恒河猴(Macaca mulatta)卵细胞采集及体外受精的研究

对13头成年母猴,用黄体酮 前列腺索(PGF_(2a))处理,诱发月经周期,并用三种不同的处理方案,注射外激性促性腺激素诱发等超数排卵。对171个大滤泡(直径≥4mm)实行外科手术采卵,滤泡穿刺吸卵共获147个卵细胞,平均每头猴采卵11.31±6.47个,卵细胞回收率为85.96％。精液用直肠电刺激法采集,精子经TALP培养基洗涤二次,并在含10％灭活猴血清的TALP液中,加入1mM CAMP和lmM咖啡因,预孵育6～3h。卵细胞在含10％灭活猴血清的TALP或Ham'sF-10培养基中作体外成熟的培养,经约4～12h孵育,卵细胞体外成热率为28.57％。成熟的卵细胞(n=42,中期Ⅱ)和已预孵育的精子一起12～24h,并有部分在前次输精后5～12h再次输精,在42～56h后有9个受精卵继续发育至2细胞期和桑椹期阶段,体外受精率为35.71％(15/42)。     

分离烟草胚囊的新方法及诱导卵细胞与助细胞原生质体的原位融合

用渗透压冲击和酶解相结合的技术,成功地分离出大量形态完整、结构清晰的烟草生活胚囊。此法用酶浓度低,操作时间短、例于纯化,易于分离胚囊细胞原生质体,为植物雌性细胞操作提供了一种较实用的技术。此外,通过整溶液渗透压,可有效地控制及诱导卵细胞与助细胞原生质体的原位融合。     

水稻卵细胞与合子的分离

水稻卵细胞与合子的分离韩红梅赵洁施华中杨弘远周嫦（武汉大学生命科学学院植物生殖生物学研究室武汉４３００７２）关键词水稻,卵细胞,合子,分离ＩＳＯＬＡＴＩＯＮＯＦＥＧＧＣＥＬＬＳＡＮＤＺＹＧＯＴＥＳＩＮＯＲＹＺＡＳＡＴＩＶＡＨＡＮＨｏｎｇＭｅｉＺ...     

被子植物双受精发现100年：回顾与展望

被子植物双受精发现１００年：回顾与展望＠胡适宜￥北京大学生命科学学院被子植物,双受精,精细胞,卵细胞被子植物双受精发现１００年：回顾与展望胡适宜（北京大学生命科学学院北京１００８７１）关键词被子植物,双受精,精细胞,卵细胞ＣＥＮＴＥＮＡＲＹＯＮＳ．Ｇ．Ｎ...     

卵细胞受精相关胞质钙离子波、钙离子震荡信号特征及其形成机制

胞质[Ca2 ]i震荡的动力学变化在哺乳动物早期胚胎发育中发挥重要作用。卵母细胞的成熟伴随间断的、快速的[Ca2 ]i震荡的时空表达;在受精过程中精子因子诱导的反复[Ca2 ]i震荡的振幅和持续时间是卵细胞最有效的激活信号,这种信号形成自然连续的受精[Ca2 ]i波,并以长时持续[Ca2 ]i震荡形式在受精卵空间传递并持续数小时,直至受精完成;受精卵内源性的Ca2 释放所引起的[Ca2 ]i震荡形成第一次卵裂信号,启动早期胚胎的发育。精子PLCζ和cPKCs是形成受精卵[Ca2 ]波、[Ca2 ]震荡的重要因素。     

蓝猪耳离体受精初试

用体内-体外方法分离了蓝猪耳精细胞。用酶解和解剖方法分离了其成熟卵细胞。分离的精、卵细胞用电融合介导尝试了体外诱导融合。在合适的渗透压（6％甘露醇）和合适的氯化钙（0．04％CaCl2·2H2O）溶液中,用交流电场为30～35V10-25s使精、卵细胞排队;用直流电场400～600V45-50μs65脉冲穿孔条件可诱导30％的精、卵细胞融合和70％以上的卵细胞之间的融合。尝试了人工合子的单细胞培养但未获成功。诱导蓝猪耳精、卵细胞融合的条件与玉米和水稻不同。     

重金属在鲫鱼卵巢的富集及对卵细胞的损伤效应

近些年来,随着国民经济的快速发展,环境和生态问题也日益凸显,其中水域环境受重金属的污染亦愈演愈烈,水生动物的生存受到严峻的挑战。在水环境中,各种重金属元素不但在水生动物的皮肤、肌肉、鳃和其他内脏器官中富集,而且在其赖以生息繁衍、绵延种群的     

雌核发育二倍体鲫鲤Dmc1基因的全长cDNA克隆及表达分析

Dmc1（disrupted meiotic cDNA）基因是一个在减数分裂前期Ⅰ表达的特异基因,其产物是减数分裂前期Ⅰ同源染色体配对所必需的。根据据酵母菌、小鼠以及人的DMC1中保守的氨基酸基序设计简并引物,PCR扩增克隆获得了第四代雌核发育二倍体鲫鲤（G4）Dmc1基因部分cDNA序列。在此基础上,通过RACE获得了G4Dmc1基因全长cDNA序列,长度为1369bp,其中开放阅读框为1029bp,编码含342个氨基酸的蛋白质。同时,系统进化分析表明,在进化过程中Dmc1基因在鱼类中保持着高度保守的进化特征。RT-PCR结果表明,Dmc1基因只在G4性腺中表达,在其他组织中不表达。通过实时荧光定量PCR,对Dmc1基因在G4和普通鲤鱼的早期卵巢的表达进行分析,发现G4表达比鲤鱼高。由此可见,雌核发育二倍体鲫鲤Dmc1基因也是减数分裂特异基因,而且其高表达暗示雌核发育二倍体鲫鲤具有正常的减数分裂过程并且其早期性腺存在着多倍体卵原细胞。     

果蝇卵子发生中独特表达的蛋白

运用单抗技术我们制备了六个单抗,其中四个分别识别在果蝇卵子发 生不同时间和空间表达的抗原。Ｂ２抗原最早出现,主要由包囊细胞和营养细胞合成。该抗原通过运输进入并定人闰在卵后区。Ｆ９抗原随后出现在卵细胞的后区。继而Ｅ８抗原表达并定位在卵细胞膜上。     

受精前后烟草卵细胞内玉米素和三类酸性植物激素分布的免疫金电镜观察

用胶体免疫金电镜技术观察了受精前后烟草（Nicotianatabacumvarmacrophylla）卵细胞内玉米素（t－Z）、GA7与GA4、（＋）ABA与IAA分布的变化。受精前卵细胞内有大量t－Z,主要位于细胞核、内质网与线粒体上;与卵细胞相邻的助细胞合点端及中央细胞珠孔端亦有较多t-Z。受精后,合子与宿存助细胞t－z显著减少,正加厚的合子细胞壁中有t－Z分布。未受精卵细胞内GA7与GA4及（＋）ABA减少,IAA更少。合子内GA7与GA4及（＋）ABA略有增加,IAA仍然很少。初步讨论了上述植物激素与受精作用的关系。