赭曲霉11α羟化酶的克隆表达及关键氨基酸位点分析

11α,17α-双羟基黄体酮是甾体激素类药物的重要中间体,工业上主要利用霉菌对17α-羟基黄体酮的11α羟化反应制备。对赭曲霉的11α羟化酶及其关键氨基酸位点展开研究,为深入解析酶的催化机理提供基础数据。利用底物转化实验探究了10个羟化反应常用霉菌对17α-羟基黄体酮的转化能力,考察了赭曲霉来源的11α羟化酶CYP68J5在不同表达系统中的活性,借助结构预测、分子对接和定点突变等手段对CYP68J5的关键氨基酸位点进行解析。结果表明,赭曲霉的转化能力最强,转化时间60 h的摩尔产率达到最大值,为78.55%;其羟化酶CYP68J5在酿酒酵母中的表达活性最高;位于底物结合口袋附近的D118、F216、M488是CYP68J5的关键氨基酸位点,这些位点在维持酶的结构稳定性上发挥重要作用,是后续分子改造的潜在重要靶点。     

药物对病毒感染培养心肌细胞Ca~（2＋）内流及CVB_3－RNA复制的影响

应用放射性同位素￣（４５）Ｃａ￣（２＋）示踪技术及光敏生物素标记ｃＤＮＡ探针杂交方法,观察了维拉帕米、黄芪、地塞米松等药物对感染柯萨奇Ｂ＿３病毒（ＣＶＢ＿３）的大鼠培养心肌细胞Ｃａ￣（２＋）内流及细胞中ＣＶＢ＿３－ＲＮＡ复制的作用。结果发现：在病毒感染４８ｈ,上述三药均可显著减少感染细胞及正常对照的心肌Ｃａ￣（２＋）内流（Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５）;若在病毒感染后即加入上述药物,经４８ｈ培养后,黄芪组细胞中的ＣＶＢ＿３－ＲＮＡ含量显著少于病毒对照组（Ｐ＜０．００１）,维拉帕米则显著增加（Ｐ＜０．０１）．而地塞米松对其无影响。提示黄芪与地塞米松具有一种与维拉帕米相似的减少病毒感染心肌Ｃａ￣（２＋）内流的作用,有可能减轻感染细胞的继发性Ｃａ￣（２＋）损伤;但三种药物对感染细胞中病毒核酸的复制有不同作用,可作为临床治疗病毒性心肌炎时的参考。     

脱硫创新霉素对E.coli B的抗菌作用和抗菌原发作用

<正> 脱硫创新霉素是我所合成室用创新霉素进行脱硫反应制备的一个创新霉素衍生物,其分子结构为β—甲基吲哚丙酸。脱硫创新霉素虽然不具有创新霉素的噻喃环,但是实验结果说明:1.脱硫创新霉素对E.colib的抗菌作用与创新霉素相似。2.色氨酸能够恢复脱硫创新霉素对E.coli B的生长抑制作用和脱硫创新霉素对E.coli BT(Trp~-)的生长无抑制作用。这说明脱硫创新霉素的抗菌原发作用也和创新霉素一样是抑制色氨酸的生物合成。     

过碘酸钠氧化辣根过氧化物酶(HRP)中的若干问题及高效果的标记方法

本文研究了过碘酸钠氧化HRP的某些条件。戊二醛和磷酸盐对酶有一定的影响,而低浓度甲醛和醋酸盐缓冲液(HAcB)则无明显影响。氧化的最适pH在5.6左右。过碘酸钠氧化酶的适宜浓度在0.06～0.015M之间。氧化时间为10～30分钟,过长则影响结合物效价。讨论了加入乙二醇的必要性。醛化的HRP在pH9左右与抗体结合作用的适宜时间为16～24小时,过长则影响酶与抗体的活性,过短则结合不够完全。封闭结合物上多余醛基的KBH_4适宜量为0.1～0.2mg/mg酶。本法标记抗体、抗原和葡萄球菌A蛋白的效果均较好,方法简易,标记效果取决于酶是否能与抗体和抗原相结合,以及标记过程中酶和抗体活性是否受影响。     

福建永安魏坊发现奥陶纪的笔石

1975年,我系地质专业教师在野外实习准备过程中,于永安县大湖公社魏坊村车站东南150米公路边基岩中发现笔石化石,经笔者鉴定为Didymograptus aff.hirundo Salter,Clima-cograptus sp.。化石产地附近的岩层,主要为一套灰至深灰色(微带暗绿色)千枚状泥质板岩,具微层理,夹灰绿色(风化后呈黄灰、褐黄色)变质中细粒砂岩,沉积韵律清楚。从区域地质情况看,应属罗峰溪群中部。罗峰溪群标准地点在永安县安     

烟草花叶病毒几个分离物的比较研究

本文从血清学关系、外壳蛋白亚基分子量、氨基酸组成和放射性碘标记酶解肽谱等方面比较研究了广州和上海地区的烟草、茄子、辣椒、番茄上分离到的烟草花叶病毒几个分离株。试验结果指出,它们与烟草花叶病毒普通株(TMV_c),长叶车前花叶病上海株(RMV_gh)都有所不同。并对放射性碘标记酶解肽谱在病毒诊断鉴定上的应用进行了讨论。     

利用扫描电镜对Siphonophyllia骨骼微细构造的研究*

一、前言长期以来,对四射珊瑚骨骼微细构造(尤其是有无片状骨素)的认识及其分类学的意义都存在分歧意见。近年来,国际上扫描电镜在这个领域的应用大有进展,但仅限于泥盆纪和二叠纪的少数属。作者在参加有关珊瑚的国家自然科学基金研究项目中,在系统整理石炭纪四射珊瑚资料的基础上,对Caniniidae等14科的代表属采用了电镜研究。     

福建晚石炭世—早二叠世早期的四射珊瑚动物群*

福建西部龙岩、宁化、顺昌等地广泛出露的晚石炭世至早二叠世早期海相碳酸盐地层,富含珊瑚、(竹蜓)类等化石,其中四射珊瑚动物群迄今无专文报道。1984至1986年,笔者曾先后数次前往龙岩经洋和宁化湖村等地,详细测制了6条中甲阶及马平阶剖面,系统采集了大量四射珊瑚和(竹蜓)类等化石。经鉴定,四射珊瑚共有38属83种(或亚种),其中2新属10新种。根据它们在地层中的分布规律,笔者建立了3个组合,自下而上依序为:1).Nephelophyllum组合,2).Anfractophyllum-Kepingophyllum组合,3).Wentzellophyllum volzi组合。     

冬虫夏草的抗衰活性

以冬虫夏草提取物为研究对象,通过自由基清除试验及弹性蛋白酶活性抑制试验来考察冬虫夏草在生化水平上的抗衰活性,以人永生化表皮细胞(HaCaT)三磷酸腺苷(ATP)和透明质酸(HA)的合成试验来考察冬虫夏草在细胞水平上的抗衰活性。结果表明,冬虫夏草能有效清除DPPH和羟自由基,抑制弹性蛋白酶活力,促进人永生化表皮细胞表达透明质酸和三磷酸腺苷,说明冬虫夏草具有一定的抗衰活性。     

多顺反子质粒重编程人脂肪干细胞为诱导多能干细胞

为建立多顺反子质粒载体转染技术获得人脂肪干细胞(adipose stem cells,ASCs)来源的诱导多能干细胞(induced pluripotency stem cells,iPSCs),应用2A元件连接Oct4/Sox2/KLF4/c-Myc四因子基因,构建为单一开放阅读框的多顺反子质粒载体．使用该质粒对ASCs进行转染及重编程为iPSC．采用形态学观察、特异性抗体免疫荧光鉴定、体外拟胚体诱导分化和体内畸胎瘤形成等方法进行鉴定．结果显示,ASCs成功重编程为iPSCs,具有与人胚胎干细胞相似的形态学及多向分化潜能;通过拟胚体和畸胎瘤实验证实iPSCs能在体内外分化成三胚层细胞;DNA印迹实验显示质粒载体序列未整合至iPSCs基因组中．因此,通过多顺反子质粒载体重编程技术成功建立的人iPSCs具有多向分化潜能,可减免发生插入突变和免疫排斥问题,为iPSCs在遗传性或退行性疾病的治疗奠定了实验基础．