人睾丸前列腺素D合成酶在毕赤氏酵母中的表达、纯化及鉴定

L PGDS是一种双功能蛋白 ,即催化PGD2产生和运输亲脂 疏水分子 .L PGDS主要分布于脑和男性生殖器官 ,并分泌到脑脊液、血清、精液、尿液等体液中 .测定体液中L PGDS的含量可辅助诊断一些神经系统疾病、生殖系统疾病、心血管疾病和肾脏疾病等 .在毕赤氏酵母中表达人睾丸前列腺素D合成酶 ,以利于进一步的生物学功能及临床应用研究 .用PCR的方法从质粒pGEX 2T htL PGDS上扩增出人睾丸L PGDS成熟肽基因编码序列 ,经测序证实后 ,将其插入到质粒pPIC9中 ,构建该基因的酵母表达质粒 .电转化毕赤氏酵母GS1 1 5 ,经甲醇诱导后 ,可实现L PGDS的高效、分泌性表达 .镍离子亲合层析法对表达上清进行纯化 ,SDS PAGE分析证实 ,在 2 7kD处有重组蛋白的表达 ,表达量为 2 7mg L .纯化蛋白可与视黄酸结合 ,使其紫外吸收波谱发生红移     

类固醇激素受体复合物的装配与核内转运

类固醇激素受体 (ＳＲ)包括糖皮质激素受体 (ＧＲ)、孕激素受体 (ＰＲ)、雌激素受体(ＥＲ)、雄激素受体 (ＡＲ)等 ,其中以前两者的研究较多。ＳＲ主要存在于类固醇激素的靶细胞胞质和胞核中 ,当细胞外液中类固醇激素通过细胞膜进入胞质后 ,它能与胞质中ＳＲ结合 ,通过胞质和胞核中ＳＲ的穿梭 ,从而调节核基因组相关产物的转录、翻译及分泌一些生物活性物质 ,以发挥类固醇激素的作用。ＳＲ在细胞内有游离形式和复合物形式 ,而且存在几种不同的复合物形式 ,它们是怎样形成以及形成后如何转运到核内的 ?本文将对此作一综述。1 .ＳＲ复合物的组…     

大鼠前列腺素D合成酶在毕赤酵母中的表达及其在精子中的分布

研究大鼠L PGDS在毕氏酵母中的表达 ,探讨L PGDS在大鼠精子中的分布。以大鼠睾丸mRNA为模板 ,经逆转录获得L PGDS全长和成熟基因片段。将该基因片段克隆到pPIC9载体上 ,将重组表达质粒转化巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115 ,筛选mut⁺表型 ,经甲醇诱导实现L PGDS的分泌表达。用SDS-PAGE分析L-PGDS的分子量 ,用PAS反应鉴定糖链 ,用免疫组织化学法研究L PGDS的分布 ,用Westernblot分析重组L-PGDS与精浆中L-PGDS。筛选出 4株表达水平较高的酵母工程菌株 ,SDS-PAGE分析表明 ,产物分子量约为27kD ;L-PGDS主要分布在精子的头部以及尾部的上段     

Patau综合征患者额外13号染色体父亲起源

报告1例孕38周经剖腹产出生的畸形男儿。患儿双侧唇裂,严重腭裂,胸骨畸形,骶部脊柱裂,双侧睾丸未降,足内翻。出生后10分钟由于呼吸衰竭而夭折。患儿经外周血淋巴细胞染色体核型分析为47,XY,+13,后经荧光原位杂交技术加以证实。对患儿及其父母进行短重复序列D13S317位点检测,证实患儿额外的13号染色体源自父亲第一次减数分裂不分离。     

18q部分单体患儿的细胞和分子遗传学研究

临床发现1例智力低下伴轻度发育迟缓的女性患儿,对患儿进行G显带高分辨染色体核型分析, 发现18q21→qter缺失, 经多色荧光原位杂交和双色荧光原位杂交证实, 确定其核型为46,XX,del(18)(pter→q21:),ish del(18)(D18Z1+, qter-)。用DNA多态性方法分析, 该患儿从18q22.1至18qter区域内至少有8.7 Mbp丢失, 有MBP基因和GALNR基因缺失。缺失的18号染色体源自父亲。患者的智力低下和生长发育迟缓是18q21→qter缺失的结果, 或许与MBP基因和GALNR基因的缺失有关。     

人精子蛋白SP22的cDNA克隆、表达及纯化分析

精子蛋白SP2 2与生殖功能密切相关。睾丸附睾毒物氯醇硝唑作用于大鼠生殖系统时 ,精子表面SP2 2大量脱落至附睾液中 ,导致生育力降低。深入研究发现SP2 2与生育力存在量的关系。从人睾丸组织中提取总RNA ,通过RT-PCR克隆出人睾丸组织中的SP2 2基因 ,连入pGEM Teasyvector进行cDNA克隆测序。再亚克隆到pET-2 8a-c( + )vectors成功构建pET-2 8a-c( + )vectors SP2 2表达载体 ,并转化BL2 1 (DE3) ,以IPTG诱导表达 ,对诱导剂浓度、诱导时间进行优化后以镍离子亲和层析纯化目的蛋白。蛋白表达量占菌体总蛋白 30 %。所得蛋白可推动SP2 2的蛋白结构活性、睾丸组织中的定位分布及在男性不育、癌症等疾病检测中的应用研究。     

复杂染色体重排的女性携带者与她健康的女儿

一例新生复杂染色体重排的女性携带者（complex chromosome rearrangement ,CCR）,易位涉及1号、5号和12号染色体。病人因2次自然流产而要求进行外周血淋巴细胞G显带核型分析。最初G显带核型疑为46,XX,t(1;5;12)(1pter→1q25::12q24→12qter;5qter→5p11::1q25→1qter;12pter→12q24::5p11→5pter).经荧光原位杂交（FISH）技术检测,证实患者的核型为46,XX,t(1;5;12)(1pter→1q23::12q22→12qter;5qter→5p11::1q25→1qter;12pter→12q22::1q23→1q25::5p11→5pter).7年后病人再次妊娠,并拒绝产前诊断。女婴足月分娩,生长发育正常。核型为46,XX。比较以前报告的女性复杂易位携带者与我们报告的病例可以认为,CCR并不总是表现为自然流产或分娩畸形儿,仍有机会生出正常的孩子。Abstract: We reported in the paper one case of a de novo complex chromosomal rearrangement (CCR) involving three different chromosomes,1, 5 and 12. Two pregnancies of the female carrier over three years resulted in two spontaneous abortions. Initial cytogenetic analysis of her peripheral lymphocyte by G banding suspected a karyotype 46,XX,t(1;5;12)(1pter →1q25::12q24→12qter;5qter→ 5p11::1q25→1qter;12pter →12q24::5p11→5pter). Fluorescense in -situ hybridization (FISH) was used to confirm the karyotype 46,XX,t(1;5;12)(1pter→1q23::12q22→12qter;5qter→5p11::1q25→1qter;12pter→12q22::1q23→1q25::5p11→5pter). Seven years later she was pregnant again and refused to have prenatal diagnosis. The fetus is normal both in phenotype and karyotype。Comparing previously reported female CCR carriers with the case, we conclude that female CCR carriers may not always present spontaneous abortion or have offspring with congenital malformation and can have chance to get a healthy child.     

支持细胞紧密连接与男性避孕

支持细胞的紧密连接是血睾屏障的主要组成成分,对支持细胞紧密连接结构与功能的深入研究有助于探讨男性避孕的新的研究方法。对紧密连接动力学的影响因素以及其与精子发生和男性避孕间的关系进行了分析。为进一步探讨男性避孕的研究方法提供新思路。