萤光素酶报告基因在病毒学研究中的应用

萤光素酶是一类在氧气存在下能催化其底物特异性发光的酶,检出灵敏度高、特异性强。萤光素酶催化底物发光因无须外源光的激发,避免了非特异性干扰,具有其他报告基因不可替代的优势。萤光素酶基因作为报告基因已成为医学科学研究领域的重要标记工具,具有良好的应用前景。我们简要综述了萤光素酶报告基因在病毒学研究中的应用进展。     

重组腺病毒介导HGF修饰ADSCs对大鼠肝损伤模型的治疗作用

目的：建立重组腺病毒介导肝细胞生长因子HGF促ADSCs 定向分化肝细胞的方法,并对其参与肝损伤修复能力进行验证,为作为治疗肝损伤细胞来源提供参考。方法：采用消化培养的方法,分离SD 大鼠腹股沟脂肪组织ADSCs 细胞,连续传代3 次对其进行纯化培养,利用形态学鉴定、流式细胞术检测ADSCs 表面标志物方法对其间充质干细胞样特征进行鉴定,加入成脂肪细胞诱导液观察其分化成脂肪细胞的能力;构建腺病毒表达HGF载体Adeno-HGF-EGFP,并转染ADSCs 细胞,利用免疫细胞化学染色方法检测肝细胞标志分子表达水平;最后建立大鼠肝损伤动物模型,观察Adeno-HGF-EGFP 转染的ADSCs 细胞参与肝损伤修复能力情况。结果：分离的ADSCs 细胞形态较为一致,绝大多数呈梭形,排列不规则。流式细胞术结果显示,该细胞表达CD29、CD90、CD106 等间充质干细胞细胞表面标记物,低表达造血干细胞细胞表面标记物CD34、CD45,同时,分离的ADSCs 细胞具有诱导分化成脂肪细胞能力;Adeno-HGF-EGFP 转染ADSCs后,AFP、ALB、CK18 等肝细胞特异性分子表达水平升高;经尾静脉注射ADSCs 细胞后,肝损伤大鼠的AST、ALT、TBIL 等分子表达水平恢复正常。结论：建立了重组腺病毒介导肝细胞生长因子HGF促ADSCs定向分化肝细胞的方法,并且表达HGF的ADSCs 细胞具有修复大鼠肝损伤模型能力,这为通过细胞治疗肝损伤提供了新的细胞来源。     

Lingo-1抑制髓鞘再生的分子机制及临床应用前景

Lingo-1(leucine-rich repeat and Ig domain containing,Nogo receptor-interacting protein1)是一种选择性表达于中枢神经系统的跨膜蛋白。目前,针对髓鞘再生过程的研究发现,在中枢神经系统损伤后出现高表达Lingo-1,从而抑制损伤区少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)的分化并降低神经元的存活率,最终抑制损伤神经元的髓鞘再生。由此提示,Lingo-1可能成为促进损伤后神经修复的重要新靶点。该文就近年来关于Lingo-1对中枢神经系统髓鞘再生影响的研究及其作用机制作一简单综述。     

汉坦病毒S基因片段及其产物的研究

汉坦病毒是肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）的病原体,近年来对其Ｓ基因片段生物学特性的研究取得了很大进展。本文不Ｓ基因片段的结构、编码核蛋白（ＮＰ）的免疫原性、抗原决定簇及ＮＰ的重组表达与应用一阐述。     

丙型肝炎病毒核心蛋白在大肠杆菌中的表达

目的：建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的原核表达系统,获得高产量的纯化核心蛋白。方法：应用多聚酶链反应(PCR),以HCV—H株全长cDNA序列为模板,扩增获得核心区基因片段,克隆入原核表达载体pBVIL1,构建原核表达载体pBVIL1-C,转化HB101宿主菌,通过温度诱导表达核心蛋白。结果：扩增得到目的基因长度为573bp,构建pBVIL1-C表达载体,在HB101宿主菌中通过温度诱导获得稳定表达,表达蛋白占菌体总蛋白含量的21％,Western—Blot检测证实表达产物可与HCV患者阳性血清发生特异性结合反应。结论：HCV核心蛋白可在大肠杆菌中获得高表达并具有良好的反应原性。     

增强乙型肝炎疫苗免疫效果的研究进展

乙肝疫苗对于控制乙型肝炎病毒感染十分重要.近年人们仍在根据免疫学理论和生物工程技术进展不断研发更加科学有效的新型乙肝疫苗.就新型乙肝疫苗设计的免疫机制和提高免疫效果的关键因素作出综述.     

选择性代谢性谷氨酸受体5激动剂CHPG对创伤性神经元损伤的保护作用研究

目的：研究选择性代谢性谷氨酸受体5激动剂2-氯-4羟苯基甘氨酸（CHPG）对创伤性神经元损伤的保护作用,并初步探讨其保护机制。方法：大鼠皮层神经元原代培养10天后,采用机械划伤的方法建立损伤模型,采用乳酸脱氢酶（LDH）测定和Hoechst 33342染色观察CHPG对神经元的保护作用。结果：①CHPG显著降低损伤后LDH的释放和神经元凋亡。②与对照组相比,CHPG增加了ERK与Akt的磷酸化水平。③使用ERK抑制剂PD98059或者Akt抑制剂LY294002都可以部分逆转CHPG的保护作用。结论：CHPG可以减轻创伤性神经元损伤,这种保护作用可能是由ERK和Akt信号通路介导的。     

GLT-1基因siRNA真核表达载体的构建及其在大鼠神经胶质细胞中的抑制效应

目的:研究特异性siRNA对大鼠神经胶质细胞中GLT-1基因的阻抑效果。方法:根据GLT-1基因的序列特点和RNAi设计原则,设计其shRNA的核苷酸片段。退火后将其克隆入pSupressorNeo,构建可表达大鼠GLT-1基因siRNA的重组真核表达质粒pSuppressorNeo-GLT-1;利用脂质体法将其转染神经胶质细胞后,用RT-PCR、Western印迹及免疫荧光法等方法检测转染的神经胶质细胞中GLT-1基因的表达水平。结果:瞬时转染的神经胶质细胞中GLT-1基因的表达受到明显抑制,GLT-1蛋白含量明显下降。结论:pSuppressor-Neo-GLT-1质粒构建成功,瞬时转染神经胶质细胞后可以明显抑制GLT-1基因的表达。     

非酒精性脂肪肝病肝组织超微结构特点

目的:阐明非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的超微结构特点。方法:收集我校和其他单位送检的3例单纯性非酒精性脂肪肝,16例NASH患者和4例NAFLD肝硬化患者的肝穿刺组织。用2.5%戊二醛、1%锇酸双固定、Epon 812包埋,超薄切片70nm,醋酸铀和柠檬酸铅染色后,JEM-2000EX透射电镜观察。结果:单纯性脂肪肝患者主要表现为大小不等的脂滴沉积、以小脂滴为主,可互相融合。NASH患者的肝细胞都可出现大量脂滴积聚,为大小脂滴混合型、内容物主要为中等电子密度、比较均一的甘油三酯,部分脂滴周围可见磷脂成分,NASH患者肝细胞内脂滴也互相融合。肝细胞线粒体的超微结构改变包括多形性线粒体、基质颗粒增多、线粒体增大和嵴的丧失是主要的电镜异常发现,线粒体内还可见副晶格样包涵体。部分NASH患者肝细胞内可见Mallory小体。NASH患者肝细胞周围可见淋巴细胞浸润。肝血窦Kupffer细胞增生不明显,NAFLD肝硬化患者Disse间隙和肝细胞间可见胶原纤维增生。结论:NAFLD具有较为明确的超微结构改变,电镜检查有助于诊断。     

两种液体复苏方案对创伤后非控制性失血性休克家兔血流动力学的影响

目的:建立非控制性失血性休克的家兔模型,研究两种不同复苏方案对家兔血流动力学的影响.方法:24只家兔复制成非控制性失血性休克模型,随即分成四组,假手术组(SHAM组)、休克未治疗组(SWT组)、积极性复苏组(PT组)、限制性复苏组(LT组).在实验设定的时间段内,采用两种复苏方案输入的液体有:7.5%高渗氯化钠溶液(7.5%Hypertonie saline,HTS).乳酸林格氏液(Lactated Ringers solution,LRS),羟乙基淀粉溶液(Hydroxyethyl Starch 130/0.4,HES).在实验的Omin、30min、60min、90min,监测家兔的左心室压力上升或下降的最大速率(themaximal change rateofleftintraventricularpressure.±dp/dtrnax)以及左心室收缩压(left intraventricular systolic pressure,LVSP),并在90min实验结束时,处死家免,统计出血量,补液量.结果:在监测指标±dp/dtmax和LVSP上,PT组和LT组分别与SWT组比较时,60min、90min的指标均有统计学意义(P＜0.05);60min时,PT组与LT组相比较,各指标数值虽略大,但差异无统计学意义(P＞0.05);90min时,PT组与LT组相比较各项指标均有统计学意义(P＜0.05).补体量上,30-60min、60-90min两个阶段,PT组与LT组比较所用LRS、HES的量均有统计学意义(P＜0.05);失血量上,PT组分别与LT组、SWT组比较后,均有统计学意义(P＜0.05),LT组与SWT组比较无统计学意义(P＞0.05).结论:在非控制性失血性休克的早期救治中,采用限制性液体复苏方案较积极性液体复苏,补液量少,并且对家兔心功能的维持作用效果比较明显;尤其在控制活动性失血上,与积极性复苏相比,限制性复苏优势明显.