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6-羟多巴胺纹状体内注射制作大鼠帕金森病模型的研究 总被引:11,自引:0,他引:11
目的 为拓宽6-OHDA损毁多巴胺能神经元所制备大鼠帕金森病模型的应用范围,采用多位点纹状体内注入6-OHDA的途径来制备模型。方法 研究用SD大鼠,两个针道内四点定位注射,每点注射3μg/μ16-OHDA3μl。结果 术后两周出现缓慢旋转,4周旋转行为达到7转/分并保持稳定;形态学染色可见损毁1周后注射侧黑质酪氨酸羟化酶免疫组化阳性细胞减少20%,2周后减少38%,3~4周减少70%以上,6周后损伤趋缓。高效液相-电化学法活体检测纹状体内多巴胺的代谢产物3、4-二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA),发现注射侧和非注射侧相比含量分别下降98.33%和96.05%;组织匀浆检测损毁侧黑质多巴胺含量下降了73%以上,3、4-二羟基苯乙酸(DOPAC)含量下降60%。结论 纹状体内注射6-OHDA能够制备帕金森病大鼠模型。 相似文献
2.
为制备用地高辛精(Digoxigenin,Dig)标记的酶氨酸羟化酶(TyrosineHydroxylase,TH)RNA探针,本研究用分子生物学技术重组质粒PGEMTHI,即分别将携带T7和Sp6启动子的PGEM-3zf质粒和携带TH基因的PKSTH质粒用限制性内切酶消化并行分离纯化,得到带T7和sp6启动子的DNA片段和TH基因片段;经T4DNA连接酶连接后转入大肠杆菌,得到pGEMTH1重组克隆。经小量提取质粒井用酶切分析检测,证实其确有TH基因且方向正确。将此质粒再经限制性内切酶消化则得到线状DNA片段,用T7RNA聚合酶转录合成带有Dig标记的高比活度的单链RNA探针;经斑点杂交试验证实该探针具有较高的可靠性。这将为基因治疗帕金森氏病动物模型的疗效检测提供有效手段。 相似文献
3.
酪氨酸羟化酶基因载体-pCMVTH 质粒的构建及在大鼠骨骼肌内的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
为用转基因方法治疗巴金森氏病大鼠模型,本研究采用分子克隆技术,将合成多巴胺的关键酶-酪氨酸羟化酶(TH)的基因,克隆进入以巨细胞病毒CMV为启动子的载体质粒内,经限制性内切酶定位分析证实该重组的DNA质粒的可靠性。携带TH基因的PCMVTH质粒以LIPO-FECTIN介导,在培养的原代骨骼肌细胞中高效表达。本研究为进一步用转基因的细胞植入脑内以治疗巴金森氏病打下一定基础。 相似文献
4.
目的 探讨中度海拔高度地区慢性低氧大鼠心肌、肝的组织学及超微结构变化。方法 本实验用Wistar大鼠20只,雌雄各半,六日内从海拔5米运至海拔3418米饲养,8周后断头处死大鼠,留取心肝组织作光电镜观察,同时高原暴露前后测定血RBC数及Hb含量。结果 心肝组织学改变主要为细胞水肿,即心肌颗粒变性,肝细胞疏松化,其次为心肌、肝细胞嗜酸性变。心肌组织有少量小灶状坏死,肝组织中未见坏死。超微结构主要有肌浆网扩张,线粒体肿胀,糖元颗粒减少,未见不可逆性损伤如线粒体出现杆状嵴、三膜嵴及核染色质边聚现象。毛细血管内皮细胞多有突起伸向管腔,胞质空泡变性,微饮泡较少。另外,高原暴露后RBC数及Hb含量明显升高。结论 该海拔地区慢性低氧大鼠心肌、肝组织及毛细血管的病变是可逆性的; 左右心室病变程度无显著性差异; 肝组织的病变程度明显轻于心肌组织。 相似文献
5.
人Ⅱ型囊泡单胺转运体基因的克隆 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 为获得人Ⅱ型囊泡单胞转运体(vesicular monomine transporter-2VMAT2)以治疗帕金森病,克隆添加Kozak序列的VMAT2cDNA,用于真核细胞表达。方法 从人胎脑中提取总RNA,逆转录成cDNA,设计一对引物用PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重级一起pGEM-Easy-T载体中,酶切鉴定插入片段后,进行全序列测定。结果 RT-PCR扩增到1637bp的带有Kozak序列的cDNA片段。结论 克隆人VMAT2cDNA片断,可用于真核细胞表达。 相似文献
6.
目的 研究人芳香族左旋氨基酸脱羧酶 (AADC)基因在多巴胺代谢过程中的作用。方法 从人胎儿黑质组织中提取总RNA ,以RT PCR法扩增AADCcDNA片段 ,克隆于 pGEM T载体中。测序正确后再构建真核表达载体 ,转染猴肾成纤维细胞COS 7,原位杂交检测AADC表达 ,加入L DOPA后 ,用高效液湘色谱测定转AADC细胞的多巴胺(DA)生成量 ,以了解转基因细胞AADC基因的功能活性。结果 RT PCR扩增出 144 2bp的cDNA片段与Genbank[NM 0 0 0 790 ]登录的序列相同 ,构建真核表达载体 pBK RSV AADC ,原位杂交证实其在COS 7表达阳性率为 70 % - 80 % ,在AADC活性作用下实验组的DA生成量是对照组的 4倍以上 (P <0 0 1)。结论 所克隆的AADC基因可在真核细胞中表达并具有生物活性。可望用于帕金森病的基因治疗。 相似文献
7.
癫痫模型大鼠海马原癌基因c-fos mRNA和蛋白质表达时程的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
为了探讨癫痫发病机理与原癌基因的关系,将马桑内酯注入侧脑室,于大鼠癫痫发作后不同时间点取材海马,用Northern印迹杂交和Western印迹分析技术对海马c-fosmRNA和Fos蛋白表达的动力学进行了定量研究,激光扫描仪定量分析表明:(1)c-fosmRNA在0.5h表达最高,依次渐减,至4h几无表达;(2)Fos蛋白在1h开始表达,2h最多,以后渐少。以上结果表明:c-fosmRNA和Fos蛋白的表达随癫痫的发生发展出现规律性变化,c-fosmRNA是快速,一过性表达,Fos蛋白的表达滞后且延长。提示:c-fos在癫痫发病的基因机制中发挥作用,本文对此进行了讨论。本实验为深入研究癫痫发病的分子机制奠定了基础。 相似文献
8.
语言(包括艺术语言)是人类所特有的功能,对人的生命活动具有重要意义。人的语言功能是一个涉及多个器官、系统的复杂生理过程,而发声则是此过程中的重要环节。因此,熟悉发声器官——声带的结构和生理,对保护嗓音、充分发挥语言和艺术才能是非常必要的。 相似文献
9.
目的观察蛋白聚糖-agrin在大鼠大脑皮质和海马的表达,探讨agrin与记忆的关系.方法用抗agrin的多克隆抗体,免疫组化方法检测成年大鼠、记忆正常老年鼠以及记忆障碍的老年鼠大脑皮质和海马中agrin的表达变化.结果 Agrin在不同动物组的表达变化明显,在成年鼠和记忆正常的老年鼠的大脑皮质和海马agrin有较弱表达,但在记忆障碍的老年鼠其表达增加明显.结论 Agrin表达可能和大鼠的记忆障碍有关. 相似文献
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脂多糖对大鼠多巴胺能神经元毒性作用的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 建立新的帕金森病 (Parkinson’sdisease ,PD)动物模型 ,探讨其发病机制。方法 在大鼠脑黑质(substantianigra ,SN)内注射脂多糖 (Lipopolysaccharide ,LPS)后 ,按大鼠不同存活期用高效液相色谱 (HPLC)来测定脑内多巴胺 (Dopamine,DA)及其代谢产物的含量 ;用免疫组化法观察酪氨酸羟化酶 (Tyrosinehydroxylase ,TH)阳性神经细胞、小胶质细胞的形态及数量变化。结果 DA及其代谢产物的含量在LPS注射侧随时间不同有不同程度下降 ,于第 14天达到最低 (P <0 0 1) ;注射侧黑质TH阳性神经元可以达到全部消失 ,该处可见大量被激活并有形态改变的小胶质细胞。结论 LPS可导致大鼠黑质多巴胺能神经元的损害 相似文献