探讨热原试验中影响试验数据的因素

目的通过几组试验,分析热原试验中存在常见影响试验数据的几个要素,并提出解决建议。方法对供试品、预选周期、基础体温、家兔的休息周期等多个方面进行统计,总结影响热原数据变化因素。结果家兔升温总和均值随着连续注射批次的增加而有所降低,体温灵敏度变差;合格家兔在4周以内再次预选,合格比例85%以上,6周符合要求的比例为79.1%,9周合格比例降至66.6%;基础体温38.0~38.4℃及39.3~39.6℃区间家兔实验中体温波动幅度≥0.6℃的动物例数较多,38.0~38.4℃区间家兔降温0℃动物数达到50.0%,39.3~39.6℃区间家兔最大升温≥0.4℃的动物数比例较高;家兔冬季基础体温略低于夏季(约0.2℃),休息72~96 h后对家兔基础体温均值、异常体温动物的数量有较好的控制。结论热原检查应尽量采用不同品种供试品交替试验,并通过控制预选兔的使用周期及合理安排家兔实验休息周期,选择基础体温适中的家兔进行试验,以保证热原试验数据的准确性。     

关于用鲎试剂(TAL)检测注射制剂中内毒素含量的讨论和意见

<正> 1980年,美国食品药品管理局(FDA)就曾发布了LAL试验可行性指南的草案,该指南制定了检测注射制剂中内毒素的LAL试验程序,为此,所使用的LAL试剂必须经FDA批准,其灵敏度应当是标定的,并不得含有对LAL有抑制或增强作用的物质。在我国,对注射制剂用鲎试验法与常规的家兔热原试验法进行比较的研究已广泛开展。在总共1800批试验中,有130批鲎试验阳性,只有20批发现与家兔法结果不符,所有那些家兔试验通不过(阳性)的批号,在鲎试验中皆为阳性反应。这足以证明,体外鲎试验法是一种特异性好,远比常规家兔法灵敏度高的试验法。但迄今为止,是否将鲎试验作为一个公认的热原试验法纳入中国药典,还一直存在着争论。     

Beagle狗肾细胞及用于制备乙脑活疫苗的研究

Ｂｅａｇｌｅ乳狗（５－１０日龄）肾块用热消化法制成细胞批放液氮保存,检定合格后做下列试验：（１）复苏培养长满单层后更换维持液,其细胞能维持４天以上,克服了常规消化培养细胞维持时间短（３６小时）的缺陷。（２）传代１４－２株病毒时,１代病毒的滴度即达６．０４－６．２４ＬｏｇＰＦＵ／ｍｌ,１代后的各代（至１１代）病毒滴度无明显提高。（３）该细胞接种１４－２株病毒时不产生明显的破坏性病变（ＣＰＥ）,在收毒前采取冻溶１次比冻溶前的病毒滴度提高０．２７－０．５ＬｏｇＰＦＵ／ｍｌ。以ＢＤＫ细胞传１代的１４－２株病毒作生产毒种,收毒前冻溶１次等工艺法制备五批疫苗,全面检定结果均符合《乙脑活疫苗规程》的质量标准。其中病毒滴度为６．０９－６．２４ＬｏｇＰＦＵ／ｍｌ;免疫效价（ＩＤ５０＝ｍｌ）为１．９－４．０×１０－５,与相同滴度的原毒株１４－２ＰＨＫ苗对照无明显差异（ｔ＝０．９６８Ｐ＞０．０５）,表明其免疫原性与原毒株相似。     

秦艽体细胞愈伤组织诱导及继代研究

本文报道了秦艽取叶、幼苗为外植体诱导愈伤组织试验。结果表明,取幼苗６７－Ⅴ培养基,２４－Ｄ２５ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０５ｍｇ／Ｌ,诱导频率最优,可高达１００％。继代培养,以６７％培养基,ＮＡＡ０５ｍｇ／Ｌ,２４－Ｄ（１－１５）ｍｇ／Ｌ最优     

益生素对祖代伊沙蛋鸡性能的影响

２５６９羽祖代伊沙蛋鸡（ＩＳＡＢｒｏｗｍ）,随机分成２组。试验组１１５３羽,在基础日粮中添加０１５％的益生素,对照组１４１５羽饲喂基础日粮,不添加益生素,试验期３０天。试验结果表明,试验组和对照组的平均产蛋率分别为７２３２±４１４％和６６７３％±６６１％,试验组较对照组高８３８％,差异极显著（Ｐ＜００１）;试验组和对照组的种蛋合格率分别为６２９１％±５９０％和５４５２％±７７８％,试验组比对照组高１５３９％,差异极显著（Ｐ＜００１）;试验组的种鸡成活率较对照组高０３９％,差异不显著;试验组和对照组的鸡舍温度分别为３５８７℃±１６７℃和３４９７℃±１７０℃,试验组较对照组高０９℃,差异显著（Ｐ＜００５）。该试验结果提示,在高温季节使用益生素,具有延缓蛋鸡产蛋率及种蛋合格率下降作用;通过分析产蛋率及种蛋合格率相关性和回归模型表明,益生素能显著地影响产蛋率和种蛋合格率的相关性,提高种蛋合格率。     

影响家兔热原检查结果的因素分析

目的统计实验数据,分析影响家兔热原检查结果的因素。方法将一定剂量的供试品静脉注入家兔体内,在规定时间内,观察家兔体温升高的情况。结果基础体温≥38.9℃的家兔,其升温≥0.4℃及≥0.6℃的百分比与基础体温<38.9℃家兔相比具有显著性差异(P<0.05),且不同季节家兔升温≥0.4℃的家兔数百分比具有显著性差异(P<0.05),夏秋两季所占百分数高于冬春两季,夏季(6～8月)家兔基础体温较高。结论不同基础体温家兔对热原敏感程度不同,敏感性随家兔基础体温的升高而下降,为保证热原试验结果的准确性,夏季应适当提前热原质检查时间。     

乳杆菌DM8909对金黄色葡萄球菌与阴道上皮细胞粘附影响的研究

本文对乳杆菌ＤＭ８９０９对阴道主要致病菌金黄色葡萄球菌与阴道上皮细胞的粘附影响作了补充实验。将等量ＤＭ８９０９液与金黄色葡萄球菌液同时与上皮细胞粘附进行了观察。结果表明,体外试验中,在ｐＨ７２情况下,乳杆菌与葡萄球菌同时加入时葡萄球菌粘附数量比葡萄球菌单独粘附少（Ｐ＜００１）,乳杆菌与金葡菌粘附数量相差不大（Ｐ＞００５）;乳杆菌与金葡菌先于ｐＨ４５下作用８１２ｈ,然后与上皮细胞同时孵育２小时,粘附的乳杆菌与金葡菌量比ｐＨ７２时均有减少,而金葡菌量比其单独粘附明显减少（Ｐ＜００１）,且明显少于乳杆菌（Ｐ＜００１）。说明乳杆菌能抑制葡萄球菌对阴道上皮细胞的粘附     

用ELISA法检测2.5S鼠神经生长因子

鼠颌下腺提纯的２５ＳＮＧＦ免疫家兔,获得兔抗ＮＧＦ抗体,研制出鼠２５ＳＮＧＦＥＬＩＳＡ检测试剂盒,该试剂盒灵敏度小于１ｎｇ／ｍｌ,在６７０～０８４ｎｇ／ｍｌ范围内,线性良好,ｒ＝０９９。与大鼠、小鼠及人血浆无非特异反应,在大鼠血浆中,ＮＧＦ样品回收率在９１％～１０７％之间,变异系数小于１０％（ｎ＝４）。结果表明：本试剂盒操作简便,灵敏度高,特异性强,适合药代动力学研究及生产过程中的ＮＧＦ检测。     

何首乌叶铜锌超氧物歧化酶纯化及性质

何首乌（ＰｏｌｙｇｏｎｕｍｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍＴｈｕｎｂ．）叶Ｃｕ·ＺｎＳＯＤ经硫酸铵盐析、离子交换柱层析及葡聚糖凝胶过滤等步骤,被分离成两组ＳＯＤ同工酶（ＳＯＤ１,ＳＯＤ２）,它们被纯化到均一程度。ＳＯＤ１分子量为３２．４ｋＤ,亚基分子量为１６．２ｋＤ,最适ｐＨ值为５０,在６０℃和６５℃时的半衰期分别为１４ｍｉｎ和８ｍｉｎ;ＳＯＤ２分子量为３０５ｋＤ,亚基分子量为１５９ｋＤ,最适ｐＨ值为６０,在６０℃和６５℃时半衰期分别为３２ｍｉｎ和１６ｍｉｎ,它由２７４个氨基酸残基组成,不含Ｃｙｓ、Ｔｙｒ和Ｔｒｙ。ＳＯＤ１和ＳＯＤ２每ｍｏｌ酶都含有２ｍｏｌＣｕ和２ｍｏｌＺｎ,它们在紫外区最大吸收波长均为２７５ｎｍ。     

鲎试验法检测A群流脑多糖菌苗中内毒素的研究

本文应用鲎试验凝胶法定量测定了２１２批Ａ群流脑多糖菌苗中内毒素含量,并与家兔热原试验结果进行了比较,通过试验求得内毒素标准品对家兔体温升温变化关系的线性方程和内毒素对家兔最小致热剂量。结果表明,占检定总批数９４．３％的制品中内毒素含量＜１００ＩＵ／μｇ多糖,家兔热原试验合格率为１００％,５．７％的制品中内毒素含量≥１００ＩＵ／μｇ多糖,家兔热原试验合格率为５８．３％。根据实验结果,可制订用凝胶法替代家兔法进行Ａ群流脑多糖菌苗的热原质试验的判定标准。作者建议：内毒素含量＜１００ＩＵ／μｇ多糖者,热原质试验判为合格,≥１００ＩＵ／μｇ多糖者,用家兔法予以仲裁。     

不同基础体温的家兔对热原检查结果的影响

对实验中使用的普通级家兔基础体温进行统计,观察不同基础体温家兔注射血液制品后的升温情况。按照中华人民共和国药典(2005)年版三部的热原检查规定进行测定,将实验家兔基础体温38.0℃~39.6℃分为3组:38.0℃~38.5℃为1组;38.6℃~39.0℃为2组;39.1℃~39.6℃为3组。注射制品后,家兔升温≥0.4℃记为升温家兔,统计升温≥0.4℃的家兔升温百分率并对其进行统计学处理。经卡方检验,升温家兔≥0.4℃的百分率1组与2组、1组与3组有显著性差异(p<0.05);2组与3组无显著性差异(p>0.05)。家兔对热原的敏感性随基础体温的高低而有明显的差异,基础体温偏低的家兔对热原更敏感,其升温幅度大于基础体温偏高的家兔。     

浙江省热原检查用兔敏感性状况调查

目的调查浙江省热原检查用兔对细菌内毒素的敏感性情况,为提高热原检查结果的准确性和可靠性提供参考。方法对全省所有取得生产许可证单位的家兔,用国家颁发的细菌内毒素标准品,＂热原检查法＂进行检查,剂量分别为5EU/Kg和10EU/Kg,记录并比较各单位家兔的平均升温值和升温率。结果对细菌内毒素,各兔场家兔的敏感性有一定的差异。静脉注射5EU/kg,平均升温值为0.40℃～0.87℃,升温率为35%～83%;静脉注射10EU/kg,平均升温值为0.74℃～1.16℃,升温率为70%～94%。结论不同生产单位的家兔对细菌内毒素的敏感性不同,有必要对热原检查用家兔进行细菌内毒素敏感性检查。     

Comparison of the rabbit pyrogen test and Limulus amoebocyte lysate (LAL) assay for endotoxin in hepatitis B vaccines and the effect of aluminum hydroxide.

The rabbit pyrogen test and Limulus amoebocyte lysate (LAL) assay have been used to detect endotoxins in vaccines, but interactions between the endotoxins and proteins or aluminum hydroxide can interfere with the results. Currently, the rabbit pyrogen test is used to detect endotoxin in hepatitis B (HB) vaccines even though the HB surface protein, the active ingredient, is over-expressed in and purified from eukaryotic cells which lack endotoxin. Therefore, we examined the possibility of replacing the animal tests with the more efficient LAL test. To this end, we determined whether the aluminum hydroxide in the HB vaccines affects the rabbit pyrogen test and the LAL assay. HB vaccines and HB protein solutions spiked with lipopolysaccharide (LPS) produced almost the same dose-dependent temperature rise in rabbits, indicating that the aluminum hydroxide in the HB vaccine does not interfere with the pyrogenic response in rabbit. In contrast, a spike recovery study showed that aluminum hydroxide interfered with the LAL clot and kinetic assays; however, the LAL clot assay was effective at detecting endotoxin without loss of LAL activity after serial dilution of the samples. Furthermore, there was good correlation in the LAL clot assay between the amount of LPS added and the amount recovered. However, both turbidimetric and chromogenic kinetic assays displayed no correlation between the LPS amount added and recovered. Our results suggest that the LAL clot assay is sensitive and reliable when samples are properly prepared, and can be used to replace the rabbit pyrogen test for the detection of endotoxin in HB vaccines.     

Applicability of bacterial endotoxins test to various blood products by the use of endotoxin-specific lysates

Endotoxin contamination is a serious threat to the safety of parenteral drugs, and the rabbit pyrogen test has played a crucial role in controlling this contamination. Although the highly sensitive endotoxin test has replaced the pyrogen test for various pharmaceuticals, the pyrogen test is still implemented as the control test for most blood products in Japan. We examined the applicability of the endotoxin test to blood products for reliable detection and quantification of endotoxin. Nineteen types of blood products were tested for interfering factors based on spike/recovery of endotoxin by using 2 types of endotoxin-specific lysate reagents for photometric techniques. Interfering effects on the endotoxin test by the products could be eliminated by diluting from 1/2 to 1/16, with the exception of antithrombin III. However, conventional lysate reagents that also react with non-pyrogenic substances, such as (1–3)-β-d-glucan, produced results that were not relevant to endotoxin content or pyrogenicity. Our results showed that the endotoxin test would be applicable to most blood products if used with appropriate endotoxin-specific lysate reagents.     

无热原蒸汽灭菌在疫苗生产中的应用与效果验证

为保证生物制剂生产的安全性,采用空载热分布试验,满载热穿透试验和微生物挑战试验对无热原蒸汽灭菌柜进行验证。另取疫苗生产中常用的Earle's液、PBS液及0.2%水解乳蛋白各5批,均采用无热原注射用水配制,无热原蒸汽灭菌。选用"Fluids121℃"15分钟循环程序和"Fluids115℃"20分钟循环程序检测热原质与灭菌效果。灭菌试验验证结果显示,无热原蒸汽灭菌符合现行GMP的要求。     

实验兔脚皮炎与相对湿度的相关性及对热原筛选实验的影响分析

目的分析实验兔脚皮炎发病率与相对湿度的相关性及脚皮炎实验兔对热原筛选实验合格率的影响。方法将2006、2007年实验室相对湿度记录、实验兔脚皮炎记录及热原筛选实验记录进行汇总统计,并对数据进行生物学分析。结果实验室相对湿度超过70％时,可导致实验兔脚皮炎发病率的升高,二者存在显著相关性（P〈0．01）;有脚皮炎的实验兔可降低筛选实验的合格率,二者存在显著相关性（P〈0．01）;实验兔基础体温的高低,对筛选合格率有显著影响（P〈0．0001）。结论实验兔的脚皮炎发病率与环境相对湿度有显著的正相关性,当实验室相对湿度超过实验兔适宜湿度范围时,可导致其脚皮炎的发病率上升;有脚皮炎的实验兔与无脚皮炎的实验免相比,可显著降低热原筛选实验的合格率。     

The effect of leukocyte pyrogen on thermosensitive neurons of the anterior hypothalamus]

Impulse activity of neurons of the medial preoptic and septal brain areas of rabbits caused by variations in the local temperature and systemic injections of the leukocytic and bacterial pyrogens was studied. The firing rate of the warmsensitive neurons decreased and that of the cold thermodetectors was activated as a result of pyrogen action. As compared with the bacterial pyrogen, leukocytic pyrogen caused a more rapid decrease of the warmthermodetector activity. Thermoneutral neurons failed to react considerably either to the leukocytic or to the bacterial pyrogen.     

人免疫球蛋白中肠道病毒71型中和抗体效价的测定

采用经典微量细胞病变法,应用近两年分离自中国手足口病(HFMD)高发区的3株肠道病毒71型(EV71)病毒株,对中国不同血液制品厂家生产的35批人免疫球蛋白制品进行抗-EV71中和效价检测。结果显示,3株不同EV71病毒株间的抗-EV71中和效价差异均在4倍以内,差异无显著的统计学意义(F=2.323,P0.05)。根据这3株毒株检测结果判定,35批人免疫球蛋白的抗-EV71均为阳性,肌肉注射用免疫球蛋白(简称肌丙)的抗-EV71-GMTs(525.9)显著高于静脉注射用免疫球蛋白(简称静丙)的GMTs(252.3,F=66.518,P0.01)。30批静丙的抗-EV71-GMTs中和效价分布在128.0~384.0之间。应开展原料血浆中抗-EV71中和效价的筛选,研制高效价的EV71特异性免疫球蛋白制品,用于HFMD的治疗和预防。     

抗淋巴细胞免疫球蛋白制品中热原处理

对热原不合格的抗淋巴细胞免疫球蛋白 (ALG)半制品再制条件进行了研究。将高热原的ALG半制品通过使用碱、酸以及A5 0处理后 ,细菌内毒素的含量明显降低 ,热原质经家兔和鲎试剂检测均合格 ,其生物学效价仍不低于 1 :4 0 0 0 ,而且它们的其它各项主要指标也都达到中国生物制品暂行规程的要求。这一试验结果表明碱、酸处理并辅以A5 0吸附是去除ALG制品中热原的一种有效方法