中华大蟾蜍水晶体快速剥离法

有关年龄结构的鉴别以水晶体干重为主要指标．并参考体长、胴体及生殖腺特征较为准确。笔者在采用此法鉴定年龄时参照有关资料,摸索出一套快速剥离中华大蟾蜍（Bufo bufo gargarizans）水晶体的方法。     

斯洛维尼亚池塘中大蟾蜍的交配模式

为了解大蟾蜍( Bufo bufo)的配对成功是否与身体大小有关,在蟾蜍产卵之前,我们在斯洛文尼亚捕捉和测量了2 224只成体样本。在这些捕获的个体中, 1 772只为雄性, 452只为雌性,其中355对处于抱对状态。雌性的体长(从吻端到泄殖腔的距离)一般比雄性稍长。无论雄性还是雌性,抱对者的体长均大于未抱对者。抱对的雄性和雌性的体长具有显著的正相关。我们所发现的大小匹配的交配模式,与从其它普通蟾蜍种群得到的结果一致[动物学报51 (3) : 513 -515 , 2005]。     

125I和65Zn在大蟾蜍体内的吸收与分布

利用同位素示踪法研究了不同引入途径的125I和65Zn在大蟾蜍体内的吸收与分布。无论采用注射还是灌喂的方法,蟾蜍对125I的残留动态差别不大,都可分为快清除期和平台期,0～2d为快清除期,3～7d为平台期,经过了快清除期之后,残留的125I约为起始量的8%,并维持到实验结束。注射了65Zn后,0～7d的吸收动态曲线有所起伏,但波动很小,其波动范围为102.4%～114.48%。表明大部分的65Zn仍留在体内,几乎没有排出体外。注射65Zn的转移并不明显。但灌喂65Zn的动态变化则大些,而且转移明显。其活度曲线出现阶段性下降,有两个下降期,第一个下降期为4h～3d,第二个下降期为5～7d。说明灌喂组对65Zn的转移比注射组的活跃,但在实验的第7d残留率仍在60%以上。     

中华大蟾蜍TAGLN2 cDNA的克隆与其组织分布

为研究蟾蜍(Bufo)基原的中药材中的多肽类有效成分,开展从日本蟾蜍(B.japonicus formosus)皮肤cDNA质粒文库中筛选蛋白编码基因的工作.由于后续拓展蟾蜍药用价值的研究中需要大量的实验材料,开始以中华大蟾蜍(B.gargarizans)皮肤第一链cDNA为模板,克隆其相关基因的工作.通过DNA聚合酶链式反应获得编码转胶蛋白-2(transgelin2,TAGLN2)的转录子(GenBank登录号为KF432856).该cDNA全长1 207 bp,其5′、3′端非翻译区域和开放阅读框分别为16 bp、597 bp和594 bp,编码由197个氨基酸残基组成的蛋白质,与日本蟾蜍的TAGLN2(GenBank登录号为AGQ03775.1)相比,仅一个氨基酸发生替换,与人的同源性为82%,与其他动物的同源性介于70%⁷5%.RT-PCR组织分布检测表明TAGLN2在所检测的中华大蟾蜍各器官中均有表达,在肺、肝和肾中表达量较多.这些研究结果为后续中华大蟾蜍TAGLN2的生物学功能研究以及相关药物研发提供基础数据.     

中国林蛙蝌蚪和大蟾蜍蝌蚪的最适温度、逃避温度及致死温度

报道了中国林蛙蝌蚪 (Ranachensinensis)和大蟾蜍蝌蚪 (Bufogargarizans)在不同驯化温度下的最适温度、逃避温度和致死温度的研究结果。将中国林蛙蝌蚪和大蟾蜍蝌蚪分别在 5、1 5和 2 5℃ 3个不同温度下驯养 3周 ,利用温度梯度装置观察记录 2种蝌蚪的最适温度、逃避温度和最高致死温度。结果表明 ,经过在 5、1 5和 2 5℃ 3个温度下的驯化 ,中国林蛙蝌蚪的最适温度范围分别为 1 3 . 5～ 1 8℃、2 0. 5～2 5℃和 2 3～ 2 7. 5℃ ;大蟾蜍蝌蚪的最适温度范围分别为 1 2～ 1 6 .5℃、2 1～ 2 5. 5℃和 2 2～ 2 6. 5℃。中国林蛙蝌蚪和大蟾蜍蝌蚪的最高致死温均在 3 7～ 3 8℃之间 ,最低致死温均为 0℃。驯化温度对最适温度影响显著 (P <0 .0 1 ) ,对致死温度则没有显著影响。驯化温度对中国林蛙蝌蚪和大蟾蜍蝌蚪的逃避温度产生的影响比最适温度的大。     

乙草胺对中华大蟾蜍(Bu fo bu fo gar garizans)早期胚胎发育的影响

用不同浓度的乙草胺分别对中华大蟾蜍 4个不同发育时期的早期胚胎作用 5小时 ,结果发现 ,不同浓度的乙草胺可以导致中华大蟾蜍早期胚胎不同程度的发育成原肠外突和畸胎。不同发育时期的中华大蟾蜍早期胚胎对乙草胺的敏感程度和耐受程度都有所不同 ,其中 ,原肠胚期的胚胎对乙草胺最为敏感。实验表明乙草胺对中华大蟾蜍早期胚胎发育具有明显的致畸致死效应。     

季节及人工低温对大蟾蜍肌组织ATP酶的影响研究

本文研究了大蟾蜍心肌和腓肠肌肌球蛋白钙激活ATP酶的活性。实验结果显示,大蟾蜍心肌和腓肠肌肌球蛋白钙激话ATP酶活性具有不同的季节变化规律。并且这种酶活性的季节变化不受人工低温环境因素的影响。此外,大蜍蟾心肌中ATP酶的活性始终高于腓肠肌的。上述酶活性的变化均具有一定的生理意义。     

中华大蟾蜍卵母细胞质膜存在钙依赖性的氯离子通道

本文采用双微电极电压钳方法研究了中华大蟾蜍卵母细胞内源性电压门控型离子通道的成分及其生理特性。卵母细胞去极化至 -30 mV 及更正电压时,有一持续的电压依赖性外向电流出现。钾离子通道拮抗剂四乙基氯化氨(tetraethy-lammonium chloride, TEA, 10 mmol/L)和 4- 氨基吡啶(4-aminopyridine, 4-AP, 10 mmol/L)协同作用时,该电流只能被抑制到最大电流幅度的(23.4±0.72)%。但是,上述浓度的TEA和4-AP 与氯离子通道拮抗剂5- 硝基-2, 3- 苯酚丙胺苯甲酸盐 (5-nitro-2,3-phenypropylamino benzoate, NPPB, 30 μmol/L)、无钙 Ringer 氏液或钙离子通道拮抗剂维拉帕米(40 μmol/L)协同作用时,可分别将此外向电流抑制到最大电流幅度的(2.1±0.08)%、(2.2±0.04)% 和(3.1±0.15)%。结果表明,中华大蟾蜍卵母细胞质膜上除有钾离子电流之外,还存在钙依赖性的氯离子电流。     

中华大蟾蜍输卵管促受精因子的实验分析

在孕酮作用厂,切除卵巢的中华大蟾蜍输卵管上皮细胞不仅能够使外源移植的卵母细胞在输卵管中正常运行,还保证卵母细胞正常受精。根据输卵管卷曲部分泌物的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,存在依赖孕酮的３３ｋＤ蛋白质。经兔抗３３ｋＤ蛋白抗体处理具输卵管分泌物的卵母细胞,受精率受到显著抑制·提示该蛋白有促受精活性。输卵管分泌物介入受精涉及复杂的多种因子。     

孔雀石绿对中华大蟾蜍蝌蚪的毒性研究

孔雀石绿(ＭａｌａｃｈｉｔｅＧｒｅｅｎ)是一种三苯甲烷染料,由于它有很强的毒性,多年来在水产养殖的疾病防治中经常使用:在鱼类养殖中使用015～02ｐｐｍ的浓度全池遍洒或用10ｐｐｍ的浓度浸洗15～30分钟来防治鱼类的水霉病等(郑曙明,1997)。同时用0002～0005ｐｐｍ孔雀石绿全池泼洒,或用02～05ｐｐｍ药浴2小时,或6～7ｐｐｍ药浴5～10分钟,也常用于防治蛙类蝌蚪的水霉病等(吴高升,1997)。孔雀绿直接进入水环境作为一种杀菌剂在水产养殖中使用多年,但对两栖类蝌蚪的影响末见报道,本文采用生物学上常用的实验动物中华大蟾蜍(Ｂｕｆｏｇａｒｇ…