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1.
植物病原菌侵染寄主的过程就是病原菌和寄主植物相互作用的过程.在这个相互作用过程中,Ⅲ型分泌系统和Ⅲ效应物与病原菌致病密切相关.大部分革兰氏阴性植物病原菌通过Ⅲ型分泌系统定向的把效应物蛋白传递到宿主细胞,效应物蛋白进入植物体引起致病或过敏反应.本研究将百日咳杆菌的腺苷酸环化酶基因连接至含启动子的pLAFRJ载体上,从而构建出一个新的体外快速鉴定Ⅲ型效应物的报告质粒pJJA,并用已鉴定为Ⅲ型效应物基因的十字花科黑腐病菌XC1553的启动子和信号区验证该报告质粒,证明这个系统是可以工作的.该报告质粒为进一步精确筛选鉴定十字花科黑腐病菌Ⅲ型效应物提供了材料. 相似文献
2.
PACAP促PC12细胞突起生长的分子机制 总被引:1,自引:0,他引:1
垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)具有广泛的生理功能。近年来的研究发现,PACAP具有重要的神经营养作用。PACAP可通过激活多条细胞内信号转导通路,促使PC12细胞突起生长,使其向神经元样细胞分化。本文综述了PACAP引起PC12细胞突起生长的信号转导通路,有助于深入了解PACAP神经营养作用的分子机制。 相似文献
3.
根据文献报道垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide, PACAP)的氨基酸序列,推导出其核苷酸序列并设计成部分互补的6条寡核苷酸片段,利用DNA合成仪人工合成、纯化这6条寡核苷酸片段,通过片段退火、连接、克隆及测序鉴定获得了PACAP基因.将PACAP基因克隆至pGEX-4T-3质粒中转化BL21进行表达分析,融合蛋白约占细胞总蛋白的30%,其中部分为可溶性,部分以包涵体形式存在.通过亲和层析纯化GST-PACAP融合蛋白,该蛋白质能促进PC12细胞轴突生长及脊髓神经元存活. 相似文献
4.
垂体腺苷酸环化酶激活肽基因的合成表达与活性研究 总被引:3,自引:0,他引:3
根据文献报道垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary
adenylate cyclase activating polypeptide, PACAP)的氨基酸序列,推导出其核苷酸序列并设计成部分互补的6条寡核苷酸片段,利用DNA合成仪人工合成、纯化这6条寡核苷酸片段,通过片段退火、连接、克隆及测序鉴定获得了PACAP基因.将PACAP基因克隆至pGEX-4T-3质粒中转化BL21进行表达分析,融合蛋白约占细胞总蛋白的30%,其中部分为可溶性,部分以包涵体形式存在.通过亲和层析纯化GST-PACAP融合蛋白,该蛋白质能促进PC12细胞轴突生长及脊髓神经元存活. 相似文献
5.
PH(pleckstrin homology)结构域与细胞方向感觉关系密切,目前已发现,PH结构域存在于60多种蛋白质中,这些蛋白质能与趋化细胞胞膜表面的相关结合位点结合,进而激发信号转导的下游事件.这种结合有以下特点:a.迅速而短暂;b.只与外界环境中两点间浓度梯度差相关,据此提出了“空间模式”;c.改变趋化剂的位置时,结合位点在胞膜上的分布也随之改变,由此提出了“时间模式”.深入而全面地探讨各种PH结构域及其结合位点在细胞方向感觉中的作用,对于细胞方向感觉的研究具有巨大的推动作用和深远的理论意义. 相似文献
6.
Gβ1γ2蛋白的纯化及其与腺苷酸环化酶的互作关系 总被引:2,自引:0,他引:2
对G蛋白β1γ2亚基及偶联组分在信号传导中的作用进行了初步研究. 以离体昆虫细胞Sf9(Spodoptera frugiperda, 秋粘虫卵巢细胞)或H5(Trichoplusia ni, 粉纹夜蛾细胞)为生物反应器, 高效表达了G蛋白β1γ2亚基. 用Ni-NTA亲和层析柱, 经快速蛋白纯化技术(FPLC)获得高纯度的Gβ1γ2. 活性测定表明, 纯化的GGβ1γ2能显著刺激腺苷酸环化酶(AC2)的活力. 应用基于表面胞质团共振现象的BIAcore技术, 采用生物传感芯片NTA(biosensor chip NTA)直接证明腺苷酸环化酶2 (AC2)的胞质末端C2区域为G蛋白β1γ2亚基的结合区, 从而明确了二者互作的活性位点和结合位点同位于该区域. 相似文献
7.
Intein-mediated rapid purification of recombinant human pituitary adenylate cyclase activating polypeptide 总被引:3,自引:0,他引:3
In order to obtain the recombinant human PACAP efficiently by intein-mediated single column purification, a gene encoding human PACAP was synthesized and cloned into Escherichia coli expression vector pKYB. The recombinant vector pKY-PAC was transferred into E. coli ER2566 cells and the target protein was over-expressed as 相似文献
8.
以人睾丸组织总RNA为材料,用RT-PCR方法合成了人腺苷酸环化酶激活多肽(ACAP)编码区(530bp)和全长cDNA(1930bp)片段.并分别将这些cDNA片段克隆入pUC18载体的SmaⅠ限制性内切酶位点.对重组质粒分别采用直接DNA双链末端终止法和在核酸外切酶Ⅲ和核酸酶S1作用下连续缺失DNA后,相继克隆,构成一系列连续缺失的缺失体的方法,测定了全部核苷酸顺序.结果表明:ACAP编码区的cDNA顺序与已报道的有12处碱基的改变,其中11处碱基顺序的改变不引起编码的氨基酸变化,只有第385位的T→A后,才引起其编码的氨基酸由Ser→Thr,但由于Ser和Thr的理化性质极其相似,这一变化可能并不导致蛋白质的生物活性的变化.这些改变可能是由于种族、群体或个体的差异. 相似文献
9.
用1%脑酸钠和20%饱和度的硫酸铵抽提牛脑皮层细胞膜得到含G蛋白和腺苷酸环化酶(AC)的制剂,通过Sepharose6B柱将两分开,再将含G蛋白的级分用庚胺-Sepha5rose4B疏水柱、羟基磷灰石柱将其它亚型的G蛋白(主要是Gs和Go)从抑制型G蛋白(Gi)中除去,获得纯化的较高的Gi,其GTP结合活力为17.6nmol/mg,比细胞膜Gi活力提高50倍;并具有较高的产率,从1g膜蛋白扣可获 相似文献
10.