基于微流控芯片的温度梯度毛细管电泳检测大肠癌石蜡标本中K-ras基因突变

K-ras基因突变检测可用于大肠癌的早期筛查与诊断,并有利于筛选出抗表皮生长因子受体靶向药物治疗有效的大肠癌患者,以实现肿瘤的个体化治疗．采用以倾斜式热辐射原理建立的微流控温度梯度毛细管电泳(temperature gradient capillary electrophoresis,TGCE)基因突变检测系统,实现了对98例石蜡包埋大肠癌组织中K-ras基因突变的高灵敏度筛查,突变阳性检出率为47.96%,显著高于PCR产物直接测序的23.47%．克隆测序显示该方法至少能检测到2.08%的K-ras基因突变体．K-ras基因突变与临床病理学参数的关系分析显示,直肠癌中K-ras基因突变率明显高于结肠癌(P < 0.05),而与年龄、性别、组织学类型和肿瘤分期等无显著相关性．该检测方法为肿瘤早期诊断和指导临床用药提供了一种灵敏度高、检测速度快、便于大规模筛查的有效手段.     

Ras信号通路通过激活转录因子Myc促进核内复制细胞生长

【目的】果蝇Ras信号通路在细胞增殖与生长过程中发挥着重要的作用。Myc基因是bHLH转录因子家族基因,可调控细胞生长、竞争和再生增殖等生理过程。本研究旨在明确Ras信号通路与Myc的关系,探索Ras信号调控核内复制细胞生长的作用机制。【方法】生物信息学分析转基因家蚕Bombyx mori后部丝腺Myc基因的转录水平,并通过qPCR验证;在黑腹果蝇Drosophila melanogaster Kc细胞中,分别转染pAc5.1-HisB-Ras~(V12)-V5或pAc5.1-HisB-Raf-Flag过表达Ras~(V12)或Raf后,通过qPCR和Western blot技术分别检测Myc基因在mRNA和蛋白水平的相对表达量;在黑腹果蝇幼虫脂肪体和唾液腺中,结合黑腹果蝇遗传工具和分子生物学手段,验证Ras信号通路对Myc基因的调控作用。【结果】家蚕后部丝腺过表达Ras1~(CA)上调Myc转录水平。激活Ras信号使得黑腹果蝇Kc细胞内Myc在转录水平和蛋白水平上的表达量上调;黑腹果蝇幼虫唾液腺和脂肪体中,游走期Myc基因的表达量高于取食期;过表达Myc或激活Ras信号可以促进细胞核内周期进程;激活Ras信号促进Myc表达。【结论】Ras信号通路激活Myc表达,促进细胞核内周期进程,促进器官发育。     

氨基酸生产的代谢工程研究进展与发展趋势

氨基酸发酵是我国发酵工业的支柱产业,近年来,随着代谢工程的快速发展,氨基酸的代谢工程育种蓬勃发展。传统的正向代谢工程、基于组学分析与计算机模拟的反向代谢工程以及借鉴自然进化的进化代谢工程,都有越来越多的应用。在氨基酸的工业生产中涌现出了一系列具有高效生产、抗逆性强等优良性状的菌株。日益剧烈的市场竞争对菌株的选育提出了新的要求,如开发高附加值氨基酸品种、菌株代谢的动态调控、适应新工艺的要求等。文中介绍了氨基酸生产相关的代谢工程研究进展以及未来的发展趋势。     

基于RNA-Seq分析Ras1~(CA)在家蚕后部丝腺过表达对细胞周期通路基因的影响

【目的】本文旨在挖掘野生型家蚕Bombyx mori和Ras1CA过表达转基因家蚕后部丝腺中的转录本差异,分析和验证细胞周期通路中的差异表达基因,从而探讨Ras1CA过表达转基因家蚕提高蚕丝产量的分子机制。【方法】利用转录组学比较野生型和Ras1CA过表达转基因家蚕后部丝腺中的基因转录本差异,经实时荧光定量PCR(q RT-PCR)验证。【结果】野生型家蚕和Ras1CA过表达转基因家蚕后部丝腺组织中有2 636个差异表达基因,其中细胞周期信号通路中有42个差异表达基因,包括细胞周期依赖性激酶(CDK)、细胞周期素(Cyclin)以及转录因子等。通过q RT-PCR检测cdk1、cyclin D1、cyclin D2、cdc7、cdh1、dp-1,2等6个基因在野生型和Ras1CA过表达转基因家蚕后部丝腺组织中的相对表达量,发现转基因家蚕中的表达量均显著高于野生型(P<0.05),其中cyclin D2的表达差异极显著(P<0.01)。q RT-PCR结果与转录本差异一致,表明Ras1CA过表达后,能够促进细胞周期通路基因的表达。【结论】野生型家蚕和Ras1CA过表达转基因家蚕后部丝腺中有大量差异表达基因,且Ras1CA能够在转录水平上调控细胞周期通路,影响后部丝腺组织的细胞分裂和器官生长,从而促进蚕丝蛋白的合成。     

谷胱甘肽对VC一步发酵作用的研究

谷胱甘肽（GSH）能有效促进酮古龙酸杆菌的生长。就GSH对氧化葡萄糖酸杆菌和酮古龙酸杆菌一步混菌发酵的作用进行了探索,为进一步阐明维生素C一步发酵过程中氧化葡萄糖酸杆菌和酮古龙酸杆菌的关系并提供发酵工艺优化的依据。研究发现,在5L的发酵罐中,外加1mg/ml的GSH对混菌的发酵有着显著的促进作用,2-酮-L-古龙酸（2-KGA）产量提高了22.8%。通过16S rDNA荧光定量PCR法测菌数,发现GSH的添加使酮古龙酸杆菌的生长提高到148%,但抑制氧化葡萄糖酸杆菌的生长,使其生物量下降到61%。运用代谢组学方法分析发现,GSH能促进酮古龙酸杆菌的磷酸戊糖、三羧酸循环、硫酸盐等代谢,同时减缓氧化葡萄糖酸杆菌对L-山梨糖的消耗,以促进整个混菌体系的发酵效率。     

景观格局变化下艾比湖湿地防风固沙功能及其价值评估

基于遥感数据、气象数据、土壤数据以及社会统计数据, 运用改进后的风蚀流失量模型定量评估了2010-2015 年艾比湖湿地不同景观格局变化下防风固沙功能。结果表明: ①景观动态度在2010-2015 年增减波动性最大, 以建设用地景观、滩地景观和沼泽地景观表现显著, 戈壁景观和沙地景观波动幅度最小; ②景观格局转移矩阵中, 2000-2010 年, 各景观类型出现不同程度的减少, 主要转向滩地景观, 2010-2015 年, 主要转向旱地农田景观; ③防风固沙价值量以旱地农田景观增长最显著, 较2000 年增加了3.01 倍; ④对比分析了改进后的风蚀流失量模型在本研究区的适用性, 结果较好, 表明植被覆盖度与防风固沙量存在显著相关性, 随着时间的推移, 各景观格局类型受人为活动影响加大, 林地景观的防风固沙机能在减弱, 而盐碱地景观则在增强。     

葡萄VvBAP1基因的克隆及表达特性分析

以抗性葡萄品种‘F-242’组培苗为材料, 利用同源克隆法克隆了葡萄VvBAP1基因。测序结果显示, VvBAP1扩增片段大小为531 bp, 可编码176个氨基酸序列。利用生物信息学分析VvBAP1基因编码的蛋白序列显示, 该蛋白分子量为19.43 kDa, 含有保守的钙离子依赖性的C2结构域; 等电点pI为9.42; 不稳定系数为37.09, 推测为稳定的亲水性蛋白; 含有多个丝氨酸/苏氨酸磷酸化位点。实时荧光定量PCR表明, 该基因在根茎叶中均有表达, 其中在叶片中表达量较高; 盐胁迫、低温等逆境因子及逆境相关的信号物质, 如水杨酸和一氧化氮均可诱导VvBAP1的表达, 其中低温对其表达量影响更为显著, 推测该基因参与了葡萄抵御逆境胁迫的过程, 尤其是与低温相关的过程。     

毫火针联合补肾活血方对寻常型白癜风患者外周血炎性因子和免疫指标的影响

目的:探讨毫火针联合补肾活血方对寻常型白癜风患者外周血炎性因子和免疫指标的影响。方法:选取2017年3月2019年7月期间我院收治的寻常型白癜风患者75例,根据随机数字表法分为对照组(n=37)和观察组(n=38),对照组予以常规治疗和补肾活血方,观察组在对照组的基础上联合毫火针治疗,比较两组疗效、白癜风皮损面积、炎性因子[白介素-17(IL-17)、白介素-10(IL-10)、白介素-22(IL-22)]和免疫指标[粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、CD4⁺CD25⁺Treg]水平,记录两组治疗期间不良反应情况。结果:观察组治疗12周后的临床总有效率高于对照组(P<0.05)。两组白癜风皮损面积均较治疗前缩小,且观察组小于对照组(P<0.05)。两组患者治疗12周后血清IL-17、IL-22、GM-CSF水平降低,且观察组低于对照组(P<0.05);IL-10、CD4⁺CD25⁺Treg比例水平升高,且观察组高于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:毫火针联合补肾活血方治疗寻常型白癜风的疗效显著,可有效提高患者的免疫功能,抑制炎性反应,改善患者临床症状,且用药安全性较好。     

右美托咪定联合瑞芬太尼对老年内镜逆行胰胆管造影术患者血流动力学、应激反应和认知功能的影响

摘要 目的：观察右美托咪定联合瑞芬太尼对老年内镜逆行胰胆管造影术（ERCP）患者血流动力学、应激反应和认知功能的影响。方法：依据随机数字表法,将南京大学医学院附属南京鼓楼医院于2019年4月~2022年7月期间收治的82例老年ERCP患者分为对照组（n=41,丙泊酚乳状注射液及注射用盐酸瑞芬太尼麻醉）和观察组（n=41,盐酸右美托咪定注射液联合注射用盐酸瑞芬太尼麻醉）。对比两组血流动力学、应激反应、镇静镇痛情况、认知功能、不良反应。结果：观察组睫毛反射消失时（T1）~退镜（T4）时间点心率（HR）、平均动脉压（MAP）低于对照组（P<0.05）。观察组术后3 d（T5）~术后1周（T6）时间点,肾上腺素（E）、促肾上腺皮质激素（ACTH）及皮质醇（COR）低于对照组（P<0.05）。观察组术后6 h Ramsay镇静评分高于对照组,视觉疼痛模拟量表（VAS）评分低于对照组（P<0.05）。观察组的认知功能障碍（POCD）发生率低于对照组（P<0.05）。观察组T5时间点简易精神状态检查表（MMSE）评分高于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率组间比较无差异（P>0.05）。结论：右美托咪定联合瑞芬太尼用于老年ERCP患者具有良好的镇静镇痛作用,能有效改善血流动力学,减轻应激反应,提升认知功能,且具有较好的安全性。