哺乳动物体细胞核移植研究进展

体细胞核移植技术已经在基础研究领域与产业化应用领域体现出了重要的价值,因而体细胞核移植技术及其相关研究已经成为了生物领域的持续性研究热点,但是围绕体细胞核移植技术仍然存在许多质疑,其中最主要的就是体细胞核移植的效率较低。尽管如此,体细胞核移植研究仍然在近年来取得了令人瞩目的成就,包括小鼠与恒河猴核移植胚胎干细胞系的建立。该文就体细胞核移植的研究历史与进展进行简要的论述,同时针对体细胞核移植研究中的细胞重编程与治疗性克隆研究中的发展与问题进行剖析,希望能够积极推动治疗性克隆的研究进展,加速核移植与干细胞技术在产业化领域中的应用。     

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)CH-la株糖蛋白基因的遗传变异分析

新近发现的猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)是单股RNA病毒,属于不久前成立的动脉炎病毒科.为了比较国内分离的CH-la株与国外毒株的分子遗传学关系,扩增并克隆了PRRSV CH-la株糖蛋白基因ORF2～5,测定了其核苷酸序列.用序列分析软件分析了其编码产物的分子量、等电点、疏水性、抗原性和有关位点,并与国外毒株进行了序列比较和系统发育进化分析.结果表明:CH-la株与VR-2332株尽管密切相关,但二者之间也有较大的变异,且ORF3和ORF4重叠区存在一个高变区.这提示CH-la株和VR-2332株可能是北美洲型中的两个不同亚型.     

人胚胎干细胞来源的视网膜色素上皮细胞质量控制研究

人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPEs)移植是目前被认为最有希望延缓或治愈视网膜变性疾病的治疗策略,而由人胚胎干细胞诱导分化来源的RPE细胞(human embryonic stem cells-derived RPE,hESC-RPEs)可为RPEs移植提供数量充足、质量可控的细胞来源。为确保hESC-RPEs临床应用的安全性、有效性和稳定性,这类细胞在临床前研究阶段需满足明确的细胞鉴别特征、RPEs基本生物学特征、微生物学安全性、生物学安全性及生物学有效性的总体质量要求,而每一类总体质量要求是由多个关键质量属性要求组成。考虑到人ESCs来源因素,hESC-RPEs细胞生物学安全性需考虑终未分化的RPEs中的hESCs残留问题。现就hESC-RPEs细胞总体质量要求及各相关质量属性进行讨论,目的是帮助在我国建立临床研究用hESC-RPEs质量控制评价体系,和探索适合于所有hESCs诱导分化细胞临床前阶段质量评价的基本方法。     

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)E蛋白基因真核表达质粒的构建

新近发现的ＰＲＲＳＶ是单股ＲＮＡ病毒,属于不久前成立的动脉炎病毒科。其基因组包括８个开放阅读框架（ＯＲＦ）,其中ＯＲＦ５编码糖基化的囊膜（Ｅ）蛋白,是病毒的主要免疫保护性抗原之一。为了研制ＰＲＲＳ基因疫苗,扩增并克隆了ＰＲＲＳＶ－１ａ株ＯＲＦ５,并将其亚克隆至真核表达载体ｐＣＲ３－Ｕｎｉ的ＣＭＶ启动子下游,构建成真核表达质粒,为ＰＲＲＳ基因免疫奠定基础     

马传染性贫血强/弱毒嵌合病毒的体外构建

马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)引起马传染性贫血(简称马传贫),导致马持续性感染和反复病毒血症[1].EIAV与人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)同属反转录病毒科慢病毒属,二者有很多相似的特性[2].在反转录病毒前病毒基因组两端含有长末端重复序列(long terminal repeat,LTR).LTR含有真核启动子,其中含有病毒转录调控顺式作用位点,病毒编码的反式作用因子与其结合后可以反式激活基因的表达,对病毒基因的表达和其它生命活动起重要调控作用[3,4].因此,LTR序列的变异可能会引起病毒转录和复制方式的改变,进而引起其细胞嗜性和致病性的改变[5,6].为了探讨LTR在EIAV病毒复制和转录过程中的作用,并进一步研究EIAV的致病和免疫机制,用EIAV强毒L株LTR置换了以前构建的EIAV DLA(弱毒)感染性分子克隆中的LTR,构建了马传贫强/弱毒嵌合分子克隆,并获得了具有感染性的强/弱毒嵌合病毒.     

Proviral genomic sequence analysis of Chinese donkey leukocyte attenuated equine infectious anemia virus vaccine and its parental virus strain Liaoning

Proviral DNA was extracted from donkey leukocyte infected with Chinese donkey leukocyte attenuated equine infectious anemia virus (DLA-EIAV), and peripheral blood lymphocytes (PBL) from a horse infected with the virulent EIAV strain Liaoning (EIAV L). The entire proviral DNA from both viruses was cloned and sequenced. The lengths of complete genomic sequences of DLA-EIAV and EIAV L provirus were 8266 bp and 8235 bp, respectively. Sequence comparison indicated that DLA-EIAV shares 97.0% and 97.5% in sequence homology with EIAV L and donkey-adapted EIAV (DA-EIAV), respectively. Lots of variations occurred in long terminal repeat (LTR, consisting of U3, R, U5), ORF S2, and envregions between DLA-EIAV and EIAV L. The nucleotide sequence differences of the two viruses in U3, R, U5, ORF S2, and env are 13.2%, 7.5%, 5.1%, 3.9%, and 2.7%, respectively, and predicted amino acid sequence differences in env and S2 coding regions are 4.4% and 8.8%, respectively. Six conserved regions are characterized in Gp90. There     

马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株及其亲本强毒株前病毒核苷酸序列比较分析

以马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株(DLA-EIAV)感染细胞总DNA及其亲本强毒L株感染马外周血液白细胞中DNA为模板, 应用PCR方法分段扩增出DLA-EIAV和L株前病毒, 并将各段扩增产物克隆后进行测序. 根据国外发表的马传染性贫血病毒核苷酸序列, 推导出DLA-EIAV和L株全基因组核苷酸序列, 经比较分析, DLA-EIAV株前病毒基因组全长8266个碱基, EIAV L株前病毒基因组共有8235个碱基. DLA-EIAV株与其亲本L株和DA株核苷酸序列相比, 同源率分别为97.0%和 97.5%. DLA-EIAV株和L株相比, 长末端重复序列(LTR, 由U3, R, U5组成)、编码囊膜糖蛋白的基因env及ORF S2变异率很高, U3, R, U5, env及ORF S2核苷酸序列差异率分别达13.2%, 7.5%, 5.1%, 2.7%和3.9%, env基因及ORF S2推导的氨基酸序列差异率分别为4.4%和8.8%. 从EIAV高度变异的env各个毒株中鉴定出6个氨基酸序列保守区, 并发现中国的EIAV强、弱毒增强子区有转录因子GATA结合一致序列. 序列比较发现EIAV L比DLA株多2个N连接糖化位点. DLA-EIAV, L和DA株在ENH的主要差别是, DLA-EIAV株含有转录因子bHLH作用一致序列. 另外, DLA-EIAV株TAR茎的起始部位发生了改变, 形成一个尿嘧啶小泡. 这些变异对EIAV毒力的影响有待进一步研究.     

利用微载体悬浮培养人脐带间充质干细胞

随着干细胞研究的不断深入,干细胞功能分化研究和临床应用转化的需求日益提升。人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs)来源广泛,不仅自我更新能力强、能够分化成多种类型的成体细胞,而且其自身具有免疫调节能力,不易引发免疫排斥反应,在干细胞功能分化研究和临床应用中具有巨大应用前景和应用潜力。目前,传统的细胞培养方式培养效率低、细胞活性较差,不能满足日益增长的研究和应用需求。本研究利用微载体结合旋转瓶的悬浮培养方法,通过优化细胞接种量及转速等影响因素,快速获得大量高质量的人脐带间充质干细胞。经悬浮培养总细胞量可高达到7×10 ⁸个细胞/L,而且细胞活性较高,MSC 特异性标记物表达良好,在恢复平面培养后仍能维持MSC的正常细胞形态和增殖能力。高效脐带间充质干细胞悬浮培养体系的初步建立,为未来的干细胞功能分化研究和临床应用奠定了基础。     

基因组印记对个体发育及动物克隆的影响

介绍了印记基因对个体发育及动物克隆的深远影响。通过分析有关印记基因起源的几种不同假说,展现印记基因的作用方式与功能;探讨印记基因特殊的形成机制,有助于深入理解这一表观遗传修饰调节对动物个体发育和动物克隆的影响。印记基因对哺乳动物胎儿的发育具有十分重要的作用,对个体的生长与行为也有一定影响,特别是对胎盘发育极为重要。一旦表达失控就会导致多种疾病发生,大量证据表明许多肿瘤的发生都与其相应基因组印记丢失有关。在当前动物克隆研究中,克隆动物成活率低,具有大量表型异常及不同程度缺陷,而这些异常与许多印记基因表达失调导致的症状非常相似。因此,克隆动物的印记基因表达异常可能正是制约克隆效率提高的关键因素。