基因捻接诊断法

现在应用重组DNA的技术已可诊断出B型肝炎。马里兰州Galthesburg地方的Betbesda研究室的研究人员已经发表了一种可在病人血清中探测出少到三百个病毒颗粒的方法。遗传工程技术被用于制造大量带放射性标记的DNA,它具有与B型肝炎病毒DNA相同的     

柯萨奇病毒B3 cDNA生物素探针的制备研究

本文将柯萨奇B组3型病毒(CVB3)cDNA的重组质粒DNA(pGP51B)转化到E.coli HB101菌株中.筛选转化阳性菌株,经培养扩增后,提取重组质粒DNA,用缺口求移法制备生物素标记探针,通过原位杂交技术检测CVB1.CVB3感染的Hela细胞及正常Hela细胞对照.结果该探针只与CVB杂交,而不与细胞对照杂交,且可检测出病毒感染5h尚未出现病变细胞中的病毒核酸.表明该探针具有良好的特异性和敏感性.     

B型肝炎表面抗原基因在转化的小鼠细胞中的转录

小鼠L细胞用来研究病毒表面抗原基因(基因S)的转录,这种细胞是由带有B型肝炎病毒(HBV)DNA片段的重组质粒转化过的。在HBV基因组中绘出了一种HBV特有的、聚腺苷化的、2.3-kb的RNA的图。这种RNA与这个基因组的近75％杂交,并排斥HBV核心抗原基因(基因C)区。2.3kb的RNA类型只存在于产生B型肝炎表面抗原的     

A、B型流感病毒HA1嵌合基因疫苗的构建及免疫保护研究

为制备能提供交叉保护的疫苗,本研究在证实A型、B型流感病毒HA1 DNA能够提供抗流感病毒保护的基础上,将编码A型和B型流感病毒HA1的基因构建在同一质粒中,制备成嵌合DNA疫苗.将该重组质粒免疫小鼠,并以致死量同种流感病毒A/PR/8/34或B/Ibaraki/2/85攻击,通过测定小鼠的血清抗HA抗体和保护效果(包括存活率、肺部病毒量和体重丢失率)来评价DNA疫苗的免疫效果.结果表明:A、B型流感病毒HAl嵌合DNA疫苗能保护小鼠抵抗两种致死量流感病毒的攻击,具有提供交叉保护的能力.     

DNA疫苗预防B型流感病毒感染

用基因枪和电穿孔法将B型流感病毒DNA疫苗免疫BALB/C小鼠 ,实验证明B型流感病毒HA ,NADNA疫苗能有效抵御致死性同源B型病毒感染。同时实验表明 ,基因枪方法较电穿孔法诱导抗体水平略低。     

肝病患者肝细胞内HBV DNA原位杂交研究——形态、分布及意义

应用生物素标记HBV DNA(乙肝病毒脱氧核糖核酸)作探针,对129例肝病患者肝组织作原位杂交研究。发现HBV DNA主要存在肝细胞浆内,可分为胞浆致密型、疏松型和包涵体型。HBV DNA阳性肝细胞在肝实质中分为三种型:小叶型、局灶型与散在点状分布。HBV DNA在慢性活动型肝炎中检出率最高(81％),显著高于肝硬化,慢性小叶型肝炎、急性肝炎及原发性肝癌组。乙肝复制指标阳性患者肝细胞内HBV DNA检出率明显高于非复制组;并观察到HBV DNA阳性肝细胞与肝细胞坏死灶关系密切,多数紧紧毗邻肝细胞坏死灶/或和位于坏死灶中间,尤以局灶型分布的HBV DNA阳性肝细胞为显著。     

庚型肝炎病毒NS5 cDNA片段的表达及其免疫原性的研究

一段长度为880bp的庚型肝炎病毒cDNA在大肠杆菌BL21（DE3）菌株中得到表达。此cDNA被插入到表达质粒pGEX-5X-1中,位于编码日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶（GST）的DNA序列下游,并与GST处于同一阅读框。用乳糖在37℃下诱导表达出以体形式存在的GST－NS53融合蛋白,并用脲溶法提取了该蛋白;在20℃诱导时,表达出的蛋白大部分可溶,用谷胱甘肽Sepharose－4B亲和层析柱对可溶性的融合蛋白进行了纯化。免疫印迹实验证明,此融合蛋白能这臾型肝炎病人的血清和自制的扩GST在汪有特异性地识别。用PCgene软件对NS53氨基酸序列的亲水性和抗原决定簇进行了分析,本研究为庚型肝炎ELISA诊断试剂研制打下了基础。     

肠道病毒71型(EV71)反向遗传研究进展

反向遗传学技术实现了在DNA分子水平上对RNA病毒基因组的人工操作,在深入阐明基因组结构与功能、筛选研制新型基因工程疫苗及基因治疗等方面显示出良好的应用前景。本文对反向遗传学技术及在肠道病毒71型病毒中的应用进行了综述。1肠道病毒71型基因组结构及复制特征肠道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)是小RNA病毒科肠道属成员,其感染主要引起手足口病,还可能引起严重的神经系统疾病,如脑炎、无菌性脑膜炎和脊髓灰质炎样的麻痹等。根据EV71衣壳蛋白VP1区的核苷酸序列的不同,EV71可以分为A、B、C三个基因型,其中B型和C型又     

病毒性肝炎是由哪些病毒引起的?该如何预防?

Q:病毒性肝炎是由哪些病毒引起的该如何预防A:引起病毒性肝炎的病毒种类很多,除主要感染肝脏引起肝炎与肝细胞坏死的甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病毒外,一些全身性病毒也可感染肝脏,引起肝炎。例如疱疹病毒科的巨细胞病毒、EB病毒、单纯疱     

疱疹病毒的微生态问题

疱疹病毒的分子生物学基础疱疹病毒科在医学领域中熟知已久,可分为三个亚科,α、β和γ。α亚科包括人和动物的疱疹病毒,如人的单纯疱疹病毒1型、2型(HSV—1,2),牛乳腺炎病毒,假狂犬病毒,马流产病毒等,其 DNA 分子量范围为87～105×10~6d。β亚科包括人和鼠的巨细胞病毒(HCMV,MCMV),其DNA 分子量为130～150×10~6d.γ亚科包括人的Epstein-Barr 病毒(EBV)和几种灵长类(猴)病毒,其 DNA 分子量为85～115×10~6d。最近发现的人 B 细胞白血病病毒(HBLV),称为人疱疹病毒—6型(HHV—6),亚科不明。     

疱疹病毒科研究进展

疱疹病毒是一类大型双链DNA病毒.至今已发现9种疱疹病毒可感染人类,分别是单纯疱疹病毒1型、2型(HSV-1、2)、带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(EBV)、人巨细胞病毒(HCMV),以及人疱疹病毒(HHV)-6A、HHV-6B、HHV-7、卡波济肉瘤相关病毒(HHV-8)等,它们是已知感染人类的病毒种类数最多的一个病毒科.     

重组人αB干扰素在大肠杆菌中的克隆与高效表达

人αB干扰素(IFN-αB)是体内具有多种生物学功能的细胞调节因子,能抵御病毒感染和抑制肿瘤细胞生长,在临床上有广泛而重要的应用价值。IFN-α在治疗低度恶性淋巴瘤、慢性白血病、肝炎等方面显示良好的效果,资料表明IFN-αB抑制病毒作用较αD型干扰素强30倍。本文利用基因重组技术构建IFN-αB高效表达菌株E.coli XL-Blue/pBm,经酶(?)鉴定、DNA测序、SDS-PAGE、Western Blot及生物活性测定等分析鉴定,表明能特异性地表达具有生物活性的26 kD IFN-αB。表达水平达到23％(占总菌体蛋白比值),比活为1.0×10~6/mg,具有良好的应用前景。     

我国D2-43病毒株PrM-E基因的复制型载体质粒DNA的免疫原性(英文)

观察含我国登革 2型病毒株 (D2 4 3)的PrM E基因的复制型SFV(semlikiforestvirus)重组质粒DNA的免疫原性 ,为登革新型疫苗的研制提供依据 .将PrM E基因自T载体上切下 ,插入复制型SFV病毒载体质粒DNA中 .将此重组质粒DNA以电穿孔法导入BHK2 1细胞 ,用间接免疫荧光法在感染细胞内可检测到登革 2型病毒特异蛋白的表达 .采用去除内毒素的质粒提取试剂盒制备重组质粒DNA ,然后以不同剂量通过肌肉多点注射途径免疫Balb c鼠 ,获得的鼠血清可与登革D2 4 3感染的C6 36抗原片起特异的抗原抗体反应 .结果表明 ,含登革 2型病毒PrM E基因的复制型SFV病毒载体质粒DNA在Balb c鼠中可诱导登革 2型病毒特异抗体的产生 ,但抗体水平较低 .     

遗传工程与医学

肿瘤病因研究:近年来肿瘤研究的最大成果是发现致癌基因存在于正常DNA中,叫原癌基因,它们是很保守的,但在某种些病毒或致癌物质作用下,使它激活而转变为癌基因,一旦癌基因发动就引起细胞大紊乱,最终结果导致癌症。研究癌基因的方法必须用基因工程手段去克隆和制备基因分析探针,所以基因拼接或重组DNA技术为癌症研究开拓了新的领域。诊断:如用DNA重组技术克隆了乙型肝炎病毒并制备探针,则可用分子杂交法来诊断肝炎,专一性强,灵敏度高,不会出现假阳性,并可确证患者否     

消化道传播病毒性肝炎研究进展

病毒性肝炎是由多种不同肝炎病毒引起的,以肝脏损害为主要表现,具有广泛流行性和严重传染性的一类疾病,严重危害人类健康,是我国目前重大的公共卫生问题之一。迄今鉴定出的具有明确致病性的肝炎病毒主要是甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、丁型肝炎病毒(HDV)和戊型肝炎病毒(HEV),分别引起甲、乙、丙、丁、戊型肝炎。病毒性肝炎按传播途径的不同可以分为两类,一类是经肠道外传播的病毒性肝炎,包括乙、丙、丁型肝炎;另一类是经肠道(即消化道)传播的肝炎病毒,包括甲肝和戊肝,其发病有季节性,可呈暴发流行。本文旨在对经消化道传播的病毒型肝炎(甲肝、戊肝)的病原学、流行病学特征及其影响因素、控制和预防作一综述,以期对其流行和科学防控研究提供参考。     

乙型肝炎病毒持续感染患者细胞内病毒复制的研究

用Southern blot技术对乙肝病毒感染肝脏和外周血白细胞的情况进行了对比研究,发现白细胞的阳性率为44％,肝组织的阳性率为46％,两者无统计学差异。根据琼脂糖凝胶电泳速度可将病毒DNA分子分为游离型、整合型和混合型,配对检查两者亦无明确相关性,说明外周血白细胞是乙肝病毒攻击的靶细胞,亦是病毒复制的场所。白细胞中病毒DNA游离型与血清学指标HBeAg( ),HBV DNA斑点杂交( )关系密切,而整合型除与上述指标有关外,还和抗-HBe( )有关,表明病毒在乙肝发病过程中复制和部分静止的差异。     

猴B病毒PCR检测方法的建立

目的　建立检测猴血B病毒的PCR方法。方法　根据MakotoH报道的引物 ,用PCR方法直接扩增猴血B病毒及扩增经Vero细胞培养后的猴血B病毒 ,扩增产物连于pGEM T载体。结果　这四对引物可同时对猴血B病毒及经Vero细胞培养后的猴血B病毒进行扩增 ,扩增结果一致 ,对扩增片段克隆测序的结果证实 ,其与美国猴B病毒E2 4 90株同源性为 10 0 %。结论　建立了从血样中直接检测猴B病毒DNA的PCR方法。     

传统DNA疫苗载体与Semliki森林病毒复制子对HIV-1 Pr55gag表达与体液免疫原性的比较性研究

为探索Semliki森林病毒(SFV)衍生的复制型DNA载体可否用于HIV疫苗的候选载体,对该载体与传统DNA疫苗载体对HIV-1Pr55gag的表达与体液免疫原性进行了系统比较研究.将野生型(wtgag)及密码子改造(syngag)的HIV-1 ⅢB gag基因分别克隆于SFV DNA载体及传统DNA疫苗载体[pCDNA3.1(+)],对其Pr55gag细胞内表达水平、Pr55gag病毒样颗粒释放、以及在BALB/c鼠的体液免疫原性进行了比较.在293T、H1299、C2C12和BHK细胞系中,SFV-wtgag可以Rev非依赖方式有效表达Pr55gag,而pC-wtgag转染的细胞不能有效表达Pr55gag,从而不能诱导小鼠产生免疫反应.虽然SFV质粒的细胞转化效率明显低于pCDNA载体,SFV-wtgag和SFV-syngag在细胞内Pr55gag的表达量与pC-syngag相似,而Pr55gag病毒样颗粒的释放明显低于pC-syngag.在肌内注射免疫的小鼠中,低剂量(0.1和1.0μg)的SFV及pCDNA gag表达质粒均未诱导出GAG特异性免疫反应.在高剂量(10,30,100μg)免疫组中,与SFV gag表达质粒相比,pC-syngag可诱导出较高水平的TH1型GAG特异性抗体.SFV-syngag较SFV-wtgag可诱导出高水平的体液免疫反应.结果提示,SFV衍生的复制子单独使用不能在小鼠诱导出优于传统DNA疫苗载体的HIV-1 GAG特异性体液免疫反应,其原因可能与病毒样颗粒的释放有关.密码子改造的gag基因的优势在SFV载体系统中得到了进一步证实.     

Epstein-Barr病毒对人鼻咽癌上皮细胞(CNE株)的感染

迄今所知,Epstein-Barr病毒(EB病毒)只是嗜人和个别其它灵长类动物B淋巴细胞的病毒,但是用核酸杂交技术业已证明,在人鼻咽癌上皮细胞中存在着EB病毒的DNA。最近的工作又进一步确证,EB病毒基因组只存在于未分化型人鼻咽癌的上皮细胞,而不在分化良好的鼻咽癌的上皮细胞中。不论前者是通过怎样的途径接受EB病毒的感染,以及后者能否接受感染都是没有解决的问题。     

庚型肝炎病毒NS5 cDNA片段的表达及其免疫原性的研究

一段长度为880 bp的庚型肝炎病毒cDNA在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中得到表达。此cDNA被插入到表达质粒pGEX-5X-1中,位于编码日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶（GST）的DNA序列下游,并与GST处于同一阅读框。用乳糖在37℃下诱导表达出以包涵体形式存在的GST-NS53融合蛋白,并用脲溶法提取了该蛋白;在20℃诱导时,表达出的蛋白大部分可溶,用谷胱甘肽Sepharose-4B亲和层析柱对可溶性的融合蛋白进行了纯化。免疫印迹实验证明,此融合蛋白能被庚型肝炎病人的血清和自制的抗GST血清特异性地识别。用PCgene软件对NS53氨基酸序列的亲水性和抗原决定簇进行了分析。本研究为庚型肝炎ELISA诊断试剂研制打下了基础。