神经脊来源许旺细胞的体外培养研究

目的:探讨坐骨神经中神经脊来源的许旺细胞所占的比率。方法:将Wnt1-Cre+/-与Rosa-EGFP+/-小鼠杂交,获取Wnt1/EGFP小鼠,其所有起源于神经脊的细胞都有EGFP蛋白表达。取其坐骨神经,经过消化分离纯化,获得许旺细胞。进行抗GFP免疫荧光染色和流式分析的检测。结果:根据P1代许旺细胞的形态学观察,其纯度约为60%。抗GFP免疫荧光染色显示,并非所有的许旺细胞均呈阳性。P3代许旺细胞的纯度约为99%,流式细胞术分析显示约65%左右的GFP阳性率。结论:小鼠坐骨神经中的许旺细胞在体外培养提纯后,神经脊起源的许旺细胞占总许旺细胞的比例约为65%。     

茶树胞质型苹果酸脱氢酶的原核表达及生物信息学分析

利用RT-PCR及cDNA末端快速扩增法,获得了完整的茶树细胞质苹果酸脱氢酶(cMDH)基因Cs-cMDH(GonBank登录号为GQ845406).该基因全长1 235 bp,编码332个氨基酸,分子量约为35.5kD.含重组质粒pGEX-MDH的E.coli Rosetta经0.5 mmol·L~(-1) IPTG于32℃诱导3 h后可以获得大量可溶性的61.5 kD融合蛋白.NCBI的BLAST结果显示,Cs-cMDH与高等植物cMDH的氨基酸序列一致性高达88%～93%.通过基于蛋白质结构的多序列比对,预测Cs-cMDH为二聚体,每个亚基包含13个β-折叠及13个a-螺旋.Cs-cMDH包含典型的MDH"指纹"(fingerprint)序列G~(12)AAGQIG~(18),其氨基酸残基D43在所有NAD-MDH中都很保守.Cs-cMDH还包含一些与其它NAD-MDHs同源的保守序列单元,如NAD+结合位点、催化模体及底物结合位点.而且Cs-cMDH还包含在所有植物NAD-cMDHs中都相当保守的6个Cys,因此我们推断Cs-cMDH为茶树细胞质NAD-MDH.茶树基础代谢相关基因cMDH的克隆和原核表达为Cs-cMDH的功能研究奠定了基础.     

脂肪干细胞上清液培养雪旺细胞的实验研究

目的:研究应用脂肪干细胞上清液培养新生小鼠雪旺细胞的可行性。方法:取新生(出生5-7天)C57BL/6小鼠的坐骨神经,采用0.2%的复合胶原酶NB4消化法分离获取细胞,然后应用雪旺细胞条件培养基(SCCM)和C57BL/6小鼠的脂肪干细胞上清液(ADSC-CM)分别培养雪旺细胞。用0.2%复合胶原酶NB4差速分离纯化这两种方法培养的雪旺细胞,每48 h纯化1次,共进行2次纯化。应用P75免疫荧光染色方法鉴别两组P2代雪旺细胞并比较两组雪旺细胞的纯度和生长情况。结果:脂肪干细胞上清液培养的雪旺细胞纯化两次后,数量明显增多,其纯度与雪旺细胞条件培养基相比没有明显差异(P0.05)。结论:脂肪干细胞上清液可以较好的培养雪旺细胞,可以作为一种新的廉价方便的培养基代替雪旺细胞条件培养基来培养许雪旺细胞。     

毛酸浆(Physalis pubescens)花形态特征与小孢子发育

许多重要蔬菜和水果隶属于茄科(Solanaceae),植物花发育是物种延续和产品形成关键决定因子。茄科毛酸浆(Physalispubescens)是药食同源半野生浆果,目前其花发育研究不多。为了从不同视角了解茄科植物花发育,本研究采用比较生物学方法从花的形态特征和解剖学层面解析了毛酸浆(P.pubescens)和茄科模式植物番茄(Solanum lycopersicum var. cerasiforme)花器特征和小孢子发育进程。结果显示,开花后毛酸浆花萼迅速生长包被果实、花瓣有紫色斑纹、花药顶颈可育及背部开裂散粉特征与番茄花萼生长缓慢、黄色花瓣、花药顶颈不育及腹缝开裂散粉方式截然不同,展示了茄科植物遗传多样性。毛酸浆小孢子发育,在“四分体”之前迟于番茄,而“四分体”之后期却快于番茄。特别是番茄药隔组织在“四分体”时期开始向药室异常内突,并在花粉成熟期占据药室近1/2空间,而未在毛酸浆中观察到。该研究为开发茄科新的模式植物和从不同视角理解庞大茄科植物花发育提供了重要信息。     

体外培养过程中许旺细胞S100表达规律研究

目的：目前研究发现,周围神经中许旺细胞的标志物有很多,S100是其中之一。S100在体内表达的变化规律已有比较深入的研究,但是其在体外培养的许旺细胞的表达规律尚不清楚。因此,本课题研究小鼠许旺细胞在体外培养过程中S100蛋白的表达变化规律。方法：取新生（出生5-7 d）C57BL/6小鼠的坐骨神经,酶消化分离获取细胞后,培养纯化扩增3次。用S100免疫荧光法及RT-PCR技术研究许旺细胞在体外培养过程中S100的表达规律。结果：从坐骨神经消化所得到的许旺细胞,早期并不都表达S100,阳性率约为43.48%,随着培养时间延长（培养8天）,所有许旺细胞均表达S100,能够达到阳性率95.66%。结论：体外培养的许旺细胞,其标志物S100阳性率表达随培养时间延长而增加。并且我们发现,S100并不能作为一个可靠的标志物来单独应用鉴定体外培养早期的许旺细胞。     

拇指掌侧动脉的解剖分型及其临床意义

目的:观察拇指掌侧动脉起源、走行及其共干情况,探讨其分型特征。方法:72例手部血管标本,其中实体标本46例(左27例,右19例),铸型标本26例(左12例,右14例),观察拇指掌侧动脉即拇指桡掌侧固有动脉和拇指尺掌侧固有动脉的起源,走行及其共干情况并统计分析。结果:根据拇指掌侧动脉即拇指桡掌侧固有动脉与拇指尺掌侧固有动脉共干情况,将其分为2型,分别是Ⅰ共干型(32例,44.44%),Ⅱ不共干型(40例,55.56%)。根据拇指掌侧动脉的血供来源,Ⅰ共干型又分为3个亚型,分别为:a.共干-掌浅弓型(3例,4.17%),b.共干-掌深弓型(26例,36.11%),c.共干-桡动脉掌浅支型(3例,4.17%);Ⅱ不共干型又分为2个亚型,分别为:a不共干-掌浅弓、掌深弓型(27例,37.50%),b不共干-第一掌背动脉、掌浅弓型(13例,18.06%)。结论:根据拇指掌侧动脉即拇指桡掌侧固有动脉与拇指尺掌侧固有动脉共干情况及其动脉来源将其分为2型5个亚型。对拇指掌侧动脉进行分型可以充分了解拇指掌侧动脉的起源及走行变异,丰富解剖学资料,为临床拇指再植再造术提供解剖学基础。     

钙与脱落酸对干旱胁迫下黄瓜幼苗光合及相关酶活性的影响

为探讨在干旱胁迫下钙与脱落酸对黄瓜幼苗光合作用及相关酶活性的影响,以黄瓜为试材,正常营养液栽培为对照,利用PEG-6000(聚乙二醇)营养液添加模拟干旱胁迫,设干旱胁迫条件下幼苗叶片喷施清水、脱落酸(ABA)、CaCl₂+ABA、LaCl₃(钙离子通道抑制剂)+ABA及EGTA(钙离子螯合剂)+ABA等5个处理.结果表明: 干旱胁迫抑制了黄瓜幼苗的营养生长、降低了幼苗叶片的抗氧化酶和硝酸还原酶活性,以及光合作用和荧光参数等,通过叶面喷施ABA减小了幼苗叶片中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性,以及光合作用(P_n、g_s)和荧光参数(F_v′/F_m′、q_P和ETR)的下降幅度,有效缓解了干旱胁迫对植株造成的伤害;喷施CaCl₂+ABA显著促进了ABA的这种正向缓解作用,而喷施LaCl₃+ABA和EGTA+ABA都没有表现出促进作用.