鸡胚背根神经节培养法测定神经生长因子活性的条件优化

鸡胚背根神经节培养法是测定神经生长因子(NGF)和神经营养因子活性的重要方法。我们通过考察培养基、鸡血浆和鸡胚浸液的比例、背根神经节部位、培养时间等条件对NGF刺激神经节生长的影响,从而建立了一套检测NGF活性的优化条件。在含20％鸡血浆和15％鸡胚浸液的DMEM的培养基中,利用伊莎褐鸡胚腰部的背根神经节,在终浓度为30ng/ml的蛇毒NGF的刺激下,培养36h可以得到理想的实验结果。该条件重复性好、分辨率高、简单实用。     

鸡胚背根神经节培养法测定神经生长因子(NGF)活性的条件优化

目的探索一套稳定可靠的鸡胚背根神经节测定NGF活性的实验条件.方法通过观察培养基、鸡血浆和鸡胚浸液的比例、背根神经节部位、培养时间等条件对NGF刺激神经节生长的影响,从而建立一套该培养法检测NGF活性的优化条件.结果以DMEM为母液,在含20%鸡血浆和15%鸡胚浸液的培养基中,利用伊莎褐鸡胚腰椎背根神经节,在终浓度为30 ng/ml的蛇毒NGF的刺激下,培养36h可以得到较好的实验结果.结论该条件简单实用、分辨率高、重复性好.     

NGF,BDNF和NT-3在培养鸡胚背根节神经元的表达

目的　探讨NGF ,BDNF ,NT - 3在体外培养鸡胚背根节神经元中的表达变化。方法　采用NGF ,BDNF ,NT - 3的兔抗血清分别对培养前后的鸡胚背根节神经元以免疫组化ABC法染色。观察NGF、BDNF和NT - 3在培养前、后鸡胚背根节神经元的表达情况 ,计数并比较培养前、后三种因子免疫阳性神经元百分数。结果　未培养的神经元 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :10 %± 3%,2 7%± 5 %,2 9%± 7%。培养 48小时后 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :77%± 6 %,6 4%± 7%,2 4%± 7%。结论　培养后NGF ,BDNF的表达较未培养者增加 (P <0 0 1) ,而NT - 3者则有减少 (P <0 0 5 )。提示在体外培养的鸡胚背根节神经元NT - 3的表达有不同于NGF和BDNF的调节方式。     

鼠神经生长因子对巨细胞病毒神经系统感染小鼠海马组织氧化应激及细胞凋亡的影响

巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)感染神经系统可引起神经功能损害,海马组织参与学习、记忆、认知等过程的调控,CMV感染海马组织并引起氧化应激及细胞凋亡激活与神经功能损害的发生密切相关。鼠神经生长因子(mouse nerve growth factor,mNGF)对缺血缺氧、六溴环十二烷等病理因素引起的脑组织氧化应激及细胞凋亡具有改善作用,但mNGF对CMV神经系统感染过程中氧化应激及细胞凋亡的调节作用及机制尚未明确。为研究mNGF对CMV神经系统感染小鼠海马组织氧化应激及细胞凋亡的影响,本研究选择C57BL/6小鼠并随机分为对照组、MCMV组、mNGF组,MCMV组、mNGF组通过腹腔注射病毒液的方式建立MCMV神经系统感染模型,mNGF组从造模后24h开始给予mNGF腹腔注射,连续14d。比较三组小鼠海马组织HE染色、MCMV DNA表达、行为学指标、氧化应激指标含量、凋亡基因及PI3K/PKB通路表达量的差异。结果显示,MCMV组出现了明显的海马组织病理改变且海马组织中MCMV DNA表达水平、bax及cleaved caspase-3表达水平、MDA含量明显高于...     

人肺癌基因组DNA对NIH／3T3细胞的转化作用

从未用过抗癌细胞毒药物的非小细胞肺癌(NSCLC)患者的手术标本(鳞状上皮癌)提取癌细胞基因组总DNA。对小鼠成纤维(NIH/3T3)细胞行转染实验。获二轮转化细胞,发现二轮转化率是一轮的2.7倍。在转染过程中转化灶出现的多少,与所用DNA的量有一定关系。 二轮转化细胞能在软琼脂上存活生长,接种裸鼠能长出肿瘤,分离肿瘤组织细胞,体外培养传代存活。表明该二轮转化细胞具有肿瘤细胞的特性。 取一轮、二轮转化细胞和裸鼠肿瘤细胞的DNA分别与放射性~(32)P标记的人体特有的Alu重复序列和ras家族基因探针进行Southern印迹转移和分子杂交。结果在三者细胞的DNA中都见有与Alu杂交的条带。这表明在转染过 程中人体特有的Alu重复序列已整合到转化细胞的基因组中。并确定了转化细胞中的转化基因之一的属性为Ha-ras癌基因。本工作提示吸烟可能是人肺鳞癌发生和Ha-ras活化的重要因素。     

外源性神经生长因子对痴呆老龄鼠学习和记忆能力影响的初步探讨

目的探讨外源性神经生长因子（NGF）对痴呆老龄鼠智能影响的机制。方法本实验选用18月龄ICR小鼠45只,应用整体实验和免疫组织化学技术,观察给药前后各组迷宫试验、胆碱乙酰转移酶活性（chAT-IR）、神经生长因子抗体（Anti-NGF）在相关脑区的表达并进行统计学分析。结果用药后学习及记忆能力有明显改善（P〈0．05）,与用药前比较ChAT-IR明显增加（P〈0．01）,NGF抗体表达明显增加（P〈0．01）。结论外源性NGF对痴呆老龄鼠的智能有改善作用;能够使相关脑区ChAT-IR增加;相关脑区Anti-NGF表达增加;外源性NGF能够保护、支持、修复神经原。     

针刺备用背根猫脊髓背核组织对鸡胚背根节神经突起生长的促进作用

改良了Ｍａｘｉｍｏｗ双盖片悬滴培养法。籍之研究了猫脊髓在部分去腰骶背根专入后以及去传入并行备用背根外周支配区穴位针刺后,背核组织促神经突起生长作用的变化。发现部分去背根传入可使背核组织的促神经突起生长作用增强,电针刺激术侧穴位能够进一步提高背核组织的促神经突起生长效应。推测是为去传入导致备用背根侧支出芽及针刺穴位促进侧支出芽的直接原因之一。     

蛇毒神经生长因子对大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达影响

目的 探讨大鼠脊髓损伤后应用蛇毒神经生长因子对Caspase-3表达的影响.方法 将55只成年SD雄性大鼠随机分为蛇毒神经生长因子组（A组）、生理盐水组（B组）、假手术组（C组）,按改良Allen打击法建立大鼠脊髓不完全损伤模型,通过动物神经运动功能BBB评分评价神经损伤程度及神经功能恢复情况;脊髓损伤后不同时间点（6 h、1 d、3 d、7 d、14 d）取材,HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测Caspase-3阳性细胞的表达,来比较分析两组的差异性.结果 HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组;BBB评分A组相对B明显提高,差异有显著性意义（P〈0.05）.A组和B组均发现凋亡细胞及Caspase-3表达,神经细胞凋亡指数及Caspase-3表达均为B组〉A组（P〈0.05）.结论蛇毒神经生长因子能抑制大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡,能改善脊髓损伤后的功能表现.     

鸡胚三类组织体外培养细胞的生物学特性分析

采用组织培养的方法获取鸡胚不同组织细胞,利用M199培养基进行原代、传代培养,经形态学观察、生长曲线绘制、分裂指数测定等进行生物学特性分析。实验表明,鸡胚不同组织细胞具有不同的生物学特性,从形态结构到生长周期都有明显差异。获得的躯体来源细胞、心来源细胞为成纤维型,肺来源细胞为上皮型;其中,躯体来源细胞生长能力最强,心来源细胞次之,肺来源细胞最慢,躯体来源细胞倍增时间最短;核型分析表明,该实验体外培养的鸡胚细胞染色体数目为78条。上述结果可为今后鸡胚不同组织细胞的深入研究提供实验材料和依据。     

睫状神经营养因子对体外培养骨骼肌细胞的促增殖效应

目的 :探讨睫状神经营养因子 (CNTF)对骨骼肌细胞的直接营养作用 ,从而为神经肌肉系统损伤和退行性病变的治疗提供新的思路。结果 :CNTF可以促进体外培养的L6 TG肌母细胞和新生SD大鼠原代骨骼肌细胞增殖。结论 :CNTF对体外骨骼肌细胞具有营养作用。CNTF的神经和肌肉双重营养性能使其可能在神经肌肉损伤和退行性病变的治疗上发挥重要作用。     

睾丸酮对离体培养人蜕膜细胞形态的影响

实验选用早孕人工流产蜕膜组织进行体外培养,观察睾丸酮对蜕膜细胞形态的影响并与RU 486加以比较。研究结果提示:(1)睾丸酮(6.9×10~(-5)mol/L)能抑制离体培养人蜕膜细胞的生长发育,但这种抑制作用是暂时和可恢复的且与用药剂量及持续时间有关。(2)睾丸酮对蜕膜细胞形态的影响与RU 486(4.7×10~(-4)mol/L)的作用效果相似。     

乙酰胆碱对蟾蜍背根神经节神经元膜电位的影响及离子机制

在离体灌流的蟾蜍背根神经节(DRG)标本上,用微电极进行胞内记录。在73个神经元中,依神经纤维的传导速度将神经元分为 A 型及 C 型,其中 A 型细胞67个,C 型6个,静息膜电位为-67.5±1.3mV((?)±SE)。当加4×10~(-4)—6×10~(-4)mol/L 乙酰胆碱(ACh),可观察到如下四种膜电位变化:1.超极化:幅值9.1±3.0mV((?)±SE,n=23);(2)去极化:幅值12.9±2.2mV((?)+SE,n=20);(3)双相反应(n=24):先超极化,后去极化,超极化幅值8.0±2.4mV((?)+SE),去极化幅值10.9±3.1mV((?)±SE);(4)无反应(n=6)。用阿托品(1.3×10~(-5)mol/L,n=23),或同时应用筒箭毒与六甲双铵(浓度均为1.4×10~(-5)mol/L,n=8)灌流,能分别阻断 ACh 引起的膜的超极化或去极化。ACh 引起超极化反应时膜电导平均增加13.8%,翻转电位值大约-96mV。四乙铵(TEA,20mmol/L)能使 ACh 的去极化幅值增加48.2±3.2%((?)±SE,n=6),超极化幅值减小79.4±4.3%((?)±SE,n=8)。MnCl_2(4mmol/L)使 ACh 的去极化及超极化幅值分别减小54.2±7.2%((?)±SE,n=5)及69.2±6.4%((?)±SE,n=14)。以上结果提示:ACh 引起的 DRG 神经细胞膜去极化反应由 N 型乙酰胆碱受体介导,而超极化反应由 Μ 型乙酰胆碱受体介导,前者可能包含了多种离子电导的改变,后者则可能与钾电导增加有关。     

神经生长因子促进坐骨神经再生修复的酶组织化学研究

目的研究对兔右坐骨神经损伤后局部给予蛇毒神经生长因子(NGF),观察坐骨神经酶活性变化和超微结构的恢复情况,探讨NGF对神经再生的影响.方法乙酰胆碱酯酶(AChE)、酸性磷酸酶(ACPase)的酶组织化学技术和电镜技术.结果神经损伤后:AChE活性明显下降,NGF组的AChE活性恢复快于盐水对照组;ACPase活性逐渐增高,NGF组的ACPase活性恢复时间短于盐水对照组.坐骨神经的超微结构在神经损伤后也发生变化,NGF组的变化程度小于盐水对照组,恢复时间短于对照组.结论NGF可通过影响酶物质的代谢而起到加快受损神经恢复的作用.为临床上应用蛇毒NGF治疗周围神经损伤提供形态学依据.     

bFGF、NGF、EGF及其受体在人胚神经管早期发育中的表达

研究bFGF、NGF、EGF及其受体在人胚神经管早期发育中的表达。方法 应用免疫组织化学方法和图像分析。结果显示bFGF和NGF的表达时序不同,bFGF阳性细胞出现较早,在所检测在各个发育阶段均呈阳性表达,而NGF出现较晚,随着胚龄增加,免疫阳性着色逐渐增强,bFGF分布较NGF广泛,而EGF在所检测的各个发育阶段均呈阴性。flg、TrkA、EGFR表达时序和分布相似,三者在所检测的各个发育阶段均阳性。结果表明NGF和bFGF均通过其特异性受体介导,在胚胎神经管形成和分化的不同阶段发挥着重作用,EGF及其受体的作用有待进一步研究。     

向日葵幼胚培养中体细胞胚胎发生的观察

1.向日葵不同品种体细胞胚胎发生的情况不同。2.较高浓度的蔗糖有利于向日葵幼胚的体细胞胚胎发生。3.在同样条件下,2mm长的幼胚较其它时期的幼胚体细胞胚胎发生的频率高。4.在蔗糖浓度为17.5％并分别加入0.5—10.0ppm玉米素的Nitsch培养基中,向日葵幼胚产生体细胞胚胎发生的频率随着玉米素浓度的增高而增加。5. 2,4-D能使体细胞胚胎发生,但不能分化器官。6.切片观察表明:在含玉米素的培养基上,幼胚产生了胚性细胞团和胚状体。并多数发生于子叶与下胚轴的深层。胚性细胞团周围细胞退化,使其与周围组织之间形成间隙。     

大豆未成熟胚培养中高浓度植物生长素的作用及其植株再生

用大豆(Glycine max(L.)Merr.)未成熟胚为外植体,在含高浓度 NAA 或2,4-D 的培养基上可诱导绿色结构体和体细胞胚状体。叶状、花状和喇叭形状的绿色结构体在含30mg/l2,4-D 的 MS-1培养基上可重新愈伤组织化。这种由高浓度2,4-D 诱发并保持的愈伤组织,转到低激素水平的培养基上后,能诱导出大量的同类形状的新结构体。绿色结构体可以进一步发育成叶丛状,但顶端不伸长。使用含2m g/l GA,和0.1mg/l IBA 的培养基,能促进顶端伸长和根的发育,获得正常植株。由未成熟胚的子叶(其时种子长度约4—6mm)诱导的愈伤组织具有再生能力。在含高浓度2,4-D(5-30mg/l)的培养基上诱导出的愈伤组织具有较高的产生绿色结构的潜力。而高浓度 NAA(10mg/l)培养基产生的愈伤组织具有较强的产生根状体的潜力。培养的外植体或愈伤组织在含5mg/l 2,4-D 的培养基上,不需要经常的继代培养,即可长期保存。