高效价冻干人用狂犬病疫苗暴露后免疫程序的研究

初步确定高效价冻干人用狂犬病疫苗（6．0IU／剂）暴露后免疫程序。制备高效价的冻干人用狂犬病疫苗（6．0IU／剂）,以狂犬病街毒CNX8601和BD06分别攻击小鼠和比格犬的咬肌,接种不同效价的狂犬病疫苗,以RFFIT法检测中和抗体,根据动物死亡情况,计算暴露后疫苗保护率,对不同效价的疫苗进行中和抗体测定和保护率统计分析。在以小鼠为实验动物的疫苗保护率研究中,冻干人用狂犬病疫苗（3．1IU／剂）0／3／7／14／28免疫程序的保护率为40．6％,高效价的冻干人用狂犬病疫苗（6．0IU／剂）0／3／14免疫程序的保护率为56．2％,中和抗体比较,P〈0．05,2组间有显著性差异;在以比格犬为实验动物的保护效果研究中,冻干人用狂犬病疫苗的保护率（3．1IU／剂）为70％;高效价的冻干人用狂犬病疫苗（6．0IU／剂）的保护率为80％,中和抗体的比较,P〉0．05,没有显著性差异。高效价冻干人用狂犬病疫苗暴露后免疫程序可初步确定为0、3、14d免疫。     

天蚕素AD在毕赤酵母中的多拷贝整合表达及表达条件优化

【背景】天蚕素抗菌肽是目前研究最清楚、效果最显著的抗菌肽,实现工业化生产为其在农业、养殖业中的应用奠定了基础。【目的】获得一株高效生产天蚕素AD的基因工程菌株。【方法】构建重组载体pGAPZαA-CAD通过电击转化至PichiapastorisX33中,表达天蚕素AD基因并获得X33/GCAD菌株;构建重组载体pUCGAP-CAD导入至X33/GCAD菌株中。pGAPZαA-CAD是以博来霉素为抗性筛选标签被整合到P. pastoris X33的GAPDH启动子区域,pUCGAP-CAD是以遗传霉素为抗性筛选标签被整合到P. pastoris X33的非翻译rDNA区域,最终获得一株高效表达天蚕素AD的酵母菌株X33/GUCAD。【结果】通过质谱分析鉴定X33/GUCAD表达的抑菌物质为天蚕素AD,通过发酵条件的优化,表明X33/GUCAD菌株在以甘油为碳源和以蛋白胨、酵母提取物为有机氮源的情况下具有较强表达天蚕素AD的能力。【结论】较高的拷贝数更有利于提高天蚕素AD的产量,此工程菌株在后期发酵过程中稳定性较好,适于工业化生产。     

SARS康复患者血浆蛋白谱的双向凝胶电泳分析

以蛋白质双向凝胶电泳（2-DE）比较了不同中和抗体效价的SARS康复患者血浆样本（试验组）与正常人单采血浆样本（对照组）蛋白谱的异同。结果显示：对照组9份样本的2-DE 图谱出现蛋白斑点338±24个,试验组9份样本出现蛋白斑点348±45个,二者主要斑点的位置与数量基本一致;对照组中少量蛋白斑点的出现频度不同,且有4个蛋白点群的灰度值存在明显的差异;试验组有6个蛋白点群与对照组出现差异,并在相同区域Ⅲ内有4个蛋白斑点的灰度值出现变化,且灰度值与样本的中和抗体效价呈正相关性。结果表明,试验组与对照组的蛋白谱存在差异,且与SARS病毒中和抗体效价呈现相关性。     

蚀斑减少中和试验检测抗天花免疫球蛋白效价

为了建立测定抗天花免疫球蛋白效价的检测方法,采用抗天花免疫球蛋白50%中和100PFU痘苗病毒的稀释度来确定其效价。通过与NIBSC提供的抗天花人免疫球蛋白标准品进行的对比试验,结果显示基本一致,证明该方法是可行的。     

痢疾志贺氏菌属四种多价血清免疫原配制方法的改良研究

为了进一步提高痢疾志贺氏菌属四种多价免疫血清的效价,降低生产成本,提高生产效率,实验中对痢疾志贺氏菌属四种多价免疫原的配制进行了优化比较,结果显示,分别用传统的方法和优化改良法配制的免疫原免疫健康家兔,优化后的免疫效果明显优于传统方法。     

计算机可视化技术在抗生素效价测定中的应用

药学计算机可视化是将计算机科学和药学科学相结合 ,使计算结果与计算过程可视化 ,提供了与药学数据交互作用的手段 ,常用的微生物管碟法和薄层色谱分析法普遍限于手工测量与计算 ,该操作不仅费时费力、且主观性强、误差大 ,而专用的抑菌圈测量仪价格昂贵、功能单一 ,可视化过程差 ,很难对其过程进行规律性研究。为了提高测量精度和工作效率 ,减小误差 ,提出了抗生素效价的计算机可视化测量问题。1　工作原理抗生素效价的生物测定 ,是以抗生素的抑菌力和杀菌力作为衡量效价的标准 ,管碟法是最常用的方法之一。其原理是将已知浓度的标准溶液…     

改良抗体结合实验检测灭活狂犬病疫苗效价

目的:建立抗体结合试验检测狂犬病疫苗(aG株)效价的方法。方法:将待检测疫苗与疫苗标准品梯度稀释后分别加入人抗狂犬病毒免疫球蛋白国家标准品中和1 h,之后加入80%感染剂量的狂犬病毒CVS-11,体外中和1h后接种BSR细胞,培养24 h后免疫荧光染色,在显微镜下观察结果,通过检测剩余病毒量计算待检疫苗的效价,同时与小鼠中和试验法(NIH法)测定狂犬病疫苗效价进行比较。结果:2种方法对8个样品效价的检测结果无显著统计学差异(P=0.997,配对t检验)。结论:初步建立了改良抗体结合试验,可用于狂犬病疫苗中间产品的质量控制。     

絮状单位测定与小鼠体内中和试验法检测TAT效价的比较

目的为了更好地进行生产质量控制,快速准确地测定破伤风抗毒素(TAT)效价,以统计分析絮状单位测定法(体外法)和小鼠中和试验法(体内法)测定TAT效价的相关性。方法对2010—2013年破伤风抗毒素生产过程中的原料血浆、原液的絮状单位值与小鼠中和效价进行了统计分析和比较。结果体外法和体内法检测TAT原料血浆和原液效价的相关系数分别为r血浆=0.794 3,P0.001和r原液=0.901 6,P0.001,均呈显著性正相关。结论体外法可指导或替代体内法TAT效价测定应用于生产过程中间品的质量控制。     

马免疫血浆的稳定性研究

目的了解不同温度条件对马免疫血浆外观和效价的稳定性影响,为马免疫血浆的采集、分离、贮存、运输及抗毒素生产提供数据支持。方法将破伤风类毒素及肉毒A、B、E、F型类毒素制备的马免疫血浆,分别放置于2~8℃、20℃、37℃3种温度下,并分别于0、1、3、6、12个月取样,依据《中国药典》三部(2010版)的检测方法和标准,对样品进行外观检查及效价检测。结果破伤风及肉毒A、B、E、F型马免疫血浆在2~8℃条件下,放置12个月稳定性良好,外观及效价均符合《中国药典》三部(2010版)规定要求。20℃与37℃下放置的马免疫血浆随着时间的延长,外观会发生不同程度的浑浊,效价也均有不同程度的降低,低效价组比中、高效价组的效价下降明显,且温度越高效价降低幅度越大。结论马免疫血浆在2~8℃条件下质量稳定。     

培养基对海洋青霉菌抗真菌活性物质的影响

研究了培养基的配方、培养条件和培养时间对海洋青霉M－182菌株产生抗真菌活性物质（M－182A）的影响,以期获得高效价的M－182A。结果表明：用海水配制经改良的高氏1号培养基（高氏1号＋0.1%蛋白胨＋2％海带汁）,28℃培养96－108h,M－182A的相对效价最高。