高效率高纯度绿原酸制备工艺研究

建立从山银花中制备绿原酸标准品的方法,并提高绿原酸产率。通过正交试验优化传统水提法和碱水冷提法工艺,并对D101大孔树脂纯化条件、乙酸乙酯萃取次数、结晶溶剂进行优化。通过研究,最佳提取条件为:提取溶剂pH=10的碱水,提取时间1 h,料液比1∶30,提取率为7.2%;D101大孔树脂洗脱溶剂:10%乙醇洗脱液纯度最高,30%乙醇洗脱液得率最高;最佳萃取次数5次;最佳结晶溶剂:水饱和乙酸乙酯。本研究通过创新的提取和纯化条件,得到纯度98.7%的绿原酸,得率18.4 mg/g,纯度和得率都高于现有文献记载,且常温快速提取,能耗明显下降,适用于工业规模高纯度绿原酸生产。     

基于16S rRNA基因测序研究金银花和山银花对急性肺损伤大鼠肠道菌群的影响

目的研究金银花(忍冬)和山银花(灰毡毛忍冬和黄褐毛忍冬)对急性肺损伤(ALI)大鼠肠道菌群的影响。方法 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组、忍冬组、灰毡毛组和黄褐毛组,每组10只。灌胃给药5 d后,除正常组外其余组大鼠均腹腔注射LPS,建立ALI模型。检测大鼠血清和肺泡灌洗液(BALF)中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量,HE染色观察肺脏组织病理学变化,利用Illumina MiSeq测序平台对大鼠粪便样本进行16S rRNA基因测序。结果与正常组相比,模型组大鼠血清和BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量升高(均P0.05),组织切片显示肺组织结构发生改变,提示造模成功;与模型组相比,忍冬组和黄褐毛组大鼠血清和BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量降低(均P0.05),灰毡毛组对ALI改善不明显(P0.05)。Alpha多样性显示,与模型组比较,除灰毡毛组外均能下调急性炎症引起的菌群丰度和多样性的增加。利用LEfSe分析挖掘差异菌属,与正常组相比,模型组大鼠肠道志贺菌属、Turicibacter、变形杆菌属丰度增加,Adlercreutzia丰度减少。忍冬可降低变形杆菌属丰度,增加阿克曼菌属、双歧杆菌属、拟杆菌属、Adlercreutzia等的丰度;黄褐毛忍冬使脱硫弧菌属丰度减少,拟杆菌属、阿克曼菌属、瘤胃球菌属等丰度增加。由菌群与炎症因子的关联性分析看出,志贺菌属、脱硫弧菌属、梭菌属与IL-1β、IL-6和TNF-α的含量呈正相关,阿克曼菌属、瘤胃菌属、双歧杆菌属与IL-1β、IL-6和TNF-α的含量呈负相关。结论研究表明忍冬和黄褐毛忍冬可能通过调节肠道菌群结构,影响炎症因子水平而对急性肺损伤有一定的预防作用。     

山银花对小鼠肠道菌群失衡的调节作用

目的探讨山银花对于小鼠肠道菌群失衡的调节作用。方法应用头孢曲松钠灌胃的方法建立小鼠肠道菌群失衡模型。利用观察称量等方法观察小鼠临床表征的变化,以及盲肠指数和脾指数的变化。利用活菌计数法分析肠道优势菌群的变化趋势。结果 (1)与正常对照组相比,菌群失衡组盲肠指数增高(P<0.05);自然恢复组变化不明显;山银花组(5%、10%)与大豆低聚糖组相似,显著下降(P<0.05),呈恢复趋势。(2)菌群失衡组脾脏指数有下降趋势,自然恢复组无明显变化;山银花组(5%、10%)与大豆低聚糖组均有所上升,呈恢复趋势。(3)菌群失衡组厌氧菌被抑制,需氧菌大量繁殖,自然恢复组菌群种类和数量变化不明显,主要是需氧菌的恢复;山银花组(5%、10%)和大豆低聚糖组厌氧菌重新出现,菌群种类增多,尤其是双歧杆菌、乳杆菌、韦荣球菌和类杆菌的出现预示着菌群正在逐渐恢复正常。10%山银花高剂量组比5%山银花低剂量组恢复要好。结论山银花可以促进菌群失衡小鼠盲肠和脾脏大小的恢复,可以调节小鼠肠道菌群失衡,具有益生元功效。     

山银花油GC-MS及LC-MS的全成分表征及体外抗炎和抗氧化活性研究

山银花是一种有价值的药用资源,但其油的化学成分和生物活性尚未深入研究。本文通过气相色谱-质谱仪联用法(GC-MS)及超高效液相色谱-高分辨质谱联用(UHPLC-QE-MS)对超临界CO₂萃取法得到的山银花油进行系统的化学成分表征,并探讨其体外抗氧化及细胞抗炎能力等生物活性。GC-MS共鉴别出66种化合物,主要为脂肪酸类、甾醇类和烷烃类化合物。UHPLC-QE-MS在正负离子模式下分别鉴别出83和71种化合物,主要为萜类、黄酮类等化合物。抗氧化结果表明山银花油清除ABTS自由基能力呈良好的剂量依赖性,DPPH自由基的IC₅₀值为3.49 mg/mL。同时抗炎实验表明山银花油可显著抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)炎性因子IL-6(P<0.05)和NO(P<0.05)的释放,发挥抗炎作用。以上结果表明,山银花油化学成分复杂多样,是一种具有较优抗炎作用的天然活性来源,且在食品医药中有较好的开发和应用价值。     

基于高效液相指纹图谱及网络药理学预测分析山银花质量标志物

山银花具清热解毒、疏散风热功效,应用前景广阔。目前《中国药典》仅将绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙及川续断皂苷乙作为山银花质量评价指标,不能全面评价山银花质量。本研究建立了山银花HPLC指纹图谱,对29批山银花进行相似度评价,应用聚类分析和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)初步筛选出山银花8个潜在Q-Marker;通过网络药理学构建“成分-靶点-通路”网络图,进一步分析验证山银花潜在Q-Marker的有效性。本研究发现绿原酸、异绿原酸A、新绿原酸、獐芽菜苷、异绿原酸B、灰毡毛忍冬皂苷乙、咖啡酸、川续断皂苷乙可作为山银花质量标志物,其为较全面评价山银花药材质量提供了科学依据。     

山银花不同发育阶段花结构与绿原酸含量变化关系研究

利用HPLC测定了山银花不同发育阶段花中绿原酸的含量变化,同时采用荧光显微镜和石蜡制片法观察了花器官中绿原酸的分布部位及其在花发育过程中的结构变化,以探讨绿原酸含量变化与花结构间的相互关系。结果显示:绿原酸主要分布于萼筒和花冠筒的内、外表皮细胞及外表皮下的几层细胞中;在花发育过程中,当花蕾外观上呈绿色时含绿原酸细胞处于分化之中,而呈白色时则分化成熟,至花开放呈白色和黄色时则趋于衰亡;花中绿原酸含量在细胞分化早期较高,在细胞分化接近成熟时则开始急剧减少,至细胞趋于衰老时,绿原酸含量最低。这些结果说明,花中绿原酸含量的变化与花的发育过程密切相关;推测可能是花发育过程中的叶绿体变化直接影响了淀粉合成,进而对绿原酸含量积累产生了影响;本研靠结果为制定金银花药材的合理采收期标准提供了理论依据。     

小儿感冒茶的薄层鉴别和定量测定研究

目的为制定小儿感冒茶(山银花、板蓝根、重楼)的质量控制方法。方法用TCL鉴别山银花、板蓝根、重楼。用高效液相色谱法测定小儿感冒茶中绿原酸的含量。结果通过方法学考察,绿原酸检测浓度在0.244~1.952μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系,加样回收率为99.22%,RSD%=0.92(n=2)。结论实验应用方法简便准确、重现性好、精密度高。所建质量标准可用于小儿感冒茶的质量控制。