不同ES细胞系体定量神经分化的比较

利用视黄酸（RA）诱导小鼠胚胎干细胞通过悬浮类胚培养体外定量分化为神经样细胞,结果显示能够进行种系嵌合的MESPU22细胞系与不能进行种系统嵌合的MESPU13细胞系的体外神经分化比例在统计学上没有明显差异,此结果对于人的胚胎干细胞全能性的鉴定和检测有重要启示。     

对小鼠ES细胞进行特异性的标记

虽然ES细胞技术的应用十分广泛,对ES细胞多能性本质的研究还不是很深入,体外培养的ES细胞群体的不均一性加大了这方面研究的难度,报道了对ES细胞中特异表达的基因,将报告基因βgeo插入oct-基因转录元件中构建了标记载体pG18NG,转染ES细胞MESPU22和MESPU13后获得了稳定整合的细胞克隆,经体外培养、诱导分化、嵌入体制作等实验,证明利用该载体对ES细胞中的未分化细胞成功进行了标记,该标记在体内、体外都是有效的。     

具高效种系嵌合能力的C57BL／6J 小鼠ES细胞系的建立

采用小鼠原代成纤维细胞作为饲养层,在含1×103单位白血病抑制因子（LIF）的DMEM高糖培养基中,建成了11个C57BL／6J小鼠的ES细胞系,成系率为9．6％。所建的11个ES细胞系中有5个核型正常率大于70％。这些细胞具早期胚胎细胞的特征,呈碱性磷酸酶阳性,具表达0014基因的特性5进行体内分化实验时能发生广泛的分化。通过嵌合体制作实验证明其中3个系具嵌合能力,并从中筛选出具高效种系嵌合能力的MESPU35细胞系,MESPU35细胞的克隆能达到种系传递,经过基因操作的细胞克隆,也保留了高效的嵌合能力。因此,MESPU35细胞可作为制作突变小鼠的有效载体。     

RNA/DNA嵌合分子介导的高效基因修复

本文介绍了RNA/DNA嵌合分子介导的高效基因修复技术。这一技术是1996年开始发展起来的全新技术,它通过人工合成的双链开环RNA/DNA嵌合分子转染细胞而使特定基因靶位点产生单碱基改变,从而修复突变基因。这一技术高效（目前最高可达50％以上）、特异性强、安全、无随机插入致变的危险、无免疫反应、无明显毒性,能够用于定点突变、基因敲除、动植物功能基因组学、药物遗传学等很多方面的研究,在不久的将来能够应用于人类基因治疗,具有很高的应用价值和医学前景。 Abstract：We introduce a new technique?targeted gene correction directed by chimeric RNA/DNA oligonucleotides which began at 1996.It uses synthetic double?stranded non?circular RNA/DNA chimeric oligonucleotides to transfect cells and make a single?based change at the targeted site of the target gene.It is highly efficient (the highest efficiency is more than 50％),highly special,safe,without danger of mutation caused by random insertion,without immune response,and without obvious toxicity.It can be used to make point mutation,or gene knock?out plants and animals,and is very likely to be used in human gene therapy in the near future.It is also valuable in the study of functional genomics,pharmacogenetics,and medicine.     

不同ES细胞系体外定量神经分化的比较

利用视黄酸(RA)诱导小鼠胚胎干细胞通过悬浮类胚培养法体外定量分化为神经样细胞.结果显示能够进行种系嵌合的MESPU22细胞系与不能进行种系嵌合的MESPU13细胞系的体外神经分化比例在统计学上没有明显差异.此结果对于人的胚胎干细胞全能性的鉴定与检测有重要启示。 Abstract: Murine embryonic stem cells were induced to differentiate into neuron-like cells by all-trans Retinotic Acids through embryoid body culture. The results indicate that there is no obvious difference between MESPU22 cell line which is highly germline competent and MESPU13 cell line which has no germline competence. The result has important illumination on the identity of the totipotence of human embryonic stem cells.     

C57BL／6J小鼠ES细胞系的建立及其特性分析

本文报道从C57BL/6J个鼠的囊胚中,建立了三个ES细胞系MESPU17,MESPU18,MESPU19。这些细胞的细胞学特征和强AKP反应,表明这三个细胞系具有干细胞的特征。这三个细胞系均为XY型,正常二倍体核型分别占70％、88％和59％。体外分化可形成简单类胚,体内分化可形成瘤块。与国际上通用的CCE和来自129/ter的ES细胞MESPU13相比,这三个细胞系的ES细胞较大;在体外培养时,生长较慢;细胞也较粘,进行显微注射时,很容易粘在注射针壁上。MESPU17,MESPU18进行了嵌合体制作,以BALB/c和昆明鼠的囊胚为受体,采用囊胚注射法未获嵌合体,但使用昆阴鼠的8细胞胚注射法和共培养法得到嵌合体。     

小鼠ES细胞种系嵌合体的获得

种系嵌合体的获得是实现ＥＳ细胞介导的转基因途径的决定步骤,ＥＳ细胞种系分化能力的保持是决定种系嵌合的前提条件,而事体的主种系嵌合体的获得则是判定ＥＳ细胞系是否具有种系分化能力的唯一方法,为考察本室新近建立的３种小鼠ＥＳ细胞系ＭＥＳＰＵ２１．ＭＥＳＰＵ２２和ＭＥＳＰＵ２９的种系分化能力,选用近交系Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ及远交系ＫＭＷ和ＩＣＲ为受体胚胎提供者,分别通过囊胚注射法和８细胞期桑椹胚注射法进行了嵌     

两个可进入种系的ES细胞系的建立

从１２９／ｔｅｒ小鼠中建立了９个ＥＳ细胞系,它们在核型、生长速度、体内外分化能力等方面显示了各自不同的特点。通过囊胚显微注射法,将ＥＳ细胞注入Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ胚胎中,制作了嵌合体,并通过对嵌合体后代毛色的观察,判断了嵌合体生殖细胞的组成。结果表明,ＥＳ细胞系ＭＥＳＰＵ２１、ＭＥＳＰＵ２２都具有很强的种系嵌合能力。比较这两个细胞系与其他细胞系,证明一个好的ＥＳ细胞系必须具备核型正常、生长速度快、体外     

小鼠生殖细胞的胚胎发育

本文综述了近年来小鼠胚胎发育过程中生殖细胞的起源、迁移与增殖、性别分化及其基因组修饰等方面的研究进展。小鼠生殖细胞在7~7.5dpc时由原始生殖细胞（PGC）演变而来,至12.5dpc时PGC全部迁移进入生殖嵴,到13.5dpc时停止分裂。Steel/c-kit信号途径在PGC迁移过程中起重要作用。生殖细胞的性别主要是由生殖腺中体细胞的微环境决定的。Y染色体上存在精子形成所必需的基因。生殖细胞的全基因组范围的重新甲基化晚于胚胎体细胞的重新甲基化,到18.5dpc时才完成。雌性生殖细胞的X染色体重新活化在14.5~15.5dpc时完成,并且与生殖嵴的性别分化无关。 Abstract:This paper reviewed the recent progress of the origin,migration and proliferation,sex determination,and genomic modification of murine germ cells during its embryonic development. Murine germ cells originate from primordial germ cells at about 7~7.5dpc. Then PGCs migrated into germinal ridge at about 12.5dpc during which Steel/c-kit signal pathway plays important roles and stopped division at 13.5dpc. The sex of germ cells was mainly determined by the soma microenvironment in the gonad. And there are essential genes for sperm formation on the Y chromosome. The de novo methylation of murine germ cells was much later than soma cells and was completed at about 18.5dpc. The X chromosome reactivation of female germ cells was finished at about 14.5~15.5dpc which was independent of sexual differentiation of germinal ridge.