肝细胞培养方法研究进展

离体肝细胞的培养可以简化分析肝细胞功能,为肝脏的生理、病理以及药理的研究提供材料。特别是近年来的长期肝细胞培养技术使离体肝细胞较 成功地再现了肝脏的功能、形态以及对刺激的反应能力,为进一步的研究提供了条件。离体肝细胞的培养涉及到肝细胞的分离、纯化和培养液的成分等多方面。本文就国内外肝细胞分离、培养的各种方法的创立、发展、成熟及其应用作一综述。     

非转座子载体介导的稳定转化家蚕BmN细胞表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

为了建立非转座子载体介导的持续表达外源基因的转化家蚕BmN细胞系,将家蚕核型多角体病毒极早期基因(ie-1)启动子控制的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因的表达盒克隆至pIZT/V5-His,获得重组载体pIZT-IE-hGM-CSF,该载体转染家蚕BmN细胞后,通过博莱霉素(Zeocin)筛选获得了稳定转化细胞系IE-hGM-CSF。转基因细胞基因组经PCR鉴定,成功检测到ie-hGM-CSF,Western blotting分析结果显示转化细胞表达的重组hGM-CSF的大小为22kDa,ELISA检测结果显示hGM-CSF在转化细胞系里的表达水平大约为2814.7pg/106个细胞。