支气管灌洗液SIRT-1、TGF-β1及PINP水平与肺结核患者支气管狭窄发生风险的关系及其预测价值分析

摘要 目的：探讨支气管灌洗液中沉默信息调节因子1（SIRT-1）、转化生长因子-β1（TGF-β1）及I型前胶原N端前肽（PINP）水平与肺结核患者支气管狭窄发生风险的关系，并分析三指标预测肺结核发生支气管狭窄的价值。方法：选择2020年2月至2023年2月江苏大学附属宜兴医院收治的187例肺结核患者，根据是否发生支气管狭窄分为狭窄组（86例）和非狭窄组（101例）。检测并比较两组支气管灌洗液SIRT-1、TGF-β1及PINP水平和肺功能。Pearson相关性分析支气管灌洗液SIRT-1、TGF-β1及PINP水平与肺功能的相关性。多因素Logistic回归模型分析肺结核患者发生支气管狭窄的影响因素。受试者工作特征（ROC）曲线分析支气管灌洗液SIRT-1、TGF-β1及PINP水平预测肺结核患者发生支气管狭窄的价值。结果：狭窄组肺不张、呼吸困难比例、支气管灌洗液TGF-β1、PINP水平高于非狭窄组（P＜0.05），SIRT-1水平、第1秒用力呼气量（FEV1）、用力肺活量（FVC）、最大呼气峰流速（PEF）低于非狭窄组（P＜0.05）。支气管狭窄肺结核患者的支气管灌洗液SIRT-1水平与FEV1、FVC、PEF呈正相关（P＜0.05），TGF-β1、PINP水平与FEV1、FVC、PEF呈负相关（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析，结果显示，呼吸困难、高水平TGF-β1、高水平PINP是肺结核患者发生支气管狭窄的危险因素（P＜0.05），高水平SIRT-1则是保护因素（P＜0.05）。支气管灌洗液SIRT-1、TGF-β1及PINP单独检测预测肺结核患者发生支气管狭窄的曲线下面积（AUC）为0.736、0.799、0.730，联合检测支气管灌洗液SIRT-1、TGF-β1及PINP预测的AUC为0.861，高于单独指标检测的预测效能。结论：支气管狭窄肺结核患者的支气管灌洗液中SIRT-1水平降低，TGF-β1、PINP升高，且与肺功能下降以及支气管狭窄发生风险增加有关，支气管灌洗液SIRT-1、TGF-β1及PINP水平检测对肺结核患者发生支气管狭窄具有一定预测价值，且联合检测的预测效能更高。     

构建基于杆状病毒的BV-T7杂合表达体系及利用其在哺乳动物和禽类细胞中表达eGFP基因

【目的】研究重组杆状病毒BV-T7杂合表达体系能否有效转导禽类细胞并在禽类细胞中表达外源基因(eGFP),从而构建能在禽类细胞中高效稳定表达外源基因的重组杆状病毒表达系统。【方法】本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,结合T7表达系统,通过对eGFP表达水平的调控来把握噬菌体T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的功能。利用两支重组杆状病毒,pFastBac-CMV-T7 RNAP重组杆状病毒为哺乳动物细胞启动子CMV调控的噬菌体T7 RNA聚合酶的cDNA;pFB-T7pro-IRES-GFP-T7ter重组杆状病毒为T7启动子控制的eGFP报告基因。将两支重组杆状病毒共同侵染哺乳动物OL(oligodendrocyte)细胞、鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞。【结果】两支重组杆状病毒利用T7启动子和T7 RNAP,在OL细胞、鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞中成功表达eGFP报告基因,而且未引起细胞病变,但在鸡胚原代细胞中eGFP的表达相对弱于在OL细胞中的表达。在OL细胞中重组杆状病毒对细胞的转导效率为59.5%,在鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞中转导效率分别为23.2%和33.1%。【结论】本研究构建的基于杆状病毒、T7RNA聚合酶、T7启动子(BV-T7)杂合表达体系能够在哺乳类细胞及禽类细胞中表达T7 RNAP,并利用T7RNAP继续高效而稳定地表达外源基因。这为难于体外操作的RNA病毒提供了有效的研究方法,并对新型基因工程疫苗的研制提供了一个高效而稳定的表达载体系统。