研究报告：骨形态发生蛋白9通过p38激酶途径调控间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化

前期研究发现骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)具有较强的诱导间充质干细胞成骨分化的能力.为进一步揭示其诱导和调控间充质干细胞成骨分化的机理,利用BMP9重组腺病毒感染间充质干细胞C3H10T1/2,通过体外细胞实验和体内动物实验,初步分析BMP9是否可通过p38激酶途径调控间充质干细胞成骨分化.结果发现,BMP9可以通过促进p38激酶磷酸化而导致其活化,p38抑制剂SB203580可抑制由BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达和钙盐沉积,而且利用抑制剂SB203580抑制p38激酶活性后,BMP9诱导的Smad经典途径的激活也相应受到抑制,RNA干扰导致p38基因沉默同样也可抑制BMP9诱导的ALP活性、OPN表达、钙盐沉积以及裸鼠皮下异位成骨.因此,BMP9可通过活化p38激酶途径调控间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化.     

肺炎链球菌ΔA146Ply蛋白抵抗鼻咽部感染的研究

本研究旨在研究无佐剂添加的肺炎链球菌ΔA146Ply蛋白的免疫保护作用。利用大肠杆菌原核表达系统成功表达ΔA146Ply后用Ni2+柱纯化并去除内毒素。将ΔA146Ply蛋白刺激小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDCs)24 h后收集细胞上清,检测得细胞因子IL-6、TNF-α、IL-12p70分泌显著增加。以无佐剂添加的ΔA146Ply、加Al佐剂的ΔA146Ply及PBS分别免疫小鼠后,采用ELISA试剂盒检测血清特异性抗体效价,结果显示含ΔA146Ply的免疫组小鼠的抗体效价较PBS组显著升高,而加Al佐剂组与无Al佐剂组之间无显著差异;取脾细胞再刺激后收集细胞上清,测得含ΔA146Ply的免疫组小鼠的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17A分泌量较PBS免疫组显著增高,加Al佐剂的ΔA146Ply免疫组的IFN-γ和IL-17A分泌量较无Al佐剂的ΔA146Ply免疫组显著增高,但IL-4的分泌二者无显著差异。末次免疫后鼻腔攻毒肺炎链球菌CMCC31693(19F),3 d后铺板计细菌载量,结果显示无佐剂ΔA146Ply免疫组小鼠的鼻咽部及肺部定植细菌较PBS组显著减少,而加Al佐剂组只有肺部定植细菌的减少且与无佐剂ΔA146Ply免疫组无差异。HE染色和炎症细胞因子检测结果显示,含ΔA146Ply免疫组的小鼠肺部炎症反应都较PBS组显著减轻。这些结果显示ΔA146Ply无需Al佐剂辅助即可诱导小鼠产生较强的免疫效应,有效抵抗肺炎链球菌的鼻咽部感染。     

骨形态发生蛋白9通过JNKs激酶途径调控间充质干细胞成骨分化

前期研究发现骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)除了通过经典Smad途径外,也可通过丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)中的p38激酶途径调控间充质干细胞成骨分化．本研究继续探讨MAPKs的重要成员c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNKs)对于BMP9诱导间充质干细胞成骨分化的调控作用．利用BMP9重组腺病毒感染间充质干细胞,通过体外细胞实验和体内动物实验,初步分析BMP9是否可通过JNKs激酶途径调控间充质干细胞成骨分化．结果表明：BMP9可通过促进JNKs激酶磷酸化而导致其活化;JNKs抑制剂SP600125可抑制由BMP9诱导的间充质干细胞的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、骨桥蛋白(osteocpontin,OPN)和骨钙素(osteocalcin,OCN)表达以及钙盐沉积;利用抑制剂SP600125抑制JNKs激酶活性后,BMP9诱导Runx2的表达和转录活性,以及Smad经典途径的激活也相应受到抑制;RNA干扰导致JNKs基因沉默同样也可抑制BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化以及裸鼠皮下异位成骨．因此,BMP9可通过活化JNKs激酶途径,从而调控间充质干细胞成骨分化．     

骨形态发生蛋白9通过p38激酶途径调控间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化

前期研究发现骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)具有较强的诱导间充质干细胞成骨分化的能力.为进一步揭示其诱导和调控间充质干细胞成骨分化的机理,利用BMP9重组腺病毒感染间充质干细胞C3H10T1/2,通过体外细胞实验和体内动物实验,初步分析BMP9是否可通过p38激酶途径调控间充质干细胞成骨分化.结果发现,BMP9可以通过促进p38激酶磷酸化而导致其活化,p38抑制剂SB203580可抑制由BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达和钙盐沉积,而且利用抑制剂SB203580抑制p38激酶活性后,BMP9诱导的Smad经典途径的激活也相应受到抑制,RNA干扰导致p38基因沉默同样也可抑制BMP9诱导的ALP活性、OPN表达、钙盐沉积以及裸鼠皮下异位成骨.因此,BMP9可通过活化p38激酶途径调控间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化.