| 花椰菜BobACT基因的克隆及其作为内参基因的研究 |
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| 引用本文： | 林珲,朱海生,温庆放,黄丽芳.花椰菜BobACT基因的克隆及其作为内参基因的研究[J].植物遗传资源学报,2019(3):781-789. |
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| 作者姓名： | 林珲 朱海生 温庆放 黄丽芳 |
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| 作者单位： | 福建省农业科学院作物研究所/福建省农业科学院蔬菜研究中心/福建省蔬菜工程技术研究中心 |
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| 基金项目： | 福建省属公益类科研院所基本科研专项(2018R1026-10);国家大宗蔬菜产业体系(CARS-23-G-53)~~ |
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| 摘 要： | 实时荧光定量PCR技术是探索植物基因功能和调节机理的有效手段。选择合适的内参基因是获得实时荧光定量PCR准确性数据的必备条件。ACT基因高度保守且表达稳定,常作为内参基因被广泛应用。为了获得花椰菜ACT基因,以转录组测序和RT-PCR方法为手段克隆得到花椰菜肌动蛋白基因Actin。该基因等电点为5.395,理论分子量为41.77 kD;其cDNA开放阅读框长1134 bp,编码氨基酸377个,GenBank登录号为MG598643。Wolf Psort分析发现,BobActin蛋白亚细胞定位于细胞质基质中。Motif Scan分析显示,BobActin蛋白质的氨基酸序列4～377位为Actin保守结构域。进化分析表明,同源序列基因编码的蛋白质与同为十字花科的甘蓝、芜菁和油菜同源蛋白的相似性达到90%以上,具有高度的保守性。在此基础上,设计了1对荧光定量PCR引物,分析显示,该引物具有较高的特异性和扩增效率,在花椰菜根、茎、花、花球、叶片等不同组织和低温、高温、盐处理、干旱处理、ABA处理等胁迫处理下均能稳定表达,适合在花椰菜基因表达研究中作为内参基因,为开展花椰菜重要功能基因的挖掘、表达模式以及调控机理的研究提供参考。花椰菜在内参基因方面的研究还处于初步阶段,今后可继续克隆其他内参基因,丰富花椰菜的内参基因库,从而进一步提高花椰菜基因表达分析研究的稳定性、重复性和准确性。
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| 关 键 词： | 花椰菜 ACTIN 基因克隆 表达分析 内参基因 |
Molecular Cloning of Actin Gene and Study on This Gene as Reference Gene in Cauliflower(Brassica oleracea L. var. botrytis L.) |
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| LIN Hui,ZHU Hai-sheng,WEN Qing-fang,HUANG Li-fang.Molecular Cloning of Actin Gene and Study on This Gene as Reference Gene in Cauliflower(Brassica oleracea L. var. botrytis L.)[J].Journal of Plant Genetic Resources,2019(3):781-789. |
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| Authors: | LIN Hui ZHU Hai-sheng WEN Qing-fang HUANG Li-fang |
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| Institution: | (Crops Research Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences/Vegetable Research Center, Fujian Academyof Agricultural Sciences/Fujian Engineering Research Center for Vegetables, Fuzhou 350013) |
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| Abstract: | LIN Hui;ZHU Hai-sheng;WEN Qing-fang;HUANG Li-fang(Crops Research Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences/Vegetable Research Center, Fujian Academyof Agricultural Sciences/Fujian Engineering Research Center for Vegetables, Fuzhou 350013) |
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| Keywords: | Brassica oleracea L var botrytis L actin gene clone expression analysis reference gene |
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