蓝猪耳小孢子发生和雄配子体发育

利用常规石蜡切片和超薄切片技术研究蓝猪耳(Torenia fournien)小孢子发生和雄配子体发育过程.蓝猪耳雄蕊4枚,花药具4个花粉囊.小孢子母细胞经减数分裂成四分体,其排列方式为四面体形或左右对称形.成熟花粉属2细胞型,具3个萌发孔.花药壁发育为双子叶型,腺质绒毡层.小孢子母细胞在四分体时期频繁出现细胞质降解的异常现象,其它发育阶段均正常;小孢子母细胞不正常的减数分裂可能导致花粉败育,这可能是蓝猪耳结实率低的原因之一.     

蓝猪耳卵细胞和合子的分离

蓝猪耳(Torenia fournieri)胚囊部分裸露出胚珠,在光学显微镜下能清楚观察到卵细胞和助细胞的形态结构.用解剖和酶解-解剖两种方法都能分离出生活卵细胞.用前种方法机械分离出的卵细胞数量较少(5%),但避免了酶对配子识别研究的干扰.在后种方法中加入0.1%纤维素酶和0.1%果胶酶既能使分离更加容易操作,又对卵细胞没有致命伤害,能在短时间内分离出较多的卵细胞(18%).用酶解-解剖方法也可分离出授粉14 h后的合子细胞.     

孕康口服液对肾虚-黄体抑制型先兆流产大鼠的安胎作用

目的:孕康口服液为已上市中成药,为进一步评价其药效,本实验通过建立肾虚-黄体抑制型先兆流产模型,观察孕康口服液的安胎作用。方法:60只妊娠大鼠随机分为正常对照组(NC),模型组(MG),地屈孕酮组(DT,3.02 mg/kg),孕康口服液低剂量组(YK-L,4 ml/kg)、中剂量组(YK-M,6 ml/kg)、高剂量组(YK-H,9 ml/kg),每组10只。自妊娠第1日,每日上午各给药组按规定剂量灌予受试药,NC组、MG组给予等体积的纯化水,连续10 d;每天下午灌胃造模,除NC组给予纯化水外,其余各组按450 mg/kg体质量灌胃羟基脲,连续9 d,第10日按4.0 mg/kg体质量灌胃米非司酮。妊娠第9日,测定各组大鼠背温、抓力、痛阈、自主活动等行为体征;妊娠第11日,各组腹主动脉取血,测定血清雌二醇(E₂)、孕酮(P)、血栓素B₂(TXB₂)水平;摘取卵巢、连胎子宫,观察胚胎个数和直径,计算卵巢、连胎子宫指数。结果:与NC组比较,MG组背温、抓力、痛阈、自主活动次数、胚胎个数、胚胎直径、连胎子宫指数和血清E₂、P、TXB₂水平均显著降低(P＜0.05,0.01)。与MG组比较,孕康口服液各剂量组背温、抓力、胚胎个数、胚胎直径和血清E₂、P水平均显著升高(P＜0.05,0.01);YK-M、YK-H组痛阈、自主活动、连胎子宫指数显著升高(P＜0.05);YK-H组血清TXB₂水平明显升高(P＜0.05)。结论:孕康口服液对肾虚-黄体抑制导致的先兆流产大鼠具有明确的补肾安胎作用,其机制可能与升高血清E₂、P、TXB₂水平,改善肾虚体征和提高胚胎质量有关。     

蓝猪耳精细胞的分离及两个精细胞群体的收集

蓝猪耳是二细胞型花粉,生殖细胞在花粉管中分裂形成两个精细胞。用体内-体外技术培养出花粉管后,将其置于爆破液中即可释放出花粉管内含物,其中包括两个精细胞和营养细胞。在显微镜下两个精细胞具二型性：体积较大的精细胞与花粉管的营养核相连,体积较小的精细胞只与大精细胞连接。两个精细胞之间的连接比较结实,需用微量酶液将两个精细胞分开。用显微操作仪就可分别挑选出两个精细胞群体,分别有上百个细胞。蓝猪耳精细胞的成功分离为利用蓝猪耳开展离体受精研究打下了良好的基础。这种单一纯化的精细胞群体的获得为用分子生物学方法区分两个精细胞的特异基因和蛋白质创造了条件。     

蓝猪耳受精生物学研究进展

蓝猪耳(Torenia fournieri L.)胚囊半裸露,在光学显微镜下能清楚观察到卵细胞、助细胞及部分中央细胞的形态结构,有助于原位观察卵细胞在受精前后的变化状态,被认为是研究被子植物体内受精机理的一种模式植物。综述了蓝猪耳的受精机理:花粉管定向进入胚囊的方式与机理、钙在受精过程中的作用、受精前后胚囊细胞骨架的动态变化。简要介绍了离体受精技术在蓝猪耳受精生物学中的发展应用。根据前人对蓝猪耳的研究成果并结合我们的研究,指出蓝猪耳在受精生物学中的应用,特别是借助离体受精技术平台,将具有更大的研究前景。     

烟草花粉萌发和花粉管生长期间柱头和花柱中的钙分布

烟草柱头表面有两层覆盖物,其中含有少量细小的钙颗粒.花粉落到柱头上后,储存在花粉外壁中的钙被释放到覆盖层中.当花粉管穿过覆盖层长入柱头细胞之间时,花粉管顶端的细胞壁中出现了大量的细小钙颗粒.开花后22 h观察时,在花柱引导组织中形成了钙的梯度分布:花柱上部引导组织中的钙较少,而下部连接子房处的花柱引导组织中含有较多的钙颗粒.去雄花开花后1 d时,花柱上部引导组织中的钙明显增多;3 d时,连柱头细胞中也出现了较多的钙颗粒.讨论了烟草花柱引导组织中钙梯度分布和花粉管生长的关系.     

孕康口服液对胚胎着床障碍大鼠的安胎作用

目的：通过建立胚胎着床障碍致流产模型,探讨已上市中成药孕康口服液的安胎作用。方法：将妊娠大鼠分为6组：正常对照组（NC）,模型组（MG）,地屈孕酮组（DT）,孕康口服液低、中、高3个剂量组（YK-L、YK-M、YK-H）,每组11只。自妊娠第1日起,每天灌胃给药,DT组灌胃剂量为3.02 mg/kg,孕康口服液各组灌胃剂量分别为4、6、9 ml/kg,NC组、MG组给予等体积的纯化水,连续10 d。妊娠第3日,除NC组外,其余各组按5 mg/kg体质量颈背部皮下注射米非司酮造成胚胎着床障碍模型。妊娠第10日,各组腹主动脉采血,酶联免疫法测定血清卵泡刺激素（FSH）、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素（IL-4）;取连胎子宫观察胚胎着床数目,HE染色观察子宫病理变化。结果：与NC组相比,MG组胚胎着床数目和血清FSH、IL-4水平均显著降低（P<0.05,0.01）,并出现子宫腺上皮增生、腺腔内炎性细胞浸润等病理变化。与MG组相比,YK-M、YK-H组均能显著性升高胚胎着床数目和血清FSH、IL-4水平（P<0.05,0.01）;孕康口服液各剂量组均能明显改善模型大鼠子宫腺上皮增生、腺腔内炎性细胞浸润等病理变化。各组间血清IFN-γ水平无明显差异。结论：孕康口服液可能通过升高胚胎着床障碍大鼠血清性激素FSH和免疫细胞因子IL-4水平,改善子宫内膜病理变化,提高胚胎着床数目,从而发挥安胎作用。