一种改良的肌细胞骨架染色方法

为了观察肌细胞骨架,对传统考马斯亮蓝染色法进行改良,并与免疫荧光染色法进行了比较。培养的血管平滑肌细胞先用多聚甲醛预固定后再进行考马斯亮蓝染色,可使细胞骨架非常清晰的显色,解决了传统考马斯亮蓝染色易使肌细胞变形、脱片的问题,其效果与免疫荧光染色相近。因此,多聚甲醛预固定．考马斯亮蓝染色法是一种适于肌细胞骨架染色的简便方法。     

低毒高效的SDS-PAGE考马斯亮蓝染色方法比较

目的:比较SDS-PAGE的4种考马斯亮蓝染色方法。方法:以牛血清白蛋白为材料进行SDS-PAGE,分别比较考马斯亮蓝G-250(CBB G-250)盐酸法、CBB G-250-Al2(SO4)3法、Bio-Rad公司的Bio-Safe染色液及传统法等4种染色方法的灵敏度和操作性,并将上述4种染色方法应用于蛋白Markers检测。结果:CBB G-250-Al2(SO4)3法和Bio-Safe法的检测灵敏度都可达19.2 ng,而CBB G-250盐酸法和传统法的检测灵敏度则为28.9 ng。结论:CBB G-250盐酸法可作为快速、低毒、高效的染色方法,CBB-Al2(SO4)3法则可用于灵敏度要求较高的检测。     

蛋白质组学实验中聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色

在蛋白质组学实验中,蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳后的染色是一个十分重要的环节。鉴于其良好的质谱兼容性和操作上的便捷,考马斯亮蓝染色是目前众多实验室中最常用的染色方法。本文介绍了四种各具特色的考马斯亮蓝染色方法。     

考马斯亮蓝G-250染色法测定柠条锦鸡儿种子中可溶性蛋白含量

目的:建立快速、灵敏的蛋白质含量测定方法,对柠条锦鸡儿种子中可溶性蛋白质含量进行测定;方法:运用超声与研磨两种方法提取柠条锦鸡儿种子中的可溶性蛋白,采用考马斯亮蓝G-250染色法对其进行测定;结果:超声提取与研磨提取得到可溶性蛋白含量分别为6.91%、6.87%,RSD分别为0.72%,0.67%;结论:考马斯亮蓝G-...     

考马斯亮蓝显色液组分对蛋白质测定的影响

考马斯亮蓝（CBB）显色法测定蛋白质含量的主要缺点之一是线性关系差．通过研究显色液组分对线性关系的影响,发现显色液H⁺浓度是影响线性关系的主要因素,并提出了一个新的显色液配方来改善考马斯亮蓝蛋白质测定法的线性关系．     

蛋白负染方法在蛋白质组学中的应用评价

为评价蛋白质负染方法在蛋白质组学分析中的应用,采用负染和考马斯亮蓝染色两种方法对同一样品的双向电泳胶进行染色,取相对应的8对蛋白点,并进行胶内酶解及MALDI-TOF/TOF分析,比较两种方法与质谱的兼容性。图像分析显示,负染方法展示出的蛋白点更多,但三维峰图不如考染明晰;质谱结果显示,8个负染蛋白点中有7个鉴定结果有效,8个考染蛋白点鉴定结果均有效。因此可以得出以下结论:负染的灵敏度高于考染,与质谱的兼容性良好,适用于建立双向电泳参考图谱的研究;但负染后的胶图不适于进行蛋白点丰度对比分析。     

2002年生物奥赛冬令营实验试题（续）

(二)生物化学部分一、蛋白质含量测定蛋白质含量测定有许多方法,考马斯亮蓝(G-250)比色测定是最灵敏的方法之一。考马斯亮蓝可与蛋白质通过氢键结合生成复合物,结合符合比尔定律。结合前颜料为红色,结合后为蓝色,最大光吸收由465nm转变成595nm。通过测定595nm处最大光吸收的增加,可知结合蛋白质的量。蛋白质和染料结合是一个快速的过程,两分钟内即可完成,并可稳定1小时,测定范围在10—100μg/ml蛋白质之间为线性范围,去污剂有颜色干扰,可影响比色结果。本实验是利用考马斯亮蓝与不同量蛋白质的标准曲线来目测未知蛋白质溶液的蛋白质含量,并…     

一种转移非特异性蛋白带的染色方法

考马斯亮蓝是常用的聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳的染料,利用硝酸纤维素膜(NCF)对染料的吸附作用,将低浓度的考马斯亮蓝(0.025%)染色液直接对NCF上的转移蛋白带进行染色,经实验反复验证.它是一种较好的NCF上转移非特异性蛋白带的染色方法.     

一种简便的考马斯亮蓝G250蛋白质染色方法

介绍一种快速、简便、几乎无背景的考马斯亮蓝G250(CBB G250)染色方法.该方法所用试剂仅为稀盐酸和CBB G250, CBB G250的工作浓度为0.0015%,灵敏度达0.02 μg/带, 染色2 h达70%,4 h以上或染色过夜即可充分染色.与以往的考马斯亮蓝染色方法相比,该方法有经济方便、灵敏度高、几乎无背景等优点,便于推广应用.     

蛋白质定量方法的进展

本文在简要比较常用蛋白质定量方法的基础上,结合自己的工作,选择性地叙述了Lowry法、考马斯亮蓝G-250染料测定蛋白质的改进法。还介绍了银染色定量法和4-甲酸喹啉测定蛋白质含量的新方法。     

聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质快速染色的改良法

聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质的染色常采用考马斯亮蓝R250为染料进行染色,此法不仅操作繁琐、费时,而且由于需要脱色,很容易将一些染色较弱的蛋白区带颜色褪去,使之不能观察,灵敏度只能达到0.25μg。Reisner等人报道了以考马斯亮蓝G250为染料的快速简便染色方法,它能迅速地观察到凝胶中     

考马斯亮蓝—银染色法——一种更灵敏的凝胶蛋白质染色法

我们曾报道一种重复性好而灵敏的电泳凝胶蛋白质染色法。其后发现银染色法虽然灵敏,但有一定的选择性,某些蛋白不易被银染色着色。若将考马斯亮蓝染色与银染色相结合,则可弥补彼此弱点,而且可提高灵敏度,是一种较为理想的凝胶蛋白质染色法。一、材料与方法(一)试剂丙烯酰胺、双丙烯酰胺、SDS 为国产品,均重结晶后使用;考马斯亮蓝 G—250及戊二醛(Fluka 产品);硝酸银 GR 级(西安化学试剂厂产品);Ampholine(LKB 产品);尿素     

考马斯亮蓝染色双向电泳凝胶胶内酶切方法的改进

介绍一种简便高效的从考马斯亮蓝染色的双向电泳凝胶切取蛋白质点,通过胶内酶切制备基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI—TOF-MS)样品的方法。该方法操作简便,样品的质谱鉴定结果经网上数据库检索检出率可高达80％以上,适于我国目前小规模蛋白质组学研究的国情,便于推广应用。     

用染色法鉴别蛋白质晶体

本文报导了蛋白质晶体能被汞溴酚蓝、氨基黑10B和考马斯亮蓝R250或G250染色,而无机盐晶体不被染色.结晶学家可用此法鉴别蛋白质晶体.     

帕金森病和正常人外周血单个核细胞的蛋白质组差异分析

目的:通过研究帕金森病和正常外周血单个核细胞(PBMC)的蛋白质组差异,初步探讨外周免疫系统与帕金森病的病理联系.方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳分离人帕金森病和正常单个核细胞总蛋白质,考马斯亮蓝染色,PDQuest 2-DE软件分析,对部分差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱,用Mascot查询系统查询SWISS-PROT数据库.结果:获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳考染图谱,对其中的21个差异蛋白质点分别进行肽质指纹分析,经数据库查询,初步鉴定为一些与蛋白降解、抗氧化应激、信号转导、细胞骨架、细胞周期调控等有关的蛋白质.结论:建立了帕金森病PBMC的双向凝胶电泳图谱,提示帕金森病和正常的PBMC的蛋白质表达具有差异.     

检测聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质的3种染色方法比较

用考马斯亮蓝染色、银染色、铜染色等 3种方法对同一种蛋白质染色的灵敏度、快速性进行比较 ,得出 3种蛋白质染色方法的优缺点 ,为蛋白质电泳染色合理选用不同方法提供依据     

聚丙烯酰胺凝胶的蛋白质荧光染色法

十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE),经常用于分离、鉴定蛋白质,测定肽链分子量。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳后,一般用考马斯亮蓝法染色,其优点是操作简易,灵敏度较高。据我们的经验,最低检出量约为每一蛋白带0.5μg。此法的缺点是费时,染色及脱色要一昼夜,且染色后,许多蛋白质丧失抗原性及其它生物学活性。最近我们研究出蛋白质PAGE的荧光染色法,蛋白质样品在上胶前用荧光素标记,电泳后可立即在紫外光灯下看到清晰的蛋白带,其灵敏度不低于考马斯亮蓝法。现介绍如下。一、样品的荧光标记蛋白质样品用牛血清白蛋白(68,000)、卵白蛋白(44,000)、肌红蛋白(16,800)、溶菌酶(14,600)的混     

一种利于蛋白质回收的快速SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色-脱色方法

在实践基础上摸索出一种快速并有利于蛋白质回收的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色-脱色方法：经常用的考马斯亮蓝R-250染色液短暂染色后直接用250 mmol/L KCl溶液脱色.这种方法染色-脱色的清晰程度与常规的染色-脱色方法接近,而且能使蛋白质回收率提高三倍多.     

一种简易的聚丙烯酰胺凝胶脱色方法

PAGE是蛋白质分析、比较和特性鉴定的有效方法,常规SDS-PAGE分析蛋白过程中考马斯亮蓝色素脱除过程耗时低效。改变脱色液配方,使用20%的乙醇和10％冰醋酸作为脱色剂,在脱色液中放置3-5片纸巾吸附色素,并在脱色过程中换纸1-2次,可缩短脱色时间3-4h,减少脱色液用量2-3倍。     

桔小实蝇幼虫总蛋白双向电泳技术体系的建立和优化

【目的】建立和优化桔小实蝇幼虫Bactrocera dorsalis(Hendel)总蛋白的双向电泳条件。【方法】使用BPP法和3种TCA-丙酮法(TCA-丙酮-A法:直接加入裂解液磨样;TCA-丙酮-B法:样品提取液中加入40 mmol/L DTT;TCA-丙酮-C法:样品提取液中加入0.07%β-巯基乙醇)提取桔小实蝇幼虫总蛋白;使用13 cm和24 cm p H 4~7的IPG胶条分离桔小实蝇幼虫总蛋白;使用考马斯亮蓝法及硝酸银染色法对双向电泳凝胶进行染色;使用5800 MALDI-TOF-TOF MS/MS质谱分析仪对BPP法获得的特异蛋白进行质谱鉴定,并将检索数据库物种分别设为Metazoa(Animals)与Drosophila(Fruit flies)进行数据库检索。【结果】TCA-丙酮法中,TCA-丙酮-C法提取效果最好,BPP法优于所有TCA-丙酮法;使用考马斯亮蓝染色与硝酸银染色效果相当;使用24 cm胶条的蛋白分辨率明显高于13 cm胶条;检索数据库物种设为Metazoa(Animals)可获得比Drosophila(Fruit flies)更加全面的信息。【结论】使用24 cm p H 4~7的IPG胶条对BPP法提取的桔小实蝇幼虫总蛋白进行双向电泳,采用考马斯亮蓝法对双向电泳凝胶进行染色,可得到更好的双向电泳图谱,检索数据库时检索物种可优先设为Metazoa(Animals)。