应用T/A策略克隆乙肝病毒pC/C及C基因

以克隆乙型肝炎病毒pC/C及C基因为例,报道了在DNA重组中,当目的基因与载体末端不匹配时可采取的一新方法.用内切酶切取的基因片段为平端时,可在含dATP的反应体系中,用Taq酶的末端转移酶活性在其3′末端加上单个碱基(dA)的突出尾;基因片段为3′凹端时,可在含4种dNTP的体系中,利用Taq酶的聚合酶活性先将其末端补平,再经末端转移酶活性在其3′末端加dA尾;末端经此修饰的基因片段可亚克隆至T载体中,再克隆于其他表达载体中.     

乙型肝炎病毒聚合酶基因B区和C区序列的异质性

乙型肝炎病毒(HBV)聚合酶基因编码约816个氨基酸的多蛋白,其氨基端为末端蛋白,羧基端为RNA酶H,后者上游紧邻反转录酶/DNA聚合酶.通过计算机模拟分析将HBV聚合酶基因分为假想的A到E共5个区段.     

丙型肝炎病毒高变区基因变异特点初探

对两例ＨＣＶＲＮＡ持续阳性者分三个时间点随访五年,测定了ＨＣＶ的高变区基因序列,每个时间点平均测定２８个克隆,总共测定了１６８个克隆。研究发现ＨＣＶ高变区基因变异有五个明显特点：（１）变异程度大,高变区至少有８９％的核苷酸位点都可能发生变异;（２）变异形式多样,除常见的替代突变外,缺失突变（缺失１、２或３个核苷酸）的克隆数占总克隆数的２２．５％;（３）优势克隆明显,即有若干个克隆高变区的核苷酸和氨基酸序列相同;（４）类似株现象严重;（５）变异幅度大。该研究说明ＨＣＶ高变区基因变异具有高度复杂多样性。