Nmi及其变异体在大肠杆菌中表达、抗体制备及其细胞分布

 为了检测细胞内源性Nmi和变异体Nmi s的表达、亚细胞分布以及可能形成的信号转导蛋白复合物 ,成功构建并表达了异源Nmi和Nmi s 获得纯化异源蛋白 ,用以制备兔源抗Nmi(Nmi s)多克隆抗体 .Western印迹在多种细胞株HL 60 ,K562 ,2 93T细胞中检测到Nmi(Nmi s)高表达 .在不同的细胞系中 ,Nmi表现为不同的蛋白复合物迁移带 ;Nmi(Nmi s)在胞浆和胞核均存在 ,而核内荧光更强 .Nmi(Nmi s)通过与多种蛋白相互作用行使其生物学功能 ,在不同细胞中可能与不同的蛋白相互作用 ,发挥不同的功能 .     

BCL-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸对原代急性白血病细胞选择性抑制作用

为探讨BCL-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(AS-PS-ODN,ASPO)对急性原代白血病细胞和正常或良性血液病骨髓细胞的作用是否存在差别。应用台盼蓝拒染试验测定细胞存活力;用造血祖细胞集落培养:粒—单系祖细胞集落(CFU-GM),多向祖细胞集落(CFU-Mix),后红系祖细胞集落(CFU-E)、前红系祖细胞集落(BFU-E)和白血病祖细胞集落(CFU-AML,CFU-ALL)培养检测细胞增殖能力;免疫细胞化学染色检测细胞BCL-2蛋白表达变化。结果发现(1)正常或良性血液病骨髓细胞经10μmol/L ASPO处理一周,同对照组比较:细胞生长数、CFU-GM、CFU-Mix、CFU-E、BFU-E及BCL-2蛋白表达均无显著差别(P<0.05)。(2)急性原代白血病细胞经5μmol/L ASPO处理一周,同对照组比较:细胞生长数显著减低;CFU-AML或CFU-ALL显著降低(P < 0.05),而CFU-GM明显增高(P< 0.05);对照组BCL-2蛋白表达率为77.92％±22.50％,ASPO组于培养的第3天为54.05％±20.20％(P<0.01)和第6天为55.35％±22.74％(P<0.05)均显著低于对照组。因此认为BCL-2ASPO具有选择性地抑制白血病细胞的增殖和BCL-2蛋白的表达的作用。     

基于p62/SQSTM1-luciferase的细胞自噬水平检测方法的建立及鉴定

自噬是细胞依赖溶酶体对大批量蛋白质和细胞器进行降解的一条重要途径。目前已发现很多基因和自噬过程相关,但是对自噬过程的分子机制尚未明了,因此建立自噬检测方法进行新的自噬相关分子的鉴定显得尤为重要。构建了选择性自噬底物p62/SQSTM1(Sequestosome 1)和萤火虫荧光素酶报告基因融合表达的重组质粒,通过检测细胞内荧光素酶的活性来分析细胞自噬流,建立了一个简单且适用于通量化筛选的细胞自噬检测方法,为进一步的高通量自噬分子的筛选奠定了基础。     

跨膜蛋白TMEM106A诱导肝癌细胞HepG2巨泡样死亡

跨膜蛋白106A (transmembrane protein 106A, TMEM106A)是本中心首先鉴定的与细胞死亡相关的分子。体内外的功能研究证明,TMEM106A在胃癌细胞的高表达能够明显抑制肿瘤细胞的生长,并诱导细胞死亡。本研究利用组织芯片和免疫组化的方法,发现TMEM106A蛋白在癌旁非肿瘤组织中高表达,主要定位在胞质,而在肝癌细胞中低表达或者不表达。进一步的功能研究证明TMEM106A在肝癌细胞系HepG2中高表达能够降低细胞活力、诱导胞质空泡化以及细胞周期阻滞在G2/M期,最终细胞死亡。胞质聚集的空泡表现为单层膜,液泡内基本不含亚细胞器结构以及高电子密度的聚集物。本研究首次证明TMEM106A能够引起巨泡样细胞死亡,其作用机制需要进一步探讨。     

线粒体自噬

细胞自噬(autophagy)是细胞依赖溶酶体对蛋白和细胞器进行降解的一条重要途径.目前,将通过细胞自噬降解线粒体的途径称为线粒体自噬(mitophagy).最近几年的证据表明,线粒体自噬是一个特异性的选择过程,并受到各种因子的精密调节,是细胞清除体内损伤线粒体和维持自身稳态的一种重要调节机制.自噬相关分子,如“核心”Atg 复合物,酵母线粒体外膜分子Atg32、Atg33、Uth1和Aup1,哺乳细胞线粒体外膜蛋白PINK1、NIX和胞质的Parkin等,在线粒体自噬中起关键的作用. 线粒体自噬异常与神经退行性疾病如帕金森氏病（Parkinson’s disease,PD）的发生密切相关. 本文就线粒体自噬的研究进展做简要的介绍.     

腺病毒介导的EMC6基因通过下调FAK信号通路抑制胃癌细胞迁移

内质网膜蛋白复合物亚单位6（endoplasmic reticulum membrane protein complex subunit 6,EMC6）,也称穿膜蛋白93 (transmembrane protein 93, TMEM93)是我们首次报道的一个人类自噬相关分子。EMC6基因进化保守,表达广泛,在胃癌组织中表达下调或缺失。本研究利用构建的重组腺病毒5型EMC6（Ad5-EMC6）载体,感染胃癌细胞系BGC823和SGC7901,分析了其在肿瘤细胞的表达以及抗肿瘤活性。研究证明, Ad5-EMC6能够显著抑制胃癌细胞的克隆形成、细胞划痕修复、以及迁移和侵袭的能力。进一步的研究提示,Ad5-EMC6能够降低胃癌细胞局部黏着斑激酶（FAK）的Y576/577磷酸化水平,FAK下游的基质金属蛋白酶MMP2和MMP9的蛋白质水平也同时下调。在裸鼠的腹膜扩散模型中,Ad5-EMC6处理组的小鼠腹膜结节数量明显减少或缺失。这些研究数据提示, Ad5-EMC6介导的FAK信号灭活可能是其抑瘤活性的机制之一,其分子机制还需要进一步探讨。     

重组自噬标志分子LC3的抗血清制备

自噬（autophagy）是胞内蛋白等大分子或细胞器直接或间接与溶酶体结合,从而得以降解的过程.微管相关蛋白1轻链3-β（microtubule associated protein 1 light chain 3 β, MAP1LC3-Ⅱ,简称LC3）,是在高等真核细胞中发现的第一种自噬体膜蛋白,可以作为自噬的标志性分子用于检测自噬活动.为深入研究自噬的发生过程及其与健康和疾病的关系,通过构建pET28a(+)-LC3原核表达系统,应用多聚组氨酸结合树脂分离和纯化了重组LC3蛋白,以该蛋白为免疫原制备了抗LC3的抗血清,并利用HeLa细胞自噬模型采用Western印迹方法对该抗血清的特性进行了鉴定.结果显示,兔抗LC3抗血清同时可以识别LC3的2个亚型LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ,且可清晰检测到自噬发生时LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化,表明该血清可以用于自噬的检测.     

时辰对免疫功能的影响

生物依时间因素而呈现周期性的节律活动是牛物界的一种普遍规律。本实验就时辰对小鼠和豚鼠免疫功能的影响进行了观察。 健康昆明种小鼠48只,体重20～24g,随机分组,每组8只。豚鼠21只,体重240～300g,随机分组,每组6～8只,动物均为本院动物室提供。试验Ⅰ组的时间为10时,试验Ⅱ组的时间为16～20时。     

朝鲜族儿童少年体型发育探讨

为探讨我国朝鲜族儿童少年体型发育的特点与规律,应用Heath-Carter体型法,对延边地区3546名7－15岁的城乡朝鲜族儿童少年的体型进行了调研。结果表明：城市组在中因子,农村组在内因子方面各占优势;在三角型体型图上和13种体型分布比例上均具有明显的性别特点。随着年龄的增长,男孩体型变化较小。大多属中胚层体型,女孩体型变化较大。与国内外有关资料相比,朝鲜族男孩的中因子值较高,内因子值较低,外因子值居中等水平。     

跨膜蛋白TMEM106A诱导肝癌细胞HepG2巨泡样死亡北大核心CSCD

跨膜蛋白106A(transmembrane protein 106A,TMEM106A)是本中心首先鉴定的与细胞死亡相关的分子。体内外的功能研究证明,TMEM106A在胃癌细胞的高表达能够明显抑制肿瘤细胞的生长,并诱导细胞死亡。本研究利用组织芯片和免疫组化的方法,发现TMEM106A蛋白在癌旁非肿瘤组织中高表达,主要定位在胞质,而在肝癌细胞中低表达或者不表达。进一步的功能研究证明TMEM106A在肝癌细胞系Hep G2中高表达能够降低细胞活力、诱导胞质空泡化以及细胞周期阻滞在G2/M期,最终细胞死亡。胞质聚集的空泡表现为单层膜,液泡内基本不含亚细胞器结构以及高电子密度的聚集物。本研究首次证明TMEM106A能够引起巨泡样细胞死亡,其作用机制需要进一步探讨。