人修饰型降钙素和鼠酰胺化酶基因在昆虫细胞中的偶联表达

人降钙素 (hCT)是 32氨基酸的多肽激素 ,C-端为α脯氨酰胺结构 ,具有调节体内钙、磷代谢等许多重要生理功能。用重组昆虫杆状病毒表达系统 ,偶联表达合成的人修饰型降钙素 (hmCT)基因与GST融合基因和大鼠酰胺化酶 (PAM)基因 ,再用抗hmCT或抗PAM抗体 ,既检测到由昆虫细胞表达的GSThmCT产物也检测到PAM产物。经GSH 琼脂糖凝胶亲和层析 ,分离纯化GSThmCT融合蛋白。这种蛋白修饰酶与底物在真核细胞偶联表达也将适用于其他生物活性肽的体外表达     

合成成骨生长肽的骨内外成骨活性

利用固相多肽合成人成骨生长肽（sOGP),纯度达99．2％,HPLC及毛细管电泳均一,蛋白质序列分析和质谱分析符合理论值。在体内我们观察了sOGP对兔胫骨骨折愈合的药效。用血生化、X射线、骨密度、组织学外骨痂分析、生物力学等方面测得sOGP能显著促进新生骨形成,明显增加成骨活性蛋白碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（BGP）的血清水平,对兔胫骨不稳定的横断骨折愈合具有一定的促进作用。尤其是实验组骨密度和外骨痂中小梁骨成分显著地加的数据,具有统计学意义。还观察了sOGP在没介质中对原代成骨细胞的成骨活性。在体外sOGP低剂量(10^-11mol/L）对原代成骨细胞有明显的增殖作用,表现双向调节。有趣的是sOGP在体外的成骨活性作用必须有血清白蛋白（BSA）和血清中某些因子的参与。     

B27K—去B链C端三肽胰岛素的制备、生物活力与自聚合性质

液相合成五肽Gly Phe Phe Tyr Lys(Boc)Obut,与B链C端去八肽胰岛素酶促缩合得到B2 7K 去B链C端三肽胰岛素(B2 7K DTrI,B2 7K destripeptideinsulin)。用小鼠惊厥法和小鼠降血糖法测得B2 7K DTrI的整体生物活力为标准胰岛素的 80 % ,B2 7K DTrI与人胎盘细胞膜胰岛素受体结合能力为标准胰岛素的 ( 12 5± 13 ) %。用凝胶过滤法证明B2 7K DTrI自聚合性质降低 ,具有与去B链C端五肽胰岛素相同的单体性质。在B2 7K DtrI结构中 ,B2 7T被K取代 ,其优点是在酵母中表达其前体后 ,可以很方便地通过胰蛋白酶水解获得     

脱脂蛋白模型多肽与脂质体相互作用的高效液相色谱研究

应用凝胶过滤高效液相色谱,测定了两个两亲性多肽Ａｍｐ１和Ａｍｐ２进入磷脂酰甘油／磷脂酰胆碱脂双层的表观分配常数,并利用三硝基苯磺酸分析研究了与脂质体结合的多肽的氨基暴露状况。由结果推测,处于膜结合状态的多肽的氨基端是暴露于水相的;Ａｍｐ１与脂双层相互作用强于Ａｍｐ２,一方面表现为Ａｍｐ１比Ａｍｐ２埋膜较深,另一方面表现为Ａｍｐ１与脂双层的结合能力比Ａｍｐ２强,而主要表现在于后者。此外也发现两个多肽在缓冲液中处于几乎不存在暴露的氨基的聚合状态。     

磷脂组成对脱脂蛋白模型多肽与脂质体相互作用的影响

根据脱脂蛋白的脂结合序列合成了两个两亲性多肽Ａｍｐ１和Ａｍｐ２,在Ａｍｐ２在缬氨酸残基取代了Ａｍｐ１第４位的赖氨酸残基。用内源荧光谱发射峰的蓝移,包埋的钙氯黄素在脂质体中的渗漏,丙烯酰胺对多肽色氨酸残基的淬灭等手段比较了Ａｍｐ１与Ａｍｐ２与具有不同磷脂组成的脂质体的相互作用,并研究了温度的影响。     

Interaction of synthetic peptide corresponding to signal sequence of glucitol permease of Escherichia Coli and its analogue with liposomes

The N-terminal signal sequence of glucitol pcrmease of Escherichia Coli (Gut22) and its analogue (Gut22Ana) were synthesized. The analogue had a Pro residue substituting for the His at the 7th position of Gut22 and a Val residue substituting for the Glu at the 10th position. The intrinsic fluorescence emission spectra indicated that the binding of Gut22 with lipid bilayer was much stronger than that of Gut22Ana. The leakage experiments with calcein-loaded liposomes showed that Gut22 strongly perturbed lipid bilayers while Gut22Ana did not. The apparent partition constant of Gut22 for partitioning into phosphatidylserine/phosphatidylcholine bilayers was measured; the effect of membrane potential on the interaction of Gut22 with lipid bilayers was studied and the conformation changes of Gut22 and Gut22Ana upon interacting with liposomes were studied by the method of circular dichroism analysis.     

戊肝病毒活性肽的选择,合成与应用

对戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）编码蛋白序列进行了亲水性分析及二级结构预测,选择亲水性强、具有β－转角与β－折叠的区段,采用多肽固相合成法合成了ＨＥＶ基因组３个开读框架（ＯＲＦ１,ＯＲＦ２和ＯＲＦ３）中可能的抗原表位,以免疫学方法进行鉴定并选出了分别来自ＨＥＶ３个ＯＲＦ的、具有重要生物活性与应用前景的３段肽（ＥＨ１７４、ＥＨ２６５、ＥＨ３６２）。在此基础上,进行了抗ＨＥＶＥＬＩＳＡ新型检测试剂盒的实验室研究及临床试用。结果表明,所研究的戊肝抗体检测试剂盒特异性高、临床符合性好、具有可重复性,在戊肝辅助诊断及流行病学调查中具有重要意义。     

在高浓度1,4-丁二醇中酶促合成去B链C端六肽胰岛素

用含80％1,4-丁二醇的混合溶剂,以胰蛋白酶酶促,由去八肽胰岛素(DOI)合成了去六肽胰岛素(DHI),总产率为35％。1,4-丁二醇的溶解性能好,在浓度高达80—90％时不明显抑制酶活力,DOI的氨基无需保护,溶液中无高聚物或沉淀形成。     

[B10,22-Asp,B25-Tyr-NH2]-去β链C端五肽胰岛素的合成和性质

本文报道了[B10,22-Asp,B25-Tyr-NH2]-去B链羧端五肽胰岛素的制备及其生物活性。结果表明,这一类似物的生物活力比去五肽胰岛素(DPI)的活力高一倍,但却比Gerald所报道的[B10-Asp,B25-Tyr-NH_2]-DPI的活力低很多,说明后者的高活性可能依赖于分子中B22-Arg的存在。