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在磷酸钾缓冲液中,pH6.8,25℃时,S-I酶复合体的近紫外CD谱显示280~281nm的负峰,293~294nm的正峰。在288,269,和263nm处有3个肩膀。溶液pH值变化和对此酶的热失活处理都能使280~281nm负峰缩小,可能表示酪氨酸残基微环境和酶活力有关。S-I酶复合体的远紫外CD谱显示较大的215nm负峰和较小的192nm正峰,表示其骨架构象以β-折迭和无规卷曲为主。此远紫外CD谱在pH2.3~11范围里维持不变,也不受55℃热失活处理的影响。Na~+和tris对此酶CD谱不产生影响。高浓度盐酸胍能改变其近紫外和远紫外CD谱形。 相似文献
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人促血小板生成素在转基因小鼠乳腺中定位表达的研究(英文) 总被引:1,自引:0,他引:1
通过转基因动物乳腺生物反应器大规模生产药用蛋白质已成为现代生物技术新的生长点之一。为研制表达人促血小板生成素的哺乳动物生物反应器的转基因小鼠模型,本论文以小鼠乳清酸蛋白 (mWAP) 基因5挾说骺厍团-s1-酪蛋白基因3挾说骺厍魑鹘谠菇擞糜诒泶锶舜傺“迳伤氐娜橄僮橹匾煨员泶镌靥錺WAPTPO(Fig.1)。通过常规显微注射的方法把mWAP启动子指导的hTPO表达载体导入小鼠受精卵,获得出生小鼠16只。经PCR检测,有6只为转基因阳性(Fig.2)。G0代小鼠中转基因整合率为37.5% (6/16),用ELISA方法在G0代转基因雌鼠的乳汁中检测了促血小板生成素的表达,表达量在0.8 mg/mL以上(Table 1)。这些结果表明我们已建立了乳腺表达hTPO 的转基因小鼠模型,为以后大型家畜乳腺生物反应器的研制提供了科学依据。 相似文献
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嵌合分子VEGI~+的构建、表达及其抗血管生成和抗肿瘤活性 总被引:2,自引:0,他引:2
血管内皮细胞生长抑制因子VEGI是肿瘤坏死因子超家族新成员,通过诱导内皮细胞凋亡而抑制肿瘤生长。通过PCR方法将CTTHWGFTLC与VEGI23-174氨基酸相连,构成嵌合分子VEGI+。原核表达的VEGI+经过纯化后,以非重折叠的沉淀形式进行活性实验,VEGI+能够抑制鸡胚尿囊膜血管新生,对于Lewis肺癌小鼠移植瘤,5mgL组抑瘤率99.7%,10mgL组抑瘤率96%,25mgL组抑瘤率83%。实验说明VEGI+通过抑制血管新生对移植瘤的早期发展起抑制作用。 相似文献
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人α-乳白蛋白在转基因小鼠乳汁中的动态表达图貌 总被引:1,自引:0,他引:1
利用人α-乳白蛋白基因(hα-Lac)探针从8×105个噬斑中筛选出两个阳性克隆, 以此构建了包含有7.3 kb的hα-Lac的5′调控序列、2.0 kb的编码区和227 bp的牛生长激素3′UTR的乳腺表达框架. 通过显微注射方法获得5只hα-Lac转基因整合雌性小鼠. 对其中1只转基因表达量较高(达到0.3 mg/mL)的小鼠的一个泌乳期中人乳白蛋白的表达过程分析表明: 转基因并不遵从小鼠内源的α-Lac的表达图貌, 而是以转基因特异的方式表达, 表现为在分娩后的前3天转基因的表达低, 自第4天开始逐渐增高, 到第13~14天达到峰值后渐趋稳定, 并持续到泌乳期结束. 在第2个泌乳期中, 转基因的表达量与首次泌乳期的水平相当. 此外, 转基因表达小鼠的泌乳量较正常小鼠和非表达整合小鼠有一定的增加, 提示泌乳过程中较高浓度的α-Lac可能引发了产乳量的增加. 相似文献
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