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抗菌肽Magainin基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达 总被引：20，自引：0，他引：20
用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽magainin基因片段 ,合成片段拼接后 ,与pUC19重组 ,获得magainin基因 .Magainin基因与酵母表达载体pPIC3重组 ,构建胞内表达载体pPIC3 Mag ,电击法转化GS115宿主菌 ,经表型筛选和PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合入Pichiapastoris酵母基因组中 .阳性克隆用甲醇诱导表达 ,用免疫印迹法确定了产物的正确性 .利用琼脂孔穴扩散法和液相测定法证明了重组magainin具有抗菌活性 相似文献
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FHC和Bim参与细胞铁代谢和由ROS引起的细胞凋亡过程.但是其具体的分子机制还未阐明.用pLexA-Bim L作为诱饵,筛选了一个基于pBD42AD的胎脑cDNA文库,发现FHC是一个新的Bim相互作用蛋白.酵母杂交实验发现Bim的相互作用片段为BH3功能域.上述相互作用进一步用免疫共沉淀和荧光共定位得以证实.在HEK293细胞过表达FHC可以减轻由Bim过表达或ROS所引起的细胞凋亡,而用FHC特异性siRNA调低FHC表达,则增加Bim过表达或ROS引起的细胞凋亡.研究首次报道了Bim和FHC的相互作用以及对细胞凋亡和氧化应激的影响,为进一步阐明FHC和Bim参与凋亡和ROS反应提供了新的线索. 相似文献
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