拟南芥AtDAD1 超量表达植株对H2O2抗性的研究

构建拟南芥AtDAD1超量表达载体,以农杆菌介导的方法转化拟南芥哥伦比亚生态型,比较AtDAD1超量表达植株和野生型植株表现型的差异,以及两者对H2O2抗性的不同。实验显示,AtDAD1转基因拟南芥生长较野生型拟南芥更为强壮,对高浓度H2O2有较强的耐受力。测定两者糖含量,发现AtDAD1转基因拟南芥叶片糖的含量明显高于野生型拟南芥叶片。以上结果表明,AtDAD1基因可能参与植物生长发育,并可能在拟南芥抵抗凋亡的过程中发挥重要的作用。     

采用GUS标记技术研究钙调素在转基因烟草中的分布

为了监测钙调素 (Ca M)在植物细胞内的分布并探索其生物学功能 ,将水稻 Ca M和 GU S融合基因 (cam.gus)分别置于 35 S启动子和花粉特异启动子 L AT5 2 - 7控制下 ,构建出载体 p MD/ Ca M.GU S和 p BI/ L AT.Ca M.GU S,转化烟草 (N icotiana tobacum cv.SR ) ,GU S染色结果显示 ,Ca M.GU S融合蛋白广泛分布于植物根、茎、叶等组织 ,根尖生长点细胞、根毛细胞、表皮毛细胞、气孔保卫细胞、维管束细胞的细胞质中融合蛋白含量较多。花粉粒中也分布着 Ca M,并在萌发沟处表现出较高的浓度。保卫细胞和表皮毛细胞中 Ca M分布在相邻细胞连接处细胞模内侧 ,呈现出极性分布。研究结果表明 ,细胞内 Ca M的不均匀分布可能与细胞功能相关。     

Atdad1的超量表达抑制烟草细胞凋亡

以Atdad1基因保守区为探针进行Northern杂交,检测到烟草也存在dad1的同源基因,并且在叶和花中表达量较大,而随着叶片的衰老,dad1的表达量明显降低。进一步以过量表达Atdad1基因的烟草悬浮细胞为材料,研究Atdad1基因与细胞凋亡的关系。结果发现48℃热激4h或75ng／mL放线菌素D处理48h均可诱导正常细胞产生凋亡(产生DNA ladder),而相同处理条件下过量表达Atdad1基因的烟草悬浮细胞并没有发生凋亡(无DNA ladder),说明转基因细胞具有一定抵抗凋亡的能力。同时检测到野生型非转基因悬浮细胞凋亡的诱导产生过程中,dad1基因表达量逐步降低。上述结果提供了较直接的证据表明在烟草细胞中dad1基因可能参与了细胞凋亡的负调控。     

PSAG12-ipt嵌合基因转化樱桃番茄的研究

利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefacienst)介导法将嵌合基因P SAG12-ipt导人樱桃番茄,经双重PCR检测和基因组总DNA Southern杂交测验,共获得17株转基因植株。田间生长实验观察结果显示,这17株转基因植株生长发育及形态正常,但其中的14株长势明显好于对照。对14株中的2株进行叶片叶绿素、细胞分裂素检测结果表明,转基因植株基本定型叶下部,不同叶位叶片叶绿素、细胞分裂素含量明显高于对照,基本定型叶上部叶片与对照基本一致,同一叶位叶片比对照延缓衰老15～20d。     

磷酸化酶mRNA在水稻雌蕊中表达的时空动态

利用RNA原位杂交技术, 对水稻受精前后雌蕊组织切片进行磷酸化酶基因表达的定位。结果显示, 磷酸化酶mRNA在柱头、花柱、子房壁以及维管束中大量表达, 而胚珠中除合点部位外表达很弱。受精前后的胚囊中各细胞磷酸化酶mRNA表达也很弱, 并且没有明显的时空变化。在积累淀粉的胚乳细胞中磷酸化酶mRNA大量分布。原胚中的磷酸化酶mRNA表达较弱, 到分化胚积累过渡性淀粉时才显著增加。本文首次对磷酸化酶mRNA在植物雌性器官发育过程中的时空分布动态作了初步研究。 Abstract:Phosphorylase gene expression was localized in tissue sections of rice pistils before and after fertilization byin situRNA hybridization. Phosphorylase mRNA was substantially expressed in the stigma, style, ovary wall and vascular bundle, but weakly in ovular tissues except chalazal portion. It was weakly expressed and did not show temporal and spatial changes in embryo sacs before and after fertilization. A great quantity of phosphorylase mRNA was distributed in endosperm cells accumulating starch grains. Phosphorylase mRNA was less in proembryos, but significantly increased in differentiation embryos accumulating transition starch. This report is, for the first time, a tentative investigation on the temporal and spatial expression patterns of phosphorylase mRNA in plant female organ development.     

磷酸化酶mRNA在水稻雌蕊中表达的时空动态

利用ＲＮＡ原位杂交技术,对水稻受精前后雌蕊组织切片进行磷酸化酶基因表达的定位。结果显示,磷酸化酶ｍＲＮＡ在柱头、花柱、子房壁以及维管束中大量表达,而胚珠中除合点部位外表达很弱。受精前后的胚囊中各细胞磷酸化酶ｍＲＮＡ表达也很弱,并且没有明显的时空变化。在积累淀粉的胚乳细胞中磷酸化酶ｍＲＮＡ大量分布。原胚中的磷酸化酶ｍＲＮＡ表达较弱,到分化胚积累过渡性淀粉时才显著增加。本文首次对磷酸化酶ｍＲＮＡ在植物雌性器官发育过程中的时空分布动态作了初步研究。     

钙调素依赖型蛋白激酶在植物开花调控中的作用

钙调素依赖型蛋白激酶已被证明在诸多信号传导过程中起重要作用.研究了这一类激酶在植物开花调控中的可能作用.将分离自玉米的钙调素依赖型蛋白激酶(maize calmodulin-dependent protein kinase 1,MCK1),经过基因羧基末端(此羧基末端含有该基因的钙调素结合区)缺失突变成为MCKt,该基因的表达不再受钙调素的调控,通过农杆菌转化法获得转基因烟草植株.结果表明,MCKt的表达显著影响烟草的开花发育程序, 导致植物主枝的花原基败育以及侧枝营养生长期的延长.败育过程首先开始于正在发育的花药,然后是整个花的衰老.侧芽营养生长期的延长表征为产生成簇的伸长、窄小而扭曲的非典型叶片.这些结果显示,钙调素依赖型蛋白激酶同源物在开花调控中起着重要作用.