贫铀经口慢性染毒对小鼠肠道菌群多样性的影响

目的观察贫铀经口慢性染毒对小鼠肠道菌群多样性的影响。方法通过将不同剂量的贫铀混入饲料中饲养小鼠,以小鼠肝脏和肾脏铀含量作为判断贫铀在动物体内蓄积的指标,建立贫铀经121慢性染毒小鼠模型,观察各组小鼠之间的体重变化,对各组小鼠进行基于细菌16SrRNAV6－V8区的PCR－DGGE分析。结果食入贫铀的各组小鼠肝脏和肾脏铀含量显著高于对照组（P〈0．05）,各组小鼠体重差异无统计学意义（P〉0．05）,各组小鼠V6－V8IXDGGE图谱的丰富度和多样性指数差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论贫铀经日慢性染毒对小鼠肠道菌群多样性无显著影响。     

Red/ET 同源重组介导细菌人工染色体的快速修饰

随着基因组测序工程的实施与完成,如何对包含完整基因信息的特定细菌人工染色体 (BAC) 进行有目的修饰,已成为功能基因组学研究的一个重要环节 . 应用新近优化的 Red/ET 同源重组技术对目标 BAC 进行修饰,以 pSC101-BAD-gbaA 为依托质粒,采用 rpsL-neo 为正 / 反向筛选系统,可以快速、高效地对 BAC 进行剪切、插入、替换等操作,其中能够进行抗性筛选的一步 BAC 修饰只需一周时间,以插入非抗性标记基因 Cre 为代表的两步 BAC 修饰在两周内即可完成 . 通过阿拉伯多糖诱导调控和简单地变化培养温度,能使 pSC101-BAD-gbaA 依托质粒在发挥完 Red/ET 同源重组作用后自然消失,最终获得完整而纯净的修饰后 BAC ,为加快功能基因组学研究提供了一个可靠的实验平台 .     

大肠杆菌表达重组人生长激素的纯化

目的 :获得具有生物学活性的重组人生长激素 (rhGH)。方法 :PBV -GH/DH5α菌体经超声破菌、反复洗涤后获得包涵体。将包涵体变性、复性 ,用硫酸铵盐析 ,离子交换层析和凝胶层析进行纯化。产物经SDS -PAGE、HPLC、N末端 15个氨基酸序列检测验证。结果 :终产物rhGH纯度达 98.2 % ,比活性大于 3.0IU/mg。分子量为 2 2kDa ,N末端氨基酸序列与DNA序列推导的氨基酸序列完全一致。结论 :从自构建的PBV -GH/DH5α工程菌中获得高纯度、高活性重组人生长激素。其纯化工艺为中试生产提供可靠依据。     

应激大鼠肾胞液[~3H]醛固酮结合活性的变化及调节机制的初步研究

为探讨烫伤引起病理性应激时大鼠肾胞液醛固酮结合活性的变化及可能的调节机制 ,以 [3H] 醛固酮为配体 ,用放射性配基 受体结合分析法测定了正常对照组、轻度烫伤组和重度烫伤组大鼠肾胞液醛固酮结合活性的结合容量 (Rt)和表观解离常数 (Kd) ;采用体内注射TNF α、IL 1β中和抗体和α 促黑色素细胞刺激激素 (α melanocyte stimulatinghormone,α MSH)和合成肽KPV (Ac D Lys L Pro D Val)等措施调节其改变。结果发现 ,肾胞液存在两种不同结合容量、不同亲和力的醛固酮结合活性受体。与正常对照组的Rt (Rt1:4 1 6± 7 2fmol/mgpro ;Rt2 :3 17 6± 70 0fmol/mgpro)相比 ,轻烫组的Rt(Rt1:4 1 4± 5 0fmol/mgpro ;Rt2 :3 14 8± 4 5 7fmol/mgpro)无显著差异 (P >0 0 5 ;P >0 0 5 ) ;重烫组的Rt(Rt1:2 2 4± 5 4fmol/mgpro ;Rt2 :196 3± 3 2 5fmol/mgpro)则显著下降(P <0 0 1;P <0 0 1)。体内注射TNF α与IL 1β中和抗体、α MSH及KPV均能明显提高重烫组Rt值。结果提示 ,重度烫伤大鼠肾胞浆醛固酮结合活性降低 ,TNF α、IL 1β中和抗体、α MSH及KPV均可防止重度烫伤引起病理性应激时醛固酮结合活性降低。     

全基因组基因表达频谱研究的新方法—SAGE和IPGI

SAGE和IPGI是新近发展起来的用于全基因组基因表达频谱分析和寻找差异基因的新技术,可以同时反映正常或异常等不同功能状态下细胞整个基因组基因表达的全貌,特别是对低丰度表达基因有较高的检测结果,而因而具有重要的应用价值。本文简介SAGE和IPGI技术的基本原理、操作方法及其应用前景。     

MiRNA 与皮肤伤口愈合

MiRNA是真核生物体内约由22个核苷酸组成的内源性非编码单链RNA,可调节基因转录。它通过其5’非翻译区(UTR)与目标mRNA的3’端非翻译区相结合,从而抑制后者的转录后翻译和降解,进而调节一系列生物学过程,包括生物体生长、发育和疾病等。研究表明,miRNA在干细胞分化、肿瘤形成、血管发生、内耳形成等过程中均发挥重要作用,已成为调节生物学过程的核心因子。伤口愈合是一个与多种类型细胞、细胞因子及细胞外基质相关的过程,它受机体多种因素紧密调控。伤口愈合过程一般被分为三个阶段:炎症反应期,肉芽生长期和组织重建期。已有大量证据证实miRNA在皮肤创伤愈合过程中发挥重要作用,并且miRNA在不同的愈合阶段发挥不同的作用。本文就miRNA在皮肤形态、胎儿无痕愈合及成人伤口愈合各环节中的作用做一综述。     

防御素基因工程制备研究进展

本文综述了防御素在重组表达与制备方面的主要进展, 包括在原核细胞表达时宿主菌、载体、表达策略的选择, 在酵母等真核细胞中进行重组表达的优缺点, 以及重组防御素纯化研究的现状。本文还概括了当前防御素研发与临床应用面临的主要问题, 将来的研究方向和开发前景。     

基因捕获技术的现状及应用

随着越来越多生物基因组测序的完成,生物医学研究已进入后基因组时代。基因捕获技术由于其在克隆、发现新基因及揭示基因功能方面具有独特的优点,已成为功能基因组时代研究的有力工具,在生物医学研究各个领域的应用日趋广泛。主要对基因捕获技术的原理、分类、一般操作流程、优缺点及基因捕获在发育生物学、新基因鉴定、干细胞分化、肿瘤和生殖医学研究方面的应用作一综述,为相关研究者提供借鉴。     

干扰素诱导蛋白P56与糖皮质激素受体的相互作用及对其转录活性的影响

糖皮质激素受体（GR）在严重创伤早期及全身性炎症反应中具有重要作用,为寻找与GR相互作用的新的蛋白质,以期调节GR的功能活性,应用酵母双杂交技术,以糖皮质激素受体配体结合区（GR-LBD）为诱饵蛋白,在人骨髓cDNA文库中筛选到42个阳性克隆.测序结果表明,其中一个克隆为干扰素诱导蛋白P56的大部分编码序列（221～1 642 bp,编码第53位至第478位氨基酸）.利用酵母双杂交实验再次验证P56与GR具有结合作用.并用PCR方法从酵母质粒中扩增出P56片段,进行GST-P56原核融合蛋白表达与纯化,及真核表达与免疫共沉淀.蛋白质结合实验表明,P56与GR-LBD在体内外有结合作用.CAT报告基因检测表明P56抑制GR的转录激活能力.     

由EST到全长cDNA--RACE及相关技术进展

由EST出发获得全长cDNA是基因组和功能基因组研究的重要内容之一,cDNA末端扩增技术（RACE）是实现此目的的重要方法。本文对RACE的基本原理及其改进,尤其是AM－MV酶TS（template switch)功能的应用带来的技术革新进行了综述。