表达水平明显高于相应的癌旁     

人白介素－3基因表达调节的研究

报导了ｈ－ＩＬ－３基因表达调节研究的结果：（１）人静止的外周血淋巴细胞几乎不表达ＩＬ－３ｍＲＮＡ,但受丝裂原ＰＨＡ的刺激后则诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达,ＴＰＡ与ＰＨＡ联合处理,使ＩＬ－３ｍＲＮＡ的蓄积进一步增加,但ＴＰＡ单独不足以诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ蓄积;（２）Ａ２３１８７／ＴＰＡ能代替ＰＨＡ／ＴＰＡ的刺激,并直接诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达;（３）ＴＲＥＯＤＮ处理则显著抑制ＰＨＡ／ＴＰＡ诱导的ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达。这些结果揭示：ｈ－ＩＬ－３基因的表达在转录及转录后水平被调节,而且是可诱导的,诱导ｈ－ＩＬ－３基因表达、需要Ｃａ２＋依赖及ＰＫＣ依赖的两个信息转导系统,Ｆｏｓ蛋白是反式激活ＩＬ－３基因表达的转录因子,ＰＫＣ依赖的转导系统,可能与ＩＬ－３ｍＲＮＡ的稳定性有关。     

SHR和WKY大鼠主动脉hsp70mRNA水平的比较研究

本工作应用热激蛋白７０ＫＤ（ｈｓｐ７０）核酸分子杂交方法,检测了：１．自发性高血压（ＳＨＲ）主动脉和离体培养的主动脉平滑肌细胞受热激后ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ水平的变化;２．不同细胞培养时间（３个月与６周）的ＳＨＲ、ＷＫＹ主动脉ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ水平。结果提示ＳＨＲ主动脉ｈｓｐ７０ ｍＲＮＡ水平高;６周的ＳＨＲ细胞较同期和３个月的ＷＫＹ细胞ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ高。推论ＳＨＲ血管平滑肌细胞对热敏感,原癌基因     

研究基因转录的RT-PCR技术

ＤＮＡ模板序列的转录调控是基因表达多级调节过程的关键 ,细胞周期中基因转录水平的改变应激细胞发育、分化及正常生理功能的多种信号转导。疾病或其它因素也应激转录水平变化 ,从而改变各种ｍＲＮＡｓ的稳定性。因此基因的ｍＲ ＮＡ水平分析 ,在基因调控研究领域是必不可少的。ｍＲＮＡ的常规分析方法是Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｓ、ＲＮＡｄｏｔ/ｓｌｏｔｂｌｏｔ、核酸酶保护法(ｎｕｃｌｅａｓｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ)和原位杂交 (ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ)。而ＰＣＲ技术的应用开创了ｍＲＮＡ分析新方法[1 -3] :ＲＮ…     

mRNA的3′非翻译区控制硒代半胱氨酸参入多肽链

ｍＲＮＡ的３′非翻译区控制硒代半胱氨酸参入多肽链刘定干（中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词ｍＲＮＡ３′非翻译区硒代半胱氨酸多肽链真核生物ｍＲＮＡ的３′非翻译区是决定各个ｍＲＮＡ专有功能特征的调控元件。３′非翻译区除能决定ｍＲＮＡ的...     

Nodal基因的第一内含子中存在着顺式调控增强子元件

小鼠ｎｏｄａｌ基因是在胚胎发育时期表达的一个基因,它在原肠期起着重要作用,并且参与左－右体轴的决定,４１３－ｄ小鼠胚胎干细胞系３５６３在ｎｏｄａｌ基因的第一内含子中含有单拷贝逆转录病毒的插入。采用定量ＲＮａｓｅ保护法比较了该细胞系及其母源ＥＳ细胞ＣＣＥ中ｎｏｄａｌ基因的表达量,ＣＣＥ细胞中ｎｏｄａｌ ｍＲＮＡ的含量是３５６３ＥＳ细胞含量的２．３倍。这一结果提示原病毒在ｎｏｄａｌ基因第一内含子中的整     

可随HeLa细胞传代而传递的反义RNA真核表达系统

为研究反义ＲＮＡ表达载体在细胞内的稳定性,构建了一个特异性针对β地中海贫血基因ＩＶＳ－２－６５４Ｃ→Ｔ（β６５４）突变ｍＲＮＡ前体异常剪接位点的反义ＲＮＡ表达载体ｐＣＭＶＡ．ｐＣＭＶＡ转染β６５４ＨｅＬａ细胞后,通过ＲＮＡ定量检测反义片段对β６５４ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用;再从转染后传代５次并冰冻保存１年的ＨｅＬａ细胞中回收反义表达载体,转染另外的β６５４ＨｅＬａ细胞,同样检测它对β６５４ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用．结果显示该载体在细胞传代前后均能阻断β６５４异常剪接,部分恢复其正常剪接途径：用回收的ｐＣＭＶＡ转染β６５４ＨｅＬａ细胞后,正常剪接的βｍＲＮＡ水平［β／（β＋β＊）］由０．０５上升到处理后１５ｄ的０．４８,而２种对照质粒处理后对这一比值影响不大．表明ｐＣＭＶＡ可在ＨｅＬａ细胞中随着细胞传代而传递下去,并保持结构与功能完整     

反义寡核苷酸的非反义作用

反义核酸作为一种调控特定基因表达的手段,是通过与特异ｍＲＮＡ分子上５′翻译区、ｍＲＮＡ启动－编码重叠区、核内ｈｎＲＮＡ剪接供点结合抑制ｍＲＮＡ的翻译、剪接、转运或通过形成ＲＮＡ－ＤＮＡ杂合双链,激活ＲＮａｓｅＨ,降解ｍＲＮＡ来达到抑制靶基因表达的目的...     

钙调素mRNA在受精前后分离的烟草胚囊中的定位

建立了一种新的ｍＲＮＡ原位杂交方法,适用于微量材料的整体观察。应用这一方法定位烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．ｃｖ．Ｗ３８）受精前后胚囊成员细胞中的钙调素ｍＲＮＡ（ＣａＭｍＲＮＡ）。结果显示成熟胚囊中的ＣａＭｍＲＮＡ主要分布于珠孔极的卵器和合点极的反足细胞;中央细胞中较少。受精前后胚囊中ＣａＭｍＲＮＡ的分布发生显著变化,特别是授粉后到受精前极核与卵器之间出现一条暂时的钙调素ｍＲＮＡ条带。受精前不久该带消失,ＣａＭｍＲＮＡ扩展为占据胚囊珠孔端的扇形区域。受精后胚囊中钙调素ｍＲＮＡ主要集中于伸长的合子和原胚的合点端。讨论了钙调素ｍＲＮＡ表达与受精的关系。     

大白鼠弓状核内生长抑素mRNA分布的原位杂交组化研究

本文用原位杂交组织化学技术对大鼠下丘脑弓状核内生长抑素ｍＲＮＡ（ＳＯＭｍＲＮＡ）的分布进行研究。发现生长抑素ｍＲＮＡ主要分布于弓状核的神经元胞体及近端树突内。含ＳＯＭｍＲＮＡ的神经元可分为浓染大细胞及淡染小细胞两种类型。结果表明弓状核内某些神经元可以合成生长抑素。     

大鼠自发性高血压与HSP70基因关系的研究

本实验采用热休克蛋白７０核酸分子杂交方法,检测了自发性高血压大鼠和正常血压大鼠离体培养的主动脉平滑肌细胞受热刺激后ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ水平的变化以及整体动物肝组织ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的水平,并对肝组织基因组ＤＮＡ进行了限制性酶切片段长度多态性分析。结果表明：３７℃培养的ＳＨＲ ＡＳＭＣ及整体ＳＨＲ肝组织ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ的基础表达水平均低于ＷＫＹ鼠,ＳＨＲ ＡＳＭＣ受热刺激（４２℃ １５ｍｉｎ）后２     

流行性出血热尸检组织中热休克蛋白70mRNA的定位及分布

应用核酸原位分子杂交技术研究了国内不同地区３０例流行性出血热患者尸检组织中病毒ＲＮＡ及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ细胞内定位,同时观察了汉坦病毒感染的ＶｅｒｏＥ６细胞中ＨＳＰ７０的表达情况。结果表明,热休克蛋白７０ｍＲＮＡ在多数组织中均可检测到,分布与病毒ＲＮＡ一致,并且与组织的病理损害有关;体外实验的结果也表明在出血热病毒感染的细胞中有ＨＳＰ７０的高表达。提示热休克蛋白与汉坦病毒的致病以及流行性出血热的发病机理有关。     

磷酸化酶mRNA在水稻雌蕊中表达的时空动态

利用ＲＮＡ原位杂交技术,对水稻受精前后雌蕊组织切片进行磷酸化酶基因表达的定位。结果显示,磷酸化酶ｍＲＮＡ在柱头、花柱、子房壁以及维管束中大量表达,而胚珠中除合点部位外表达很弱。受精前后的胚囊中各细胞磷酸化酶ｍＲＮＡ表达也很弱,并且没有明显的时空变化。在积累淀粉的胚乳细胞中磷酸化酶ｍＲＮＡ大量分布。原胚中的磷酸化酶ｍＲＮＡ表达较弱,到分化胚积累过渡性淀粉时才显著增加。本文首次对磷酸化酶ｍＲＮＡ在植物雌性器官发育过程中的时空分布动态作了初步研究。     

人白介素6受体基因在痘苗病毒载体系统中的表达

人ＩＬ－６受体是一个在各种细胞上表达的跨膜糖蛋白分子,是ＩＬ－６发挥细胞效应所必需的。本文通过将ＩＬ－６４ ｃＤＮＡ重组到痘苗病毒的ＴＫ基因中构建成重组痘苗病毒ＶＩＬ６４。细胞原位杂交和ＡＰＡＡＰ染色结果表明,感染ＶＩＬ６Ｒ后的Ｖｅｒｏ细胞中,ＩＬ－６Ｒ在ｍＲＮＡ和蛋白水平上于现较强后