转基因番木瓜作为抗结核植物口服疫苗的初步研究

转基因植物疫苗的研制,可改变传统的疫苗接种方式和接种手段,大大降低疫苗的生产成本,具有广阔的应用前景。结核病的泛滥使抗结核的免疫预防急需开发新型的疫苗,研制抗结核的转基因植物疫苗具有重大的理论和实践意义。本文对具有良好免疫原性的结核杆菌分泌蛋白ESAT—6基因,进行了修饰改造,构建了带潮霉素选择抗性基因的植物表达载体和根癌农杆菌工程菌;采用叶盘法转化热带水果番木瓜,获得了13株抗性植株,通过PCR、Southern blot和RNA dot blot分子检测,确认了4株为转基因植株。番木瓜ESAT—6转基因植株的获得,为进一步的结核病植物口服疫苗的免疫研究和新型抗结核疫苗的研制与开发奠定了基础。     

利用套叠PCR和高保真DNA聚合酶进行基因多位点突变的研究

利用套叠PCR和高保真DNA聚合酶对人工合成的牛口蹄疫病毒VPI基因(FMDV-VPI,Foot-Mouth Disease Vims-VPI)的5个突变位点进行修复,修复的成功率为100％。     

用细胞学方法研究番木瓜组培苗的遗传稳定性

利用细胞学和形态学方法研究组织培养技术生产的番木瓜种苗的遗传稳定性。通过对番木瓜（2n=18）主栽品种蔬罗1号1～38代组培苗体细胞的染色体数的初步观察和统计,发现1～32代苗所观察的体细胞染色体全部为2n=18,大田种植后表型与亲代相比未发生明显的变异。但是在第33,36,37代发现了染色体非整倍性的细胞,田间种植后与亲代相比挂果率和抗病性下降。这一研究结果为番木瓜组培苗的继代培养和规模化生产提供了有价值的理论依据。     

应用套叠PCR技术构建番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因的hpRNA植物表达载体

植物真核翻译起始因子4E(eIF4E)在蛋白质合成的起始中发挥重要作用,参与植物-病毒互作,影响病毒的侵染过程.为了研究eIF4E在植物病毒侵染中的功能,建立了一种快速的套叠PCR新方法,成功构建了番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因的hpRNA结构,并将其连接到改造的植物表达载体pBI121上,为利用RNA干扰技术研究番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因在病毒侵染中的作用奠定了基础.     

适用于Nimble Cloning系统的pCambia载体改造

为了适用于Nimble Cloning这种新型的DNA分子克隆技术,本研究以pCambia1304载体作为改造对象,采用突变碱基的方式去除载体中的5个Sfi I酶切位点,并且对改造后的载体在农杆菌中的稳定性以及在植物中的表达进行分析,结果表明5个Sfi I位点突变对载体的稳定性和表达没有影响。本研究为Nimble Cloning系统提供了配套载体,也为其他pCambia系列载体改造成Nimble Cloning系统载体提供了模板和参考。     

利用套叠PCR技术改造酵母表达载体pAO815的研究

利用套垒PCR技术将α-factor信号肽基因插入pA0815之EcoRⅠ位点,构建成分泌型表达载体pA0815α-A。在不改变原克隆位点EcoRⅠ的条件下,借助pA0815之第873位的HindⅢ位点,将pA0815AOX1启动子873-940片段连同α-factor信号肽基因序列（246bp）插入pA0815之HindⅢ/EcoRⅠ之间,构建成含α-factor信号肽基因的分泌型表达载体pA0815α-A。