花椰菜BobACT基因的克隆及其作为内参基因的研究

实时荧光定量PCR技术是探索植物基因功能和调节机理的有效手段。选择合适的内参基因是获得实时荧光定量PCR准确性数据的必备条件。ACT基因高度保守且表达稳定,常作为内参基因被广泛应用。为了获得花椰菜ACT基因,以转录组测序和RT-PCR方法为手段克隆得到花椰菜肌动蛋白基因Actin。该基因等电点为5.395,理论分子量为41.77 kD;其cDNA开放阅读框长1134 bp,编码氨基酸377个,GenBank登录号为MG598643。Wolf Psort分析发现,BobActin蛋白亚细胞定位于细胞质基质中。Motif Scan分析显示,BobActin蛋白质的氨基酸序列4～377位为Actin保守结构域。进化分析表明,同源序列基因编码的蛋白质与同为十字花科的甘蓝、芜菁和油菜同源蛋白的相似性达到90%以上,具有高度的保守性。在此基础上,设计了1对荧光定量PCR引物,分析显示,该引物具有较高的特异性和扩增效率,在花椰菜根、茎、花、花球、叶片等不同组织和低温、高温、盐处理、干旱处理、ABA处理等胁迫处理下均能稳定表达,适合在花椰菜基因表达研究中作为内参基因,为开展花椰菜重要功能基因的挖掘、表达模式以及调控机理的研究提供参考。花椰菜在内参基因方面的研究还处于初步阶段,今后可继续克隆其他内参基因,丰富花椰菜的内参基因库,从而进一步提高花椰菜基因表达分析研究的稳定性、重复性和准确性。     

高师生物化学实验个案教材设计及教法探讨--聚丙烯酰胺凝胶电泳法

用有关认知理论和教学理论,对高师生物化学实验——聚丙烯酰胺凝胶电泳法的实验教材进行了重新设计及教学实践。教材共设10个栏目,从多角度多方位激活原有知识,同化新知识,为过渡到智慧技能(应用技能)提供微环境,注重学生个性的发挥,注重培养学生自学能力及终身学习的习惯。     

蝴蝶兰丛生芽、原球茎途径的组织培养研究

对蝴蝶兰丛生芽、原球茎途径的组织培养进行研究,结果表明,不经过愈伤组织直接诱导丛生芽的过程中,1/2MS 6-BA6.0mg/L和1/2MS 6-BA3.0mg/L NAA0.2mg/L两种培养基的诱导率可达100%,丛生芽增殖阶段采用1/2MS 6-BA5.0mg/L NAA 0.5mg/L效果最好;原球茎途径中,1/2MS 6-BA15.0mg,L NAA1.0mg/L诱导率达20.0%,接入1/2MS 6-BA3.0mg/L NAA0.5mg/L培养基中,增殖倍数达7.4,随后转入1/2MS 6-BA1.0mg/L NAA0.5mg/L中,可很快分化成芽.生根培养基以1/2MS IBA0.3mg/L较好,将生根的蝴蝶兰移栽至水苔中,两个月后成活率达100%.此外,蝴蝶兰移栽6个月后转至水培更有利于生长.     

野生南荻与芒杂种多倍体诱导研究

用不同浓度秋水仙素处理野生南荻×芒(Miscanthus lutarioriparia×Miscanthus sinensis)远缘杂交后代以诱导产生多倍体,并对变异株进行形态学和细胞学鉴定,以期获得稳定的四倍体植株并分析其生理特性。结果表明:(1)采用秋水仙素加入培养基处理法和秋水仙素溶液浸泡处理法都可获得一定频率的多倍体植株;胚性愈伤组织以0.2%秋水仙素浸泡处理48h的诱变效果较好,四倍体诱导率达8.7%;芽在0.05%秋水仙素培养基中处理15d较好,四倍体诱导率达10.6%;生根苗在0.1%秋水仙素培养基中处理10d较好,四倍体诱导率达11.1%。(2)经体细胞染色体计数,加倍植株染色体数为2n=4x=76,对照植株的染色体数目为2n=2x=38。(3)生长2年的多倍体植株形态、叶片大小、茎粗、茎壁厚、节间等性状表现出巨大性和超亲优势。