石杉科植物石杉总碱含量的测定及基于紫外光谱的除趋势对应分析

对来自浙江、福建境内石杉科植物蛇足石杉（Huperzia serrata）、柳叶马尾杉（Phlegmariurus cryptomerianus）10个不同地理居群的石杉总碱含量进行了测定．并基于紫外光谱,对它们的表型分化进行了除趋势对应分析。结果表明：①石杉科这两种植物叶片的石杉总碱含量普遍高于茎中的含量;②来自浙江磐安的蛇足石杉居群的叶、茎石杉总碱含量都明显高于其它居群。可以选择该居群作为栽培蛇足石杉的种源;③DCA排序发现,产自磐安的蛇足石杉样品,特别是叶的提取液,其紫外光谱明显不同于其它样品．表明紫外光谱法能够用于鉴别石杉总碱含量较高的蛇足石杉药材。     

长春西汀联合石杉碱甲片用于老年血管性痴呆症的疗效评价及对HIF-1α、Livin和VEGF水平的影响

目的:评价长春西汀联合石杉碱甲片用于老年血管性痴呆症的疗效及对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、抗凋亡因子(Livin)和血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响。方法:98例老年血管性痴呆症患者依据简单随机法分为对照组(n=51)和研究组(n=47),对照组采用长春西汀治疗,研究组在对照组基础上联合石杉碱甲片治疗,比较两组临床疗效,治疗前后简易精神状态评价量表(MMSE)、哈金斯基(Hachiaski)缺血量表(HIS),HIF-1α、Livin和VEGF水平,血液流变学指标,以及药物不良反应发生情况。结果:治疗后,研究组总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。治疗前,两组MMSE、HIS评分,HIF-1α、Livin和VEGF水平,血液流变学指标比较差异无统计学意义(P0.05);治疗后,两组MMSE、Livin和VEGF水平较治疗前显著上升,HIS评分、HIF-1α水平和血液流变学指标较治疗前显著下降,研究组以上指标变化更明显,差异均有统计学意义(均P0.05)。两组不良反应发生情况比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:长春西汀联合石杉碱甲片治疗老年血管性痴呆症的疗效显著,可明显改善患者认知功能,调节HIF-1α、Livin及VEGF水平。     

从千层塔中微波协助提取石杉碱甲和石杉碱乙

首先从 8种溶剂中筛选出硫酸作为微波协助提取的浸提溶剂 ,然后用正交试验确立了千层塔生物碱的最佳提取条件。以石杉碱甲和石杉碱乙回收率为指标 ,考察了溶剂倍数、溶剂浓度、微波处理时间等因素。结果表明 ,在室温下微波协助提取的最优条件为 :酸浓度 0.8% (v/v) ,液固比例 2 5∶1 ,微波处理时间 90s。 3次重复实验所得石杉碱甲和石杉碱乙回收率分别是 93.7%和 93.9% ,相对标准偏差分别为 1.79%和 1.5 6% (n =3)。与传统的回流提取工艺相比 ,过程时间从 2h缩短为 90s,回收率提高了 1 0 %以上。     

石杉碱甲结构改造的研究进展

石杉碱甲是高效、高选择性的可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂,是治疗早老性痴呆症的一个有前景的药物.本文概述了石杉碱甲的性质、结构和构效关系,从结构简化、C10、吡啶酮环、脂桥环、环外双键和桥头氨基等方面综述了石杉碱甲结构改造的研究进展,并描述了所得的新型石杉碱甲类似物的抗乙酰胆碱酯酶的生物活性.在已合成的大量的石杉碱甲类似物中,部分类似物的活性优于天然石杉碱甲,石杉碱甲结构改造的研究取得了可喜的进展.     

石杉碱甲的研究进展

本文综述了1984年以来对石杉碱甲的药理作用、构效关系、合成及其天然来源等方面的研究进展;详细罗列了巳确认的石杉碱甲天然来源,以及从中分离出的其它生物碱;探讨了石碱杉甲的结构特征与其抑制乙酰胆碱酯酶活性能力之间的关系。     

中国马尾杉属拟石杉组(新组)的分类研究及马尾杉属的属下分类

1964年J．Holub建立马尾杉属Phlegmariurus(Herter)Holub之后,植物学界有各种不同的反映。 本文在研究中国种类基础上将这个属看作不同于石杉属Huperzia Bernh．的独立的属,其特殊性尤表现 在附生习性和热带分布两方面。本文将该属中国种类划分为三个组,列出其分组检索表。对其中新组 拟石杉组Sect. Huperzioides(sect. nov．)作了分类学研究,共记载了该组植物13种,内含4个新组合： Ph．petiolatus(Clarke)H．S．Kung et L. B．Zhang,Ph．cryptomerianus (Maxim．)Ching,Ph．ovatifolius (Ching)W. M. Chu, Ph. nylamensis (Ching et S. K. Wu)H. S. Kung et L. B. Zhang; 7个新异名: Hu- perzia formoana Holub [ = Ph. taiwanensis Ching], H. austrosinica Ching [ ＝ Ph. petiolatus ], Lycopodi- um minchegense Ching [ = Ph. mincheensis Ching ], Ph. mincheensis var. angustifolius C. Y. Ma [ ＝ Ph. mincheensis ], Ph. longyangensis C. Y. Ma [ = Ph. fordii ], Ph. nanus C. Y. Ma [ = Ph. fordii ], Ph. yangdongensis Ching et C. F. Zhang [ = Ph. fordii ]; 以及1个中国分布新记录种: Ph. hamiltonii。     

中国石杉属(狭义)小杉兰组的分类学研究

本文将石杉科石杉属(狭义)分为两组,即小杉兰组Sect．Huperzia和蛇足石杉组Sect．Serratae (Rothm．)Holub,对小杉兰组的概念进行了修订并对国产有关种类进行了分类学研究。共记载国产小杉 兰组植物12种1变种,并包括1个新组合:Huperzia quasipolytrichoides(Hayata)Ching var. rectifolia (J．F．Cheng)H．S．Kung et L．B．Zhang,2个新异名:H．hupehensis Ching和H．whangshanensisChing et P．C．Chiu．     

HPLC法检测蛇足石杉内生真菌胶胞炭疽发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙的含量

建立了高效液相色谱(HPLC)测定蛇足石杉(Huperzia serrate)内生真菌胶胞炭疽发酵液中石杉碱甲(Huperzina A)和石杉碱乙(Huperzine B)含量的方法,并以此方法检测胶胞炭疽发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙含量的积累。内生真菌发酵液经氯仿萃取、甲醇溶解、过滤后进行高效液相检测分析,选用Agilent Eclipse plus-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.015 mol/L乙酸铵(p H 6.8)和甲醇溶液(70∶30)为流动相进行等度洗脱,流速1 mL/min,检测波长为308 nm,连续检测内生真菌胶胞炭疽发酵液中第6–15天石杉碱甲和石杉碱乙的含量积累。结果表明,发酵提取液中的石杉碱甲和石杉碱乙可在25 min内进行很好的分离和分析,石杉碱甲在1.50-48.00μg/mL范围内线性关系良好(相关系数r为0.999 5),石杉碱乙在0.25-7.50μg/mL范围内线性关系良好(相关系数r为0.999 7),石杉碱甲和石杉碱乙的平均加标回收率分别为106.83%、108.06%,相对标准偏差(RSD)分别为3.34%、3.60%。该方法简便、快速、精密度高、结果准确,适用于内生真菌发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙含量检测。在发酵过程中,内生真菌发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙的含量呈现先增后减,随后有所增加继而又减少的趋势。石杉碱甲和石杉碱乙的含量分别在内生真菌发酵第14天、第8天达到最高,分别为12.417 0μg/mL、4.660 3μg/mL。该方法学的建立为内生真菌胶胞炭疽合成石杉碱甲与石杉碱乙的机制研究提供了检测手段,从而有利于药物新资源的开发。     

蛇足石杉内生真菌Shiraia sp. Slf14中赖氨酸脱羧酶基因的克隆、表达及功能

【目的】阿尔茨海默症治疗药物石杉碱甲(Huperzine A,Hup A)的生物合成途径起始于赖氨酸脱羧酶(Lysine decarboxylase,LDC)。本研究克隆及表达了来源于产Hup A的植物内生真菌的LDC基因,并研究了其功能。【方法】采用RT-PCR扩增法,从一株产Hup A的蛇足石杉内生真菌Shiraia sp.Slf14获得LDC基因,构建表达质粒p ET-22b-LDC与p ET-32a-LDC,转化感受态细胞E.coli BL21,加入IPTG至终浓度为1×10~(–3) mol/L,于24°C、200 r/min培养8 h,诱导表达LDC蛋白质;通过Ni~(2+)金属亲和层析纯化重组LDC并建立酶促反应体系,利用TLC检测了LDC催化活性。利用生物信息学软件分析了LDC的理化性质及蛋白质的空间结构。【结果】成功克隆并异源表达出重组蛋白LDC与Trx-LDC,经SDS-PAGE电泳鉴定分子量分别为24.4 k Da和42.7 k Da,与预计大小相符。TLC结果表明LDC与Trx-LDC均具有赖氨酸脱羧酶活性。【结论】本研究从产Hup A的蛇足石杉内生真菌Shiraia sp.Slf14中成功克隆到LDC基因并进行了异源表达,检测到了其催化活性,为丰富LDC分子信息及阐明内生真菌中Hup A生物合成机制提供参考数据。     

一株拮抗真菌的蛇足石杉内生细菌分离鉴定及培养条件优化

从蛇足石杉(Huperzia serrata)叶片中分离到一株对小麦赤霉(Fusarium graminearum)等多种植物病原真菌有强拮抗作用的内生细菌 H-6.通过形态和培养特性观察、生理生化实验及 16S rDNA 序列分析,初步鉴定该茵属于伯克霍尔德属,命名为 Burkholderia sp.H-6.同时还对该菌培养条件进行了优化,得出马铃薯浸出液中添加 2.5%的甘露醇和 0.1% NaNO3 有利于细胞生长和抑菌活性的产生,最适培养温度为 28℃.最佳初始 pH4.0.