改良的蛋白质电泳考马斯亮蓝染色方法研究

旨在建立简便、经济、灵敏以及质谱兼容的蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳染色法,在胶体考染(Blue Silver)配方(0.12%的考马斯亮蓝G-250,10%的磷酸,10%的硫酸铵,和20%的甲醇)的基础上,通过优化凝胶固定时间与染色液中各物质用量,得到改良的染色液配方(0.1%的考马斯亮蓝G-250或R-250,5%的磷酸,5%的硫酸铵,10%的甲醇)及简便的操作步骤。试验对比结果显示,改良方法一与胶体考染相比仍保持了较高的染色灵敏度以及较好的质谱兼容性,且有机试剂使用量更少,染色深度与蛋白质量的线性关系也更好。     

DNA提取方法对苎麻脱胶菌群PCR-DGGE结果偏移的影响

为筛选和优化出较适宜的苎麻脱胶菌群DNA提取方法,本文分别以来自苎麻沤麻环境的6种纯培养菌等丰度混合物和苎麻自然沤麻菌群为材料,研究"溶菌酶-SDS"法、"超声波-溶菌酶-SDS"法、"蛋白酶K-SDS"法以及"冻融-蛋白酶K-SDS"法4种DNA提取方法对菌群16Sr DNA基因PCR-DGGE偏移结果的影响。结果表明,4种方法均能从2类材料中提取出了超过1600ng/μL的DNA,不同方法之间DNA产率略有差异,经过超声波处理或反复冻融处理的DNA有明显的降解,但4种方法提供的DNA模板均扩增出了450bp的16Sr DNA基因片段。4种DNA提取方法对DGGE结果有明显影响,且只有"冻融-蛋白酶K-SDS"法检测到了纯培养菌混合物中的全部6种细菌,4种方法获得的自然沤麻菌群的DGGE指纹图谱也明显不同,最多产生17条带("冻融-蛋白酶K-SDS"法),最少只有9条带("溶菌酶-SDS"法),增加超声波或冻融等物理处理可以使部分弱带变强。因此,组合应用物理、生物和化学等细胞裂解方法可以提供更有代表性的DNA,可减少PCR-DGGE结果的偏移。