植物转基因成分PCR检测内对照系统的建立

为了建立适用于多种植物的转基因成分PCR检测的内对照系统,本文针对植物叶绿体DNArbcL基因的保守区域,设计了一对扩增片段为433bp的PCR引物。通过对23种植物的PCR扩增表明,该引物不但在4种单子叶植物（大米,玉米,小麦,洋葱）,10种原始花被亚纲的双子叶植物（甘蓝,白菜,大豆,豇豆,花生,胡萝卜,芹菜,菠菜,大麻,棉花）及7种合瓣花亚纲的双子叶植物（圣女果,番茄,辣椒,马铃薯,南瓜,黄瓜,菊苣）中得到了稳定一致的扩增结果,而且在低等的藻类植物（海,经须菜）中也得到了特异性的扩增结果。进一步对扩增片段进行的DNA序列测定与分析表明,扩增片段的变异水平较低,具有较高的保守性。本系统的建立有助于排除PCR检测时的假阴性结果,从而提高检测的准确性,而且能克服现行的“一种植物一种检测内对照”的弊端,有利于提高检测效率,缩短检测周期。     

大猿叶虫四地理种群的PCR-RFLP方法鉴别及遗传多样性分析

为了明确大猿叶虫Colaphellus bowringi Baly的遗传多样性水平及探索其种群快速鉴定的方法, 利用 7种限制性内切酶对其4个地理种群（江西龙南、江西修水、山东泰安、黑龙江哈尔滨）的线粒体COⅠ基因进行PCR-RFLP分析。结果表明: 利用AseⅠ, MboⅠ, NlaⅢ和RsaⅠ在大猿叶虫4个地理种群中均没检测到多态性; 利用AluⅠ和DraⅠ只检测到种群间的多态性; 利用HaeⅢ既检测到了种群间的多态性, 又在山东种群中检测到种群内多态性。根据酶切图谱, 共发现4种单倍型, 单倍型的特异性可以作为种群鉴别的标志。根据限制性片段共享度, 利用POPGEN 3.2计算4个种群的遗传距离, 并利用MEGA3.1进行聚类分析, 结果显示,大猿叶虫4个地理种群间的遗传距离大小与其相对地理距离的远近不相符, 其遗传变异程度与其滞育的特征也不相符。据此认为线粒体COⅠ基因的PCR-RFLP分析可以用于大猿叶虫不同地理种群的识别。     

基于AFLP方法对不同地理种群棉褐带卷蛾遗传分化的研究

利用3对AFLP引物对我国棉褐带卷蛾Adoxophyes orana(Fischer von Rosslerstamm)4个地理种群进行了遗传分化研究。共扩增得到224个DNA条带,其中多态条带195个;遗传多样性分析表明各群体均具有较高的遗传多样性水平,Nei遗传多样性指数为0.1425⁰.1578,Shannon多样性指数为0.21370.1578,Shannon多样性指数为0.2137⁰.2383。群体间的遗传分化系数(Gst)和基因流(Nm)分析结果表明,北方的苹小卷叶蛾与南方茶小卷叶蛾之间产生了明显的遗传分化,而北方的苹小卷叶蛾不同种群间则存在着大量的基因交流,遗传分化程度很弱。AMOVA分析结果显示66.81%的变异来源于种群内。UMAGA聚类分析表明,北京种群、陕西种群和山东种群间遗传距离较小,聚在一起为一分支,福建的茶小卷蛾单独为一分支。推测棉褐带卷蛾种群间的遗传分化与寄主有关联,与地理距离不相关。     

大猿叶虫四地理种群遗传多样性的RAPD分析

以大猿叶虫Colaphellus bowringi Baly 4个地理种群的基因组DNA为材料, 进行RAPD分析。从80条引物中筛选出11条稳定性好、多态性高的引物进行扩增, 共得到65个扩增位点, 53个多态位点, Nei氏遗传多样性指数为0.1049~0.2061, Shannon多样性指数为0.1641~0.3167。结果表明所分析的大猿叶虫遗传变异很高, 其中江西龙南种群遗传变异最小, 山东泰安种群遗传变异最高。种群间的遗传距离范围为0.0636~0.3200, 其中江西龙南种群和江西修水种群间的遗传距离最小, 哈尔滨种群与江西龙南种群间的遗传距离最大, 种群遗传距离的大小与其相对地理距离的远近吻合。结果提示种群遗传距离的大小与它们生物学上的相似性有关联。