| 茶树胞质型苹果酸脱氢酶的原核表达及生物信息学分析 |
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| 引用本文： | 陈露露,翟羽佳,王鹏,王晖,郝家胜,朱国萍.茶树胞质型苹果酸脱氢酶的原核表达及生物信息学分析[J].云南植物研究,2010,32(1):32-40. |
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| 作者姓名： | 陈露露 翟羽佳 王鹏 王晖 郝家胜 朱国萍 |
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| 作者单位： | 1. 安徽师范大学生命科学学院分子进化与生物多样性重点实验室,安徽,芜湖,241000
2. 安徽师范大学生命科学学院分子进化与生物多样性重点实验室,安徽,芜湖,241000;生物环境与生态安全安徽省高校重点实验室,安徽,芜湖,241000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（30500300;30870062）; 教育部新世纪优秀人才支持计划（NCET-06-0558）; 教育部留学回国人员启动基金; 安徽省优秀青年科技基金（06043089;08040106811）; 重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室资助 |
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| 摘 要： | 利用RT-PCR及cDNA末端快速扩增法,获得了完整的茶树细胞质苹果酸脱氢酶(cMDH)基因Cs-cMDH(GonBank登录号为GQ845406).该基因全长1 235 bp,编码332个氨基酸,分子量约为35.5kD.含重组质粒pGEX-MDH的E.coli Rosetta经0.5 mmol·L~(-1) IPTG于32℃诱导3 h后可以获得大量可溶性的61.5 kD融合蛋白.NCBI的BLAST结果显示,Cs-cMDH与高等植物cMDH的氨基酸序列一致性高达88%～93%.通过基于蛋白质结构的多序列比对,预测Cs-cMDH为二聚体,每个亚基包含13个β-折叠及13个a-螺旋.Cs-cMDH包含典型的MDH"指纹"(fingerprint)序列G~(12)AAGQIG~(18),其氨基酸残基D43在所有NAD-MDH中都很保守.Cs-cMDH还包含一些与其它NAD-MDHs同源的保守序列单元,如NAD+结合位点、催化模体及底物结合位点.而且Cs-cMDH还包含在所有植物NAD-cMDHs中都相当保守的6个Cys,因此我们推断Cs-cMDH为茶树细胞质NAD-MDH.茶树基础代谢相关基因cMDH的克隆和原核表达为Cs-cMDH的功能研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 茶树 胞质型苹果酸脱氢酶 RT-PCR cDNA末端快速扩增法 序列分析 二级结构 |
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